Научно-методические основы оценки влияния возбудителей холеры, чумы и туляремии на адаптационно-компенсаторные реакции биомоделей

• Автор: Бугоркова, Светлана Александровна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 307 с. : 30 ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА I МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

1.1. Объекты исследования

1.2. Материалы

1.3. Методы исследования

ГЛАВА II ОЦЕНКА ВЛИЯНИЯ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ НА ОРГА

НИЗМ БИОМОДЕЛИ

2.1. Аналитический обзор

2.2. Изучение влияния штаммов V скоегае О серогруппы на адаптационнокомпенсаторные реакции макроорганизма
2.2.1. Фенотипическая и генотипическая характеристика штаммов холерных вибрионов серогруппы
2.2.2. Морфометрический анализ изменений в организме крольчатсосунков, зараженных холерными вибрионами серогруппы
2.3. Структурнофункциональный анализ изменений у кроль чатсосунков, зараженных холерными вибрионами серогруппы
2.3.1. Характеристика штаммов холерных вибрионов серогруппы
2.3.2. Морфофункциональная характеристика апудоци тов и клеток эффекторной зоны иммунной системы кишечника у крольчатсосунков, зараженных холерными вибрионами серогруппы
2.4. Совершенствование схемы оценки влияния холерных виб риоиов на организм крольчатсосунков
2.5. Воспроизведение экспериментальной холерной инфекции на модели взрослых кроликов
2.5.1. Характеристика штаммов V. , используе мых для воспроизведения экспериментального инфекционного процесса и его мониторинг
2.5.2. Методические основы комплексной оценки тяже сти течения экспериментальной инфекции на модели взрослых кроликов
ГЛАВА III РЕКОМБИНАНТНЫЕ ШТАММЫ ХОЛЕРНОГО ВИБРИОНА
КАНДИДАТЫ В ЖИВЫЕ ХОЛЕРНЫЕ ВАКЦИНЫ. ХАРАКТЕРИСТИКА ИХ БЕЗОПАСНОСТИ БЕЗВРЕДНОСТИ И ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ ЭФФЕКТИВ1 ГОСТИ
3.1. Аналитический обзор
3.2. Комплексное исследование влияния рекомбинантного
штамма холерного вибриона серогруипы на организм биомодели
3.2.1. Характеристики рекомбинантного штамма Vii I
3.2.2. Морфофунктшональная характеристика клеток системы у взрослых кроликов при введении
V КМ
3.2.3. Изменения, вызываемые V КМ 4 у крольчатсосунков
3.2.4. Оценка эффективности зашиты экспсрименталь ных животных, иммунизированных V. КМ 4, от холерной инфекции
3.3. Анализ изменений у биомоделей при введении рекомби
нантного штамма холерного вибриона серогруипы
3.3.1. Характеристика рекомбинантного штамма 8 V. КМ
3.3.2. Особенности реакций функциональных систем 9 биомодели на внутри кишечное введение холерных вибрионов штамма У.скоегае КМ
3.3.3. Инфекционный процесс у биомоделей, предвари ПО тельно иммунизированных холерными вибрионами штамма У.скоегае КМ
3.3.4. Ультрамикроскопичсский анализ реакций макро 6 организма на холерные вибрионы рекомбинантных штаммов и серогрупп
ГЛАВА IV КОМПЛЕКСНАЯ ОЦЕНКА ВЛИЯНИЯ ВИРУЛЕНТНЫХ 0 ШТАММОВ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ НА ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ СИСТЕМЫ ОРГАНИЗМА ПРЕДВАРИТЕЛЬНО ИММУНИЗИРОВАННЫХ ПРОТИВ ХОЛЕРЫ БИОМОДЕЛЕЙ
4.1. Аналитический обзор
4.2. Исследование клеток нейроэндокринной системы организ
ма для характеристики эффективности защиты лабораторных животных от экспериментальной холерной инфекции
4.3. Харакгеристика инфекционного процесса у биомодслей,
предварительно иммунизированных противохолерными препаратами на основе теней клеток холерных вибрионов
серогруппы
4.4. Морфометрический анализ изменений у животных, пред
варительно иммунизированных противохолерными препаратами на основе теней клеток холерных вибрионов серогруппы
ГЛАВА V ПРИМЕНЕНИЕ КОМПЬЮТЕРНЫХ СИСТЕМ В КОМПЛЕКС 0 НОЙ ОЦЕНКЕ БЕЗОПАСНОСТИ БЕЗВРЕДНОСТИ И ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРОТИВОХОЛЕРНЫХ ВАКЦИН НА ЭТАПАХ ДОКЛИНИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ
5.1. Предпосылки для формирования научнометодической ос 1 новы комплексных доклинических исследований противохолерных вакцин
5.2. Усовершенствование схемы оценки качества противохо 4 лерных вакцин
ГЛАВА VI МОРФОМЕТРИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ЭКСПЕРИМЕН
ТАЛЬНОГО ИНФЕКЦИОННОГО ПРОЦЕССА, ОБУСЛОВЛЕННОГО ВОЗБУДИТЕЛЯМИ ЧУМЫ И ТУЛЯРЕМИИ
6.1. Аналитический обзор
6.2. Изучение влияния . i на адаптационно 3 компенсаторные процессы в организме лабораторных белых мышей
6.2.1. Характеристика штаммов i, используемых в 3 исследовании
6.2.2. Морфометрический анализ изменений в организ 7 ме биомодели при экспериментальной чуме
6.3 Отбор морфометрических маркеров тяжести течения пато
логического процесса при чуме на модели морских свинок
6.4 Характеристика течения чумного инфекционного процесса
на фоне предварительной иммунизации биомоделей против этой инфекции
6.5 Возможность применения морфометрического анализа для
оценки степени тяжести течения экспериментальной тулярсмийной инфекции
6.6 Оценка влияния вирулентных культур . i на ха
рактер изменений у предварительно иммунизированных против туляремии биомоделей
ГЛАВА VII РЕАКЦИИ ФУНКЦИОНАЛЪНЬ1Х СТРУКТУР ОРГАНИЗМА
БИОМОДЕЛЕЙ НА ВВЕДЕНИЕ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ЧУМЫ И ТУЛЯРЕМИИ
7.1. Аналитический обзор
7.2. Влияние вакцинного штамма ii i V линии
НИИЭГ на клетки системы ряда функционально значимых органов биомоделей
7.4.
7.6.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Динамика формирования адаптационнокомпенсаторных 2 процессов у биомоделей при аэрогенном способе введения вакцины У. реБПБ ЕУ линии НИИЭГ
Морфомстричсская характеристика состояния иммуно 3 компетентных органов у морских свинок, ревакцинированных противочумными препаратами
Комплексное исследование аттенуированного штамма 0 Кдодо М на морских свинках
7.5.1. Культуральноморфологические и биохимические 0 свойства штамма V резШ М
7.5.2. Приживаемость и распространяемость У.реэШ 1 штамма М в организме морских свинок при подкожном заражении
7.5.3. Сравнительная характеристика адаптационно 3 компенсаторных реакций в организме биомоделей, иммунизированных культурами штамма У.резШ М
Реакция клеток АР Лсистемы и морфометрическая ха 7 рактсристика изменений в органах биомоделей при введении культур вакцинного штамма ЕЛиагею1ь НИИЭГ Методические аспекты применения морфомстрических 8 исследований при доклинической оценке качества вакцин против чумы и туляремии
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Фолликулы без светлых центров считали неактивными 0 баллов. При оценке активности Взон мозговых тяжей, а также Тзон паракортикальных учитывати отсутствие 0 баллов или натичие гиперплазии клеток в них, и характер их состава. Преобладание бластных форм 3 балла смешанный состав бласты и неактивированные лимфоциты, либо зрелые плазматические клетки 2 балла преобладание пеактивированных клеток с малым числом бластных элементов 1 балл. Аналогичный подход применяли и для оценки активности Т и Взон в селезенке, где нарастание гиперпластической активности, как и в лимфатических узлах, может сопровождаться увеличением размеров этих структур. Состояние паренхиматозных клеток оценивали по изменению ядерноцитоплазматичсского индекса ЯЦИ, деструктивного индекса ДИ, определяемого по удельному весу в клеточной популяции элементов с проявлениями цитопатологии. Функциональное состояние дыхательной системы характеризовали по изменению перфузионно вентиляционного отношения ПВО Бонашевская Т. П. и др. Для выявления взаимосвязанной оценки отдельных звеньев гомеостаза, конкретные морфометрическис параметры представляли в виде разработанных нами ассоциаций показателей в форме различных индексов. И стресс. Шкоры мозг. Шкоры ширина коркового, Шмозг ширина мозгового вещества надпочечников у исследуемой биомодели. Коэффициент адаптации Кздап. Истресс. Истрсссонтр. Исфссс. ИС7рссс. МЭЯ па ядер эпителиоиитов , . КА опыт. КС опыт, контроль
где Иса индекс секреторной активности, определяемый отношением числа клеток, содержащих КМПС к сумме клеток содержащих НМПС и смешанный продукт реакции, выраженный в процентах. При выполнении морфометрического исследования строго следовали принципу соблюдения стандартных условий забора и фиксации материала, приготовления и окраски срезов, определения учитываемых параметров. Для электронномикроскопического исследования кусочки кишечника животных размером приблизительно 2 мм3 фиксировали в 2,5 ом растворе глутаральдегида на какодилатном буфере в течение ч и дофиксировали 1 ым осмиевым фиксатором в течение 1 ч. Затем помещали в спирты восходящей концентрации на мин в каждую порцию. Фиксирующие растворы и спирты применяли в охлажденном до температуры 4 С состоянии. Дальнейшую обработку материала проводили по общепринятой для электронной микроскопии схеме Уикли Б. Рейнольдсу , и просматривали в электронном микроскопе 7. Статистические методы Статистическую обработку полученных данных осуществляли, следуя соответствующим рекомендациям Ашмарин И. П., Воробьев , Бессмертный Б. С., . Графическую обработку результатов выполняли с помощью программы i i x . Морфометрические характеристики, полученные с помощью программы Дснситоморфометрия версия 2. ГЛАВА II. Холера продолжает оставаться у1розой для мирового сообщества. Начало XXI века характеризуется продолжающимися вспышками болезни в странах Африки и Азии, заносами этой инфекции на территории сопредельных государств Онищенко Г. Г, Онищенко Г. Г. и др. Согласно Международным медикосанитарным правилам . Выяснение закономерностей формирования пусковых механизмов при развитии болезни, расшифровка основных этапов взаимодействия микро и макроорганизма, сопровождающихся формированием характерных морфологических изменений в органах и тканях последнего, способствуют накоплению новых знаний о пато и иммуногенезе инфекционного и вакцинного процессов и является залогом успешной борьбы с этой инфекцией. Вирулентность холерных вибрионов традиционно связывают с холерным токсином СТ, генетическим маркером которого являются гены x, ответственные за его продукцию и расположенные в профаге СТХср. Структура, свойства и механизмы действия СТ хорошо изучены iii , , . I., . Для развития инфекционного процесса у человека холерным вибрионам необходимы и хромосомные гены , входящие в состав острова патогенности VI1, кодирующие биосинтез пилей адгезии основного фактора колонизации i , . Смирнова Н. И., Кутырев В. В., . Мутанты, лишенные гена , проявляют на модели мышат свойства аттенуированных штаммов со сниженной способностью к колонизации кишечника i . Н.Р.