Люминесцентный микробиотест: возможные пути его оптимизации и расширение сферы использования

• Автор: Шмырина, Ирина Леонидовна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Пермь
• Количество страниц: 171 с. : ил.

Содержание

Основные обозначения и сокращения ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Феномен биолюминесценции, его механизм и связь с общим метаболизмом клетки основа люминесцентных микроб иотестов.
1.2. Фенетикопоггуляционный анализ реципиента и возможных доноров гаоперона. Свечение в различных условиях обитания.

1.3. Возможные пути оптимизации сенсоров на основе люминесцентных бактерий.

1.4. Влияние критических условий на свечение люминесцентных бактерий. 4 .

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Морфофизиологическая характеристика популяции генноинженерного штамма ii i I.

3.2. Динамика роста и свечения ii i на различных питательных средах.

3.3. Некоторые пути селекции культуры по признаку чувствительности люминесценции к токсикантам и попытка се последующей стабилизации.
3.4. Воспроизведение ряда критических состояний для ii i и возможные пути расширения сферы применения реакции ингибирования биолюминесценции.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Исследование факторов, способствующих повышению чувствительности люминесценции Е. Определение температурного оптимума воспроизведения микробиолюминесцентного теста. Расширение сферы применения реакции ингибирования свечения для оценки критических ситуаций при температурном и алкогольном шоке, а также для испытания антимикробных препаратов, в том числе антибиотиков, фаговой инфекции. Сравнительно исследованы динамика накопления биомассы, уровни общего и удельного свечения и чувствительность люминесценции к стандартным токсикантам . Показано, что клоновая селекция колоний на однотипной среде способствует получению культур с более стабильной общей и удельной люминесценцией. Определены факторы, влияющие на чувствительность . Лиофилизация препарата проведена с использованием оригинального стабилизатора и режима сушки Колибактерина. Разработаны подходы определения рабочей концентрации готового препарата, учитывающего уровень свечения и дозозависимость степени ингибирования биолюминесценции токсикантами в диапазоне средних значений шкалы Биотокса6 . Основные положения включены в заявку на патент Способ изготовления Микробиолюминесцентного Индикатора Токсичности МИТ для определения загрязнения окружающей среды Приоритетная справка от января г. Показано, что биолюминесценция может быть дополнительным критерием при оценке критических состояний культуры. Существует адекватное реагирование люминесцентной системы в ответ на физические ТШ, химические этанол, антибиотики и биологические фаговая инфекция воздействия. Предложена схема оптимизации сенсора на основе люминесцентных бактерий и разработана технология получения препарата с лучшими индикационными свойствами. Наставления по применению препарата Микробиолюминесцентного Индикатора Токсичности МИТ. Проведенные исследования способствуют расширению сферы использования реакции ингибирования биолюминесценции. Основные положения диссертационной работы доложены на конференции молодых ученыхэкологов Уральского региона Современные проблемы популяционной, исторической и прикладной экологии, Екатеринбург, Международной конференции Проблемы загрязнения окружающей среды , Москва, , Региональной конференции Проблемы экологии Уральского региона, Оренбург, Региональной конференции молодых ученых Современные проблемы экологии, микробиологии и иммунологии, Пермь, . По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ. Диссертация изложена на 1 страницах машинописного текста, иллюстрирована 8 таблицами и рисунками состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов и обсуждения, заключения, выводов, списка литературы, приложения. Список литературы включает 8 наименований работ отечественных и зарубежных авторов. Структура популяции генноинженерного штамма . определяется соотношением темпового и светящегося вариантов, имеющих особенности морфологии и физиологии. Свечение зависит от условий культивирования и типа среды. Чувствительность . Разработанная схема оптимизации сенсора, используемого в люминесцентном микробиотестировании, позволяет получать препарат с более стабильными свойствами. Реакция люминесценции служит показателем действия агентов физической, химической, биологической природы. Биолюминесценция широко распространена, хотя и в разной степени выражена среди организмов от бактерий до высших. Реакция люминесценции в бактериях включает окисление восстановленного рибофлавин фосфата Н2 и длинноцепочечного жирного альдегида с испусканием синезеленого света. i, . Эту реакцию катализирует люцифераза. Существует ряд гипотез механизма функционирования бактеришгьной люциферазы. Наиболее пропагандируемой в литературе является гипотеза Гастингса i . i, . Реакция БМЫН Е приводит к образованию интермедиата I, который, быстро взаимодействуя с одной молекулой кислорода, превращается в интермедиат II перекись дигидрофлавина. В отсутствие альдегида он распадается спонтанно, давая БМИ, Н2 Ва1пу а1. В обсуждаемой схеме и подобных ей путь назван темновым.