Липополисахарид менингококка серогруппы А : Получение, характеристика и возможная область использования

• Автор: Бобылева, Галина Васильевна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1992
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 175 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДШИЕ.

Часть I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава I. СТРОЕНИЕ И СВОЙСТВА БАКТЕРИАЛЬНЫХ ЛИПОПОЛИ

САХАРИДОВ. II

1.1. Строение клеточной стенки грамотрицатель

ных бактерий. II

1.2. Методы ввделания и очистки ДДС

1.3. Химическая структура ЛПС

1.4. Биологические овойства ЛПС

Глава 2. ОСОБЕННОСТИ ИММУННОГО ОТВЕТА НА ЛПС

АНТИГЕН И РОЛЬ СЕРОТЕРАПИИ ПРИ СЕПТИЧЕСКИХ ИНФЕКЦИЯХ, ВЫЗВАННЫХ ГРАМОТРИЦАТЕЛЬНЫМИ БАКТЕРИЯМИ
Часть 2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.
Глава 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ .
3.1. Материалы исследования .
3.1.1. Штаммы
3.1.2. Питательные среды.
3.1.3. Микробные клетки менингококков
3.1.4. Балластные осадки, полученные при производстве меяингококковой полисахаридной вакцины группы А
3.1.5. Антигены. .
3.1.6. Кроличьи иммунные сыворотки
3.1.7. Сыворотки лвдей .
3 .1.8. Препараты крови
3.1.9. Лабораторные животные.
Стр.
3.2. Методы исследования
3.2.1. Культивирование менингококка
3.2.2. Методы препаративной биохимии
3.2.3. Физикохимические методы
3.2.4. Биофизичеокие методы
3.2.5. Иммунохимические методы .
3.2.6. Серологичеокие методы .
3.2.7. Биологические методы
3.3. Статистическая обработка результатов экспериментальных исследований
Глава 4. РАЗРАБОТКА МЕТОДА ВВДЕЛЕНИЯ ОЧИЩЕННОГО ДПС
МЕНИНГОКОККА ГРУППЫ А.
4.1. Сравнительная оценка традиционных методов выделения менингококкового ЛИС и характеристика физикохимических овойотв выделенных препаратов.
4.2. Использование отходов производства менингококковой полисахаридной вакцины группы А
для ввделения ДПС.
4.3. Антигенный анализ препаратов ЛЯС менингококка группы А.
4.4. Разработка метода получения ДПС, свободного от примеси грушзоспецифического ПС . .
Глава 5. ХАРАКТЕРИСТИКА ФИЗИКОХИМИЧЕСКИХ И СЕРОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МЕНИНГОКОККОВОГО ДПС ГРУППЫ А . .
5.1. Анализ гомогенности ПС
5.2. Электрофоретические свойства менингококкового ДПС.
5.3. Характеристика серологических овойств и специфичности ДПС
Стр.
Глава 6. РАЗРАБОТКА ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДИАГНОСТЙКУМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ К ЛПС МЕНИНГОКОККА . .
6.1. Подбор оптимальных условий приготовления ЛШдиагностикума .
6.2. Специфичность, чувотвительнооть и воспроизводимость РИГА с формалянизированными эритроцитами, сенсибилизированными ЛПС .
6.3. Стабильность эритроцитарного ЛПСдиагнос
тикума .
6.4. Определение уровня специфических ЛШ
антител у больных ГФМИ.
Глава 7. РАЗРАБОТКА ПОДХОДОВ ДЛЯ СОЗДАНИЯ МШНГОКОККОВЫХ ПРОТИВОЛШОПОЛИСАХАРИДНЫХ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ7. . . . . . . . .. .
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
ЛИТЕРАТУРА


Наружная мембрана присуща только грамотрицательным бактериям. Рис. ЛПС и белка 6. Подобно другим биологическим мембранам наружная мембрана бактерий состоит из 2 слоев биомолекул и обладает амфифяльными свойствами гидрофильными на наружных поверхностях и гидрофобными внутри мембраны. Однако в отличие от других биологических мембран для наружной мембраны бактерий характерна высокая степень асимметрии 6. С другой стороны, асимметрия мембраны происходит за счет образования доменов, т. ЛПС или белка на определенных участках мембраны для выполнения свойственных им функций. Асимметричное строениенаружной мембраны, как полагают, обусловлено следующими причинами. Внешний монослой наружной мембраны контактирует с окружающей средой, которая, например, в случае кишечных бактерий представляет собой содержимое желудочнокишечного тракта о высокими концентрациями желчных кислот детергентов, протеаз, липаз, гликозидаз. Следовательно, этот слой должен быть устойчивым к действию этих агентов и предохранять бактериальную клетку от разрушения 8. Поверхность микробной клетки должна также служить барьером для действия факторов специфической и неопецифической иммунной защиты макроорганизма, таких как лизин, лизоцим, система комплемента, катионные лейкоцитарные белки и т. Внутренний монослой таких оборонительных функций не выполняет и поэтому резко отличается от наружного по составу компонентов, образующих его. Наличие ЛПС в мембране препятствует проникновению в микробную клетку ляпофильных веществ и в то же время не мешает прохождению внутрь клетки гидрофильных субстанций с небольшой молекулярной массой, необходимых для роста и питания бактерий 8. На рис. I представлена модель строения наружной мембраны, отражающая современные представления о взаимном расположении входящих в нее компонентов. При определенных условиях ЛПС может выделяться во вне клеточную среду. Освобождение эндотокоина из клетки происходит как в результате бактериального лизиса , 9, так и из нативных микробных клеток. с помощью электронной микроокопии обнаружил, что выделение ЛПС из микробной клетки в окружающую среду происходит в виде пузырьков . У менингококка способность к освобождению ЛПС i viv являетоя одним из факторов вирулентности. Показано, что штаммы менингококков, выделенные от больных с генерализованными формами менингококковой инфекции, способны выделять в окружающую среду гораздо большие количества ЛПС, чем штаммы, выделенные от носителей . Методы выделения и очистки ЛПС. Чистота микробных антигенов является необходимым условием при изучении их физических, химических и биологических свойотв, так как присутствие других бактериальных компонентов в значительной мере влияет на физичеокое состояние и биологичеокую активнооть изучаемого антигена. Первые сведения о выделении эндотоксина как индивидуального антигена относятся к м годам нашего века. НУ . В этих опытах было замечено, что экстрагируемый материал состоит из белка, углеводов и липида и обладает выраженными токсическими и иммуногенными свойствами. МоХаЖ , разработал очень мягкий метод экстракции шигеллезных и сальмонеллезных культур с помощью диэтиленгликоля и получил аналогичный комплеко, состоящий из белка, липида и полисахарида 6, 7. Т, и полисахарида 6. Однако точная химическая природа эндотоксина в этих исследованиях не была установлена. Несколько лет спустя Тсезр1га1 и ЬиЛег1а разработали метод выделения эндотокоияа в высокочищенном состоянии. Эти авторы нровели экстракцию грамотрицательных бактерий гомогенной воднофенольной смесью, содержащей фенола, при температуре С. После охлаждения смесь разделялась на два слоя верхний водный слой содержал практически свободный от белка эндотоксин и нуклеиновые кислоты, нижний фенольный слой весь белок и нерастворившийся материал. Нуклеиновые кислоты удалялись ультрацентрифугированием. Этот метод позволял выделять эндотоксин из большинства грамотрицательных бактерий в высокоочищенном и водорастворимом состоянии.