Латексная тест-система для экспресс-диагностики лептоспирозной инфекции у собак

• Автор: Шкарлат, Павел Евгеньевич
• Шифр специальности: 03.00.07, 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 127 с. : ил

ВВЕДЕНИЕ стр.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.стр.

1.1. Краткая справка о лептоспирозе.стр.

1.2. Инфицированность собак лептоспирозом в мирестр.

1.3. Этиология и эпизоотология лептоспироза собак.стр.

1.4. Роль собаки как источника возбудителей лептоспироза в эпидемическом и эпизоотическом процессахстр.

1.5. Клиническая картина лептоспироза собак.стр.

1.6. Методы диагностики лептоспирозастр.

1.7. Реакция латексагглютинации в диагностике инфекционных

заболеваний и обзор латексных диагностикумовстр.

ГЛАВА II. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.стр.

2.0. Материалы, методы исследований и место выполнения работыстр.
2.1. Характеристика используемых штаммов лептоспир и их культивирование.стр.
2.2. Получение противолептоспирозных гипериммунных сывороток.стр.
2.3. Выделение иммуноглобулинов при помощи ПЭГ и ПЭГ
2.4. Выделение иммуноглобулинов при помощи ионообменной хроматографии.стр.
2.5. Идентификация иммуноглобулинов в
иммуноэлектрофорезе.стр.
2.6. Сенсибилизация полимерных латексных носителейстр.
2.7. Постановка и учт результатов реакции латексагглютинациистр.
2.8. Определение стабильности, специфичности и чувствительности АЛД с культурами лептоспирстр.
2.9. Животные, используемые в исследованиях стр.
2 Экспериментальное инфицирование белых мышей.стр.
2 Экспериментальное инфицирование золотистых хомячковстр.
2 Экспериментальное инфицирование собак и исследование биоматериала стр.
2 Клинические испытания и методика расчета значимости тест
системы в диагностике лептоспироза собак стр.
ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯстр.
3.1. Выделение и очистка противолептоспирозных иммуноглобулинов и определение их иммунохимической чистоты.стр.
3.2. Определение оптимальных условий сенсибилизации ПЛН полученными иммуноглобулинами.стр.
3.2.1. Определение стабильности ПЛН в электролитахстр.
3.2.2. Определение оптимальной концентрация карбодиимидастр.
3.3. Результаты определения чувствительности, стабильности и специфичности АЛД с культурами лептоспир стр.
3.4. Результаты испытаний АЛД с вакцинным препаратом, содержащим лептоспирозный компонент стр.
3.5. Результаты испытаний АЛД с экспериментально инфицированной лептоспирами кровью и мочой собакстр.
3.6. Результаты испытаний АЛД с образцами биоматериала от
инфицированных животных стр.
3.6.1. Результаты испытаний АЛД с кровью экспериментально инфицированных мышейстр.
3.6.2. Результаты испытаний АЛД на моделях экспериментально инфицированных собак стр.
3.6.3. Клинические проявления лептоспироза у экспериментально инфицированных собак стр.
3.6.4. Результаты испытаний АЛД с кровью экспериментально инфицированных собак стр.
3.6.5. Результаты исследования гематологических показателей крови экспериментально инфицированных собак стр.
3.6.6. Концентрация иммуноглобулинов в сыворотке крови экспериментально инфицированных собак.стр.
3.6.7. Результаты клинических испытаний и расчта значимости
тестсистемы в диагностике лептоспироза собак.стр.
ГЛАВА IV. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВстр.
ГЛАВА V. ВЫВОДЫ.стр.
ГЛАВА VI. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ.стр.
ГЛАВА VII. ПРИЛОЖЕНИЯ
ВВЕДЕНИЕ


Диагностические препараты, созданные на основе полимерных латексных носителей ПЛИ, находят широкое применение в диагностике различных заболеваний с целью обнаружения антител Ат или антигенов Аг в различных субстратах. В ряде стран осуществляется коммерческий выпуск латексных диагностикумов. Известны диагностические препараты, созданные на основе ПЛН для индикации в РЛА возбудителей эшерихиоза ,, стрептококкоза . Анциферова Н. Г. с соавт. Относительно низкая стоимость анализа, простота и быстрота выполнения, точность и визуальный учт результатов делают РЛА незаменимой в качестве экспрессметода индикации микроорганизмов. Цель исследования. Разработка диагностической тестсистемы на основе антительных латексных диагностикумов АЛД для быстрого обнаружения антигенов лептоспир и одновременно установления их серогрупповой принадлежности. Основные задачи исследования. Дать оценку эффективности тестсистем в условиях клинических испытаний для диагностики спонтанного лептоспироза у собак. Научная новизна. Отработаны условия ковалентного связывания противолептоспирозных 1дО с карбоксильными функциональными группами полистирольных ПЛН, активированных водорастворимым карбодиимидом ВРК. Впервые на основе данной методики получена чувствительная и стабильная диагностическая тестсистема для обнаружения антигенов лептоспир непосредственно в биологических жидкостях животных и одновременного установления серогрупповой принадлежности возбудителей, не прибегая к использованию стандартных и трудоемких методов. Практическая значимость. На разработанную диагностическую тестсистему для выявления антигенов лептоспир Российским агентством по патентам и товарным знакам выдан Патент на изобретение 7 от по заявке 3 от . Комиссионные испытания в ГУ Центральной научнометодической ветеринарной лаборатории подтвердили целесообразность использования данной тестсистемы для экспрессдиагностики лептоспироза собак в практике ветеринарных лабораторий. На базе фирмы ЗАО Научнопроизводственный ветеринарный звероводческий центр выпущена опытная партия тестсистемы, которая успешно применена в технологических целях при изготовлении поливалентной вакцины, содержащей лептоспирозный компонент. Результаты проведнных исследований используются в ходе лабораторных занятиях со студентами медицинского факультета РУДН по теме Патогенные спирохеты. Положения, выносимые на защиту. Использование в работе метода сенсибилизации ПЛН противолептоспирозными иммуноглобулинами путм ковалентного связывания аминогрупп иммуноглобулинов с карбоксильными функциональными группами на поверхности частиц ПЛН, активированными водорастворимым карбодиимидом, позволяет получить антительный латексный диагностикум максимальной активности. На основе полимерных латексных носителей разработана тестсистема для диагностики лептоспирозной инфекции у собак, вызванной спирохетами вида . Ii. Показана возможность использования латексной тестсистемы в технологических целях при изготовлении вакцин. Апробация диссертационного материала. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на Всероссийской научнопрактической конференции, посвященной летию Всероссийского научноисследовательского и технологического института биологической промышленности, Щелково, 2 ООО на Всероссийской научной конференции Биомедицинские технологии, Москва, в , , годах на семинарах кафедры микробиологии медицинского факультета РУДН, Москва, , на VI Международном Ветеринарном Иммунологическом Симпозиуме Ii Vi I i, , , а так же на ежегодной конференции Общества Клинических Микробиологов i ii iii Национального Университета Ирландии i ivi I, , . По результатам исследований опубликовано 9 научных работ и получен патент на изобретение. Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, трх глав собственных исследований объектов и методов исследования, результатов исследования, обсуждения результатов, а так же выводов, списка литературы и приложений. Работа изложена на 2 странице печатного текста, включает таблиц и 9 рисунков. Список использованной литературы включает 6 наименований, из них иностранных авторов.