Исследование условий, влияющих на образование фактора сосудистой проницаемости в культурах холерных вибрионов

• Автор: Бугоркова, Татьяна Васильевна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 167 c. : ил

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ 5

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ9

Экзотоксин холерных вибрионов и

методы определения его активности .

1. Свойства холерного экзотоксина 9

2. Методы определения токсигенной активности

холерных вибрионов

ГЛАВА П. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

Материалы.

Методы исследования.

1. Методика культивирования холерных
вибрионов
2. Изучение культуральных свойств .
3. Биохимические реакции .
4. Гистологические методы исследования .
5. Методика получения гомогенатов .
6. Методика получения фильтратов культур холерных вибрионов
7. Биологические методы исследования
ГЛАВА Ш. ХАРАКТЕРИСТИКА МЕСТНОЙ РЕАКЦИИ ПРИ ВНУТРИКОШНОМ ВВЕДЕНИИ ЖИВЫХ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ И НЕКОТОРЫХ ИХ АНТИГЕНОВ .
1. Сравнительное изучение кожной реакции при введении живых холерных вибрионов, фильтратов их
жидких культур и убитых клеток
2. Выживаемость холерных вибрионов в коже
кролика.
Стр.
3. Специфичность кожной реакции при внутрикожном введении живых холерных вибрионов
4. Динамика морфологических изменений при внутрикожном введении живых холерных вибрионов .
ГЛАВА 1У. ВЛИЯНИЕ РАЗЛИЧНЫХ УСЛОВИИ КУЛЬТИВИРОВАНИЙ
НА ТОКСИГЕННОСТЬ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ .
1. Культивирование холерных вибрионов на мембрано
агаре
2. Морфология клеток холерных вибрионов, выращенных на мембраноагаре .
3. Влияние температуры культивирования на образование фактора холерных вибрионов
4. Значение среды культивирования для синтеза
фактора ПФ холерными вибрионами .
5. Влияние ионов железа и магния на продукцию
фактора ПФ холерными вибрионами
6. Влияние адениннуклеотидов, гиалуроновой и ацетилнейраминовой кислот на синтез фактора ПФ в
клетках холерных вибрионов .
7. Влияние пепсина, трипсина, липазы, амилазы,
ДНКазы, РНКазы и гиалуронидазы на токсиген
ность холерных вибрионов
8. Влияние экстрактов ткани тонкой и толстой кишки человека и кролика на синтез холерными вибрионами фактора ПФ
ГЛАВА У. ВЛИЯНИЕ НЕКОТОРЫХ МОЛЕКУЛЯРНЫХ КОМПОНЕНТОВ
КЛЕТОК ЖИВОТНЫХ НА АКТИВНОСТЬ ФАКТОРА ПФ
I. Токсигенность холерных вибрионов при совместном введении их с некоторыми низкомолекулярными веществами и биополимерами
Стр.
2. Влияние некоторых низкомолекулярных и ыакромолекулярных компонентов клеток животных на активность препаратов холерного экзотоксина .
ГЛАВА У. МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФАКТОРА Ш В ЖИВЫХ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНАХ И ЕЕ ПРАКТИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ . 7
1. Методика определения фактора ПФ в живых
холерных вибрионах 7
2. Характеристика различных штаммов холерных
вибрионов по продукции фактора ПФ . 8
3. Применение методики определения фактора ПФ в
живых вибрионах для оценки их вирулентности .4
ЗАКЛШЕНИЕ 9
ВЫВОДЫ 9
ЛИТЕРАТУРА


Поэтоцу основное внимание ученых в последние годы было сосредоточено на выделении токсина П типа в чистом виде, изучении его структуры и реакции с макроорганизмом на клеточном, субклеточном и молекулярном уровнях. . к токсинам П типа отнес холероген и фактор проницаемости капилляров кожи. Рассматривая некоторые свойства этих токсинов, он отмечает, что холероген в фильтратах инактивируется быстрее, чем фактор сосудистой проницаемости. Методом хроматографии на колонках с ДЭАЭцеллюлозой можно элюировать три фракции I холероген 2 фракция с холерогенностью и фактором проницаемости 3 фракция только фактор проницаемости . I. В результате многочисленных исследований, выполненных в разных странах, разработаны методы сохранения токсигенных штаммов и методы получения очищенных токсинов, изучена структура его молекулы Гамалея Н. Ф., . ., М. ., . . ., . ., i . .9 i . ii . . . . . . Наумшина . ., Адамов . .. Д0 . .. СыресинаНедугова Г. Н. с соавт. . . . i . 6, i . . . . .. Ефременко В. И. с соавт. Закревский В. В. с соавт. Тихонов Н. Г. с соавт. Скавронская А. Г. с соавт. Саямов . . с соавт. СЛОЖНЫХ ТОКСИНОВ И является белковым комплексом I. . Езепчук Ю. В., Далин М. В., Фиш Н. В целом молекулярная масса экзотоксина составляет 0 дальтон. А и В . . . ii . . . I. . . . I4v i . . i . V. . Т. Компонент А молекулярная масса 0 представлен двумя полипептидными цепочками а и а, которые имеют молекулярную массу 0 и Л. i . . . . Исследованиями последних лет показано, что субъединица А синтезируется у холерного вибриона как единая полипептидная цепь i . ., . ., . А обладает токсичностью. Согласно сообщению Н. .К. Адамова дисульфидные группы участвуют в образовании токсического центра субъединицы А. Полипептиды а и холерного токсина имеют в своем составе соответственно г 3 и я аминокислот i . . . Каждый имеет по одному цистиновому остатку, содержащему сульфгидрильную группу, а вместе они соединены дисульфидной связью. Восстановление этой дисульфидной связи приводит к активации . Это подтверждают данные А. К.Адамова, Н. Г.Тихонова и дает авторам основание прдполагать, что цистеиновый остаток может находиться вблизи активного сайта i . . . Субъединица А ферментативно активна и обуславливает стимуляцию аденилатциклазы в клетках кишечника, а также в других клетках . ., I8i . . . Мелихов В. .А. v i . А после действия на клетку i . ., . Субъединица В молекулярная масса 0, состоящая из полипептидных цепей Далин М. Ф., Фиш Н. Г., , Адамов А. К., Ефременко В. И., , не обладает токсигенностыо. По данным . I. у фактора проницаемости, полученного из фильтрата культуры холерного вибриона штамма 9В на сефадексе 0 и 0, соотношение ь цепей молекулярная масса и Нцепей молекулярная масса 0 21, диссоциация была лучшей при 3,5, при этом Нцепи элюировались быстрее. Авторы считают, что молекула, состоящая из 7 субъединиц и I Нсубъединицы представляет собою молекулу экзотоксина. Последующие авторы установили, что в субъединице В содержится 45 цепей v i . . . . . i . V. . А.К. Адамов , обобщив данные ряда исследователей . . . . I. Наумшина . . с соавт. Адамов . ., Тихонов Н. Г., , пришел к заключению, что холерный вибрион образует два типа термолабильных экзотоксинов энтеротоксин и мембранотоксин. Энтеротоксин по его расчетам имеет формулу АД В пользу существования двух типов холерных экзотоксинов имеется ряд фактов Адамов А. К., , однако, большинство исследователей считают, что холерные вибрионы синтезируют один токсин, который в зависимости от места введения проявляет энтеротоксическое свойство или свойство увеличивать проницаемость кожных капилляров.