Идентификация и типирование Listeria monocytogenes на основе особенностей полиморфизма и экспрессии генов факторов патогенности

• Автор: Карпова, Татьяна Игоревна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 98 с.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1 Особенности биологии и экологии листерий и их значение в распространении пищевого листериоза

2.1.1 Общая характеристика и таксономия листерий

2.1.2 Биология возбудителя

2.1.3 Факторы патогенности листерий и их роль при взаимодействии с макроорганизмом.

2.1.4 Регуляция экспрессии факторов патогенности.

2.1.5 Резистентность к температуре и другим факторам внешней среды.

2.1.6 Листериоз как пищевая инфекция.

2.1.7 Листерии в продуктах питания.

2.2 Методы лабораторной диагностики и идентификации листерий

2.2.1 Серологическая диагностика
2.2.2 Бактериологическая диагностика
2.2.3 Идентификация культур.
ГЛАВА 3 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
3.1 Использованные штаммы
3.2 Микробиологические методы
3.2.1 Условия культивирования
3.2.2 Выделение листерий из продуктов питания
3.2.3 Идентификация клонов, выделенных из продуктов
питания бактериологическими методами.
3.2.4 Приготовление сред и определение лецитиназной активности.
3.3 Молекулярногенетические методы.
3.3.1 Приготовление лизатов клеток листерий для проведения ПЦР
3.3.2 Полимеразная цепная реакция.
3.3.3 Осаждение продукта ПЦР для последующего анализа
3.3.4 Рестрикционный анализ ПЦРРА.
3.3.5 Приготовление образцов для секвенирования
ГЛАВА 4 РЕЗУЛЬТАТЫ
4.1 Размножение листерий в молочных продуктах
4.2 Отработка методики выделения листерий из продуктов питания
4.2.1 Проверка различных селективных питательных сред
4.2.2 Выделение листерий из продуктов питания и дальнейшая идентификация общепринятыми микробиологическими методами
4.2.3 Идентификация листерий методом ПЦР.
4.3 Разработка метода лецитиназной активности.
4.4 Типирование ii на основе полиморфизма
генов факторов патогенности.
4.4.1 Анализ штаммов . в ПЦР.
4.4.2 Рестрикционный анализ фрагмента, полученного в ПЦР
4.4.3 Определение сайтов изменчивости у полученных групп
ГЛАВА 5 ОБСУЖДЕНИЕ.
ГЛАВА 6 ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


ГЛАВА 1 ВВЕДЕНИЕ. ГЛАВА 2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Факторы патогенности листерий и их роль при взаимодействии с макроорганизмом. Регуляция экспрессии факторов патогенности. Резистентность к температуре и другим факторам внешней среды. Листериоз как пищевая инфекция. Листерии в продуктах питания. Идентификация культур. ГЛАВА 3 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. Приготовление сред и определение лецитиназной активности. Молекулярногенетические методы. Полимеразная цепная реакция. Рестрикционный анализ ПЦРРА. Идентификация листерий методом ПЦР. Разработка метода лецитиназной активности. Анализ штаммов . ПЦР. ГЛАВА 5 ОБСУЖДЕНИЕ. ГЛАВА 6 ВЫВОДЫ. Структура инфекционной патологии человека за последние десятилетия двадцатого века претерпела существенную эволюцию, обусловленную как открытием целого ряда неизвестных ранее инфекционных агентов, так и изменением роли и удельного веса хорошо известных ранее возбудителей. Ко второй группе в полной мере можно отнести листерии. Хотя упомянутые микроорганизмы давно известны эпидемиологам, бактериологам и инфекционистам, в последние годы заметно расширился удельный вес вызываемых ими инфекций, равно как и спектр их клинических проявлений. Этому способствовал, с одной стороны, существенный прогресс в области лабораторной и клинической диагностики, с другой антропогенная трансформация внешней среды, повлиявшая на условия репродукции возбудителя, пути передачи инфекции и восприимчивость к ним групп риска человеческой популяции, прежде всего, с различными видами иммунодефицитов. Ежегодно в нашей стране только официально регистрируется около 0 0 тысяч случаев кишечных инфекций с пищевым путем передачи. В то же время, это лишь небольшая часть, поскольку отсутствуют или слабо внедряются в практику современные методы лабораторной диагностики ротавирусных инфекций, листериоза, пищевого клостридиоза, кампилобактериоза, кригггоспороидоза и др. Анализ эпидемиологической ситуации с листериозом в нашей стране и мире свидетельствует, что в основе эпидемиологического надзора за листериозом должен лежать жесткий регламент содержания ii в сырье и продуктах животного происхождения, птице, рыбе в качестве гигиенического требования к качеству и безопасности пищевых продуктов. Цель работы на основе изучения особенностей полиморфизма и экспрессии генов факторов патогенности разработать методы быстрой идентификации и типирования листерий и включить их в схему оценки микробиологической безопасности продуктов питания. Отработать оптимальную методику выделения и получить коллекцию штаммов листерий из продуктов питания. Разработать эффективные методы видовой идентификации листерий, используя особенности экспрессии генов факторов патогенности. Оценить возможность включения разработанных методов в современную схему мониторинга микробиологической безопасности продуктов питания. Разработать метод типирования листерий на основе изучения особенностей геномного полиморфизма. ПДРФ выявлено существование двух филогенетических линий у вида . Материалы диссертации доложены на Всероссийской конференции с международным участием Пробиотики и пробиотические продукты в профилактике и лечении наиболее распространенных заболеваний человека Москва, апреля IV международной конференции МАКМАХ Антимикробная терапия Москва, июня VIII съезде Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов Москва, марта .