Выявление эпидемически значимых холерных вибрионов с использованием аффинных магносорбентов

• Автор: Жилченко, Елена Борисовна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Ставрополь
• Количество страниц: 130 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. ПРИМЕНЕНИЕ МАГНОИММУНОСОРБЕНТОВ И ГАНГЛИОЗИДСОДЕРЖАЩИХ ДИАГНОСТИКУ МОВ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ ХОЛЕРЫ, ЕГО ЭНТЕРОТОКСИНА И АНТИГЕНОВ
1.1. Использование магноиммуносорбентов в экспрессных методах обнаружения холерных вибрионов
1.2. Тканевые рецепторы холерного энтеротоксина и их применение при конструировании диагностических препаратов

1.2.1. Ганглиозиды как специфические тканевые рецепторы холерного энтеротоксина

1.2.2. Получение и характеристика диагностических препаратов с использованием ганглиозидов для выявления возбудителя холеры и его энтеротоксина

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Характеристика штаммов, взятых в исследование

2.2. Питательные среды
2.3. Получение липогликопротеида
2.4. Получение гипериммунных кроличьих сывороток
2.5. Метод выделения иммуноглобулинов.
2.6. Количественное определение белка.
2.7. Реакция преципитации в агаровом геле.
2.8. Получение иммунопероксидазных конъюгатов
и контроль их активности.
2.9. Метод получения композиционных магноиммуносорбентов
2Оценка качества холерных магноиммуносор
бснтов.
2. .Метод получения холерогена
2Способ получения ганглиозидов
2Характеристика лабораторных животных, использованных в опытах
2Получение гангдиозидсодержащих магносорбентов
2Постановка полимеразной цепной реакции.
2Методы статистической обработки материала
Глава 3. ПОЛУЧЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА ХОЛЕРНЫХ МАГНОИММУНОСОРБЕНТОВ.
3.1. Получение холерных агглютинирующих сывороток
3.2. Способ выделения иммуноглобулинов для иммобилизации на магносорбенте.
3.3. Получение холерных магноиммуносорбентов
3.4. Оценка чувствительности и специфичности Охолерных магноиммуносорбентов.
Глава 4. КОМБИНИРОВАННОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МАГНОИММУНОСОРБЕНТОВ И ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ ХОЛЕРЫ
4.1. Исследование чистых культур холерных вибрионов
4.2. Исследование смешанных культур токсигенных штаммов с гетерологичной микрофлорой.
4.3 Обнаружение холерных вибрионов в пробах большого объема
4.4 Подготовка проб воды открытых водоисточников
для выявления токсигенных штаммов Vii Глава 5. КОНСТРУИРОВАНИЕ И ОЦЕНКА КАЧЕСТВА ГАНГЛИОЗИДСОДЕРЖАЩИХ МАГНОСОРБЕНТОВ.
5.1. Модификация способа получения ганглиозидов .
5.2. Получение ганглиозидсодержащих магносорбентов. Оценка физикохимических свойств, специфичности и сорбционной емкости.
Глава 6. ПРИМЕНЕНИЕ ГАНГЛИОЗИДСОДЕРЖАЩИХ МАГНОСОРБЕНТОВ ДЛЯ СЕЛЕКТИВНОГО КОНЦЕНТРИРОВАНИЯ ЭПИДЕМИЧЕСКИ ЗНАЧИМЫХ ШТАММОВ ХОЛЕРНОГО ВИБРИОНА
6.1. Применение ганглиозидсодержащих магносорбентов совместно с полимеразной цепной реакцией для обнаружения эпидемически значимых холерных вибрионов серогруппы
6.2. Изучение возможности фиксации на ганглиозидсодержащих магносорбентах токсигенных штаммов холерных вибрионов серогруппы.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Прогноз по России на ближайшие годы также остается неблагоприятным. Активизация продолжающейся международной миграции, расширяющиеся экономические связи, военная и экономическая нестабильность определяют возможность завозов холеры различными видами транспорта на территорию нашей страны. В связи с вышеизложенным особую значимость приобретают мероприятия по эпидемиологическому надзору за холерой и по его совершенствованию. Важным моментом при определении объема противоэпидемических мероприятий является своевременная и достоверная характеристика свойств штаммов холерных вибрионов, выделяемых от людей и из объектов внешней среды. При этом решающее значение приобретает получение информации о способности конкретных штаммов продуцировать холерный энтеротоксин и, следовательно, вызывать холерогенный синдром у чувствительного хозяина. Также важнейшее значение имеет оперативность получения такой информации. К ускоренным методам детекции микроорганизмов предъявляются высокие требования специфичность, чувствительность порядка м. Применяющиеся в настоящее время методические подходы бактериоскопия, полимеразная цепная реакция, иммунологические методы не отвечают им в полной мере . Наиболее объективным, чувствительным, специфичным и быстрым методом выявления вирулентности У. ПЦР, позволяющее использовать этот маркер для оценки степени потенциальной эпидемической опасности штамма. В этом случае необходимо использовать особые методические приемы, позволяющие максимально сконцентрировать искомые микробные клетки, а также исключить или уменьшить отрицательное влияние на компоненты реакции всевозможных примесей различного происхождения. Кроме того, ряд авторов Онищенко Г. Г. с соавт. Введение в систему индикации различных микроорганизмов магнитных сорбентов позволило значительно упростить проведение иммунофлуоресцентного, иммуноферментного, радиоиммунного и других экспрессметодов анализа, обеспечивая их высокую чувствительность и специфичность Ефременко В. И., . Применение магноиммуносорбентов значительно расширяет возможность мониторинга внешней среды за счет увеличения объема исследуемых проб до нескольких кубическим метров, селективного концентрирования искомого микроорганизма, очистки от загрязняющих компонентов. Вышеизложенное диктует необходимость проведения исследований, направленных на разработку новых доступных методов выделения возбудителя холеры с одновременным определением эпидемической значимости штамма. Целью работы является совершенствование экспрессных методов оценки эпидзначимости штаммов холерных вибрионов. Показана практическая ценность и целесообразность применения магноиммуносорбентных диагностикумов в экспрессном методе индикации холерного вибриона. Показана эффективность применения ганглиозидсодержащих магносорбентов для селективного концентрирования эпидемически значимых штаммов холерных вибрионов как , так и серогруппы. Установлено, что использование аффинных магнитных сорбентов на этапе подготовки проб повышает чувствительность полимеразной цепной реакции за счет избирательного концентрирования возбудителя холеры на магносорбенте и очистки пробы от посторонних агентов. Разработаны условия сочетанного применения магнитных сорбентов и ПЦР. РФ Способ индикации микроорганизмов 1 от г. Полученные в результате исследований данные представляют интерес с точки зрения поиска путей разработки новых доступных методов выделения и идентификации возбудителя холеры. Проведенные эксперименты показали, что фиксации токсигенных штаммов холерных вибрионов на ганглиозидсодержащих магносорбентах за счет связи токсинрецептор не препятствуют ни принадлежность к различным серологическим группам и , ни изменчивость фенотипических свойств. Применение аффинных магносорбентов в экспрессметоде индикации возбудителя холеры совместно с ПЦР повышает достоверность и чувствительность исследования, значительно сокращает время анализа, что имеет практическую ценность в условиях эпидемиологического надзора за холерой и при обследовании объектов внешней среды во время вспышек данного заболевания.