Выделение и изучение биологических свойств бактериофагов рода Proteus, конструирование на их основе биопрепарата и разработка параметров практического применения

• Автор: Феоктистова, Наталья Александровна
• Шифр специальности: 03.00.07, 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Ульяновск
• Количество страниц: 166 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Характеристика бактерий рода

1.2. Резервуар и распространение инфекции

1.3. Патогенность протеев

1.4. Идентификация бактерий рода .

1.5. Устойчивость

1.6. Бактериофаги и их применение в лабораторной практике

1.6.1.Фагоидентификация бактерий и фаготипирование.

1.6.2. Развитие фаговых корпускул в клетке хозяина.
1.6.3. Реакция нарастания титра фага РНФ.
И. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы и методы
2.2. Результаты собственных исследований.
2.2.1. Выделение бактерий рода из патологического материала
и объектов окружающей среды.
2.2.2. Изучение спектра литического действия коммерческого колипротейного бактериофага.
2.2.3. Поиск бактериофагов и селекция клонов фагов.
2.2.4. Изучение биологических свойств фагов бактерий рода
2.2.5. Характеристика выделенных фагов бактерий рода , выбранных для конструирования диагностического препарата
2.3. Разработка технологических параметров изготовления биопрепарата для фагодиагностики бактерий рода .
2.4. Разработка метода выделения и ускоренной идентификации бактерий рода с использованием фагов.
2.5. Разработка оптимальных условий постановки РНФ
2.5.1 .Определение количественного показателя РНФ, имеющего
диагностическое значение
2.5.2. Установление оптимального времени, обеспечивающего наиболее полноценное взаимодействие фага с бактериями
2.5.3. Использование РИФ для обнаружения бактерий рода
в объектах ветеринарного надзора.
2.5.3.1. Исследование водопроводной воды, контаминированной бактериями рода , с помощью РНФ
2.5.3.2. Исследование комбикорма, контаминированного бактериями
рода , с помощью РНФ
2.5.3.3. Исследование проб фекалий, контаминированных бактериями рода , с помощью РНФ
2.5.3.4. Исследование мяса, контаминированного бактериями рода ,
с помощью РНФ.
2.5.3.5. Результаты исследований фекалий от больных диареей поросят
с помощью РНФ.
2.6. Изучение эффективности поливалентного фагового биопрепарат
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ЛИТЕРАТУРНЫХ
ИСТОЧНИКОВ
ПРИЛОЖЕНИЯ
СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ
ВБКИ внутрибольничные бактериальные кишечные инфекций
ГЦ гуанин цитозин
ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота
ИФА иммуноферментный анализ
Л ПС липополисахарид
М.к. микробная клетка
М.к.г микробных клеток на 1 грамм
М.к.мл микробных клеток на 1 миллилитр
МПА мясопептонный агар
МПа мега Паскаль
МПБ мясопептонный бульон
МПЖ мясопептонная желатина
Н.м. нано метр
Об.мин оборотов в минуту
ОКИ острые кишечные инфекции
ОРЗ острые респираторные заболевания
РА реакция агглютинации
РГА реакция гемагглютинации
РНФ реакция нарастания титра фага
ПЭГ полиэтиленгликоль
ПЦР полимеразноцепная реакция
ЬТ термолабильный энтеротоксин
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Протеям в большей мере присуще проявление полиморфизма обнаружение при микроскопии мазков кокковидных, нитевидных и неправильных очертаний инволюционных форм, при некоторых условиях возможно образование сферогшастов Покровский, Поздеев, Сидоров, Скородумов, Федотов, . Протеи это факультативные анаэробы. Они хорошо растут на обычных питательных средах с образованием гнилостного запаха в диапазоне температур С оптимальная С, оптимум 7,27,4. i, , i . , , i установили, что при добавлении в среду грубого экстракта красной австралийской водоросли i этот феномен роения угнетается. Среди компонентов водоросли наиболее активным ингибирующим действием обладает гапогенизированный фуранон. Также феномен роения угнетается также при добавлении к питательным средам сухого новокаина и желтка куриного яйца Леонтьева, . Внесение в среду ингибиторов соли желчных кислот, высокие концентрации I, мочевина обусловливает рост в неподвижной Оформе. Подвижность бактерий используют для выделения чистой культуры посевом в конденсационную воду скошенного агара по Шукевичу. Колонии протеев в Оформе округлые, полупрозрачные и выпуклые. Нформы дают сплошной рост. Пигментов не образуют Бакулов, Смирнов, Васильев, . На среде Плоскирева протей образует крупные 48 мм полупрозрачные колонии с перламутровым оттенком, среда в зоне роста колоний подщелачивается и преобретает желтизну. На висмутсульфит агаре через часов культивирования колоний протея имеют темнокоричневый цвет. Иногда встречаются нероящиеся штаммы, образующие на плотных питательных средах мелкие и средние по размеру, круглые колонии формы сероватого цвета. В МПБ бактерии рода вызывают равномерное интенсивное помутнение среды с наличием осадка, который при встряхивании пробирки легко разбивается Золотухин, . Характерной для видов . Виды . . iii являются наиболее изученными, часто выделяются из объектов внешней среды, от людей и животных, а патогенные их варианты имеют эпизоотическое и эпидемиологическое значение. Но в последнее время появились сообщения о выделении представителей названного вида из патологического материала и обьектов окружающей среды при массовых желудочнокишечных заболеваниях поросятсосунов и новорожденных телят Бритова, Каврук, Каврук, Золотухин, . Поэтому в ветеринарии рассматриваются только три вида бактерий рода как возбудители эпизоотий. Антигенная структура бактерий рода формируется из соматических Оантигенов и жгутиковых Нантигенов, в некоторых случаях обнаруживали и капсульные Каитигены. Оантигены термостабильны, представляют собой липополисахариднобелковые комплексы Нантигены термолабильны, имеют белковую природу Золотухин, . Антигеннодиагностическая схема для видов . . iii представлена соматическими Огруппами и Нантигенами. Также установлено, что как 0, так и Нантигены могут иметь мозаичное строение Золотухин, . Для серологической идентификации определяют структуру О, Н антигенов, обозначаемых арабскими цифрами. В настоящее время антигенная формула включает в себя более Оантигенов и Нантигенов, всего 0 сероваров. В отличие от бактерий кишечной палочки, бактерии протея нельзя разделить на болезнетворные и неболезнетворные штаммы по показаниям антигенной формулы. Хотя отмечено, что при кишечных заболеваниях людей наиболее часто выделяют палочки протея определенной серологической группы по Оаитигену Бакулов, Смирнов, Васильев, . Методические указания. Данные моносахаридного анализа и 1Н и СЯМРспектроскопии показали, что различные штаммы . ОХК, используемые в качестве антигенов в тесте ВайляФеликса для серодиагностики риккетсиоза японской речной лихорадки, продуцируют липополисахариды ЛПС с одинаковой Оспецифической полисахаридной цепью, имеющей следующую структуру 3 26 Ас , где I и глюкуроновая и галактуроновая кислоты соответственно. Этот полисахарид, определяющий ОЗспецифичность и обнаруженный ранее у неклассифицированного штамма .