Внеклеточная L-глутаматоксидаза : Поиск продуцентов, получение, очистка и свойства фермента

• Автор: Сухачева, Марина Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 124 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
Страницы
ВВЕДЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. Общая характеристика стрептомицетов.

Г лава 2. Внеклеточные ферменты микроорганизмов

Глава 3. Использование ферментов микробного происхождения в

промышленности и медицине

Глава 4. Оксидазы аминокислот их свойства и перспективы практического

применения.
4.1. глутаматоксидаза ее свойства и перспективы практического
применения
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Глава 5. Материалы и методы исследования.
5.1. Объекты исследования.
5.2. Отбор штаммовпродуцентов внеклеточной глутаматоксилазы
5.3. Культивирование штаммовпродуцентов
5.4. Изучение морфологических, хемотаксономических и культуральных признаков выделенных штаммовпродуцентов.
5.5. Мутагенез природного штаммапродуцента.
5.6. Изучение влияния ионов кальция на секрецию внеклеточной глутаматоксидазы.
5.7. Определение активности глутаматоксидазы.
5.8. Определение биомассы стрептомицета .
5.9. Изучение биохимических свойств глутаматоксидазы.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.
Глава 6. Морфологокультуральные и физиологобиохимические свойства
выделенных штаммовпродуцентов.
6.1. Морфологокультуральные свойства выделенных штаммов.
6.2. Физиологобиохимические свойства выделенных штаммов.
Г лава 7. Повышение биосинтетической активности природного штамма
продуцента 5 гер1отусеа ар. 7 1.
7.1. Оптимизация состава среды и условий культивирования природного штаммапродуцента герЮтусеа ар. 7 1
7.2. Влияние ионов кальция на секрецию внеклеточной Ьглутаматоксидазы гертусеа ар. 7
7.3. Индуцированный мутагенез природного штаммапродуцента.
7.3.1. Естественная изменчивость 31гер1отусеа ар. 1.
7.3.2. Индуцированная мутагеном изменчивость природного штамма БерЮтусеа ар. .
Глава 8. Морфологокультуральные и физиологобиохимические свойства
мутантного штамма герЮтусеа ар. 7,6
8.1. Морфологокультуральные свойства герЮтусеа ар. 76
8.2. Физиологобиохимические свойства Знерютпусеа ар. 7 16.
Глава 9. Выделение и очистка внеклеточной Ьглутаматоксидазы
г ер Юту се а ар. 7 6.
Глава . Свойства внеклеточной Ьглутаматоксидазы Знерютусеа ар. 76
.1. Стехиометрия реакции.
.2. Определение простетической группы глутаматоксидазы . 16.
.3. Определение молекулярной массы глутаматоксидазы
. 16
.4. Субстратная специфичность внеклеточной глугаматоксидазы . 6.
.5. Биохимические свойства внеклеточной глутаматоксидазы . 6.
Глава . Перспективы практического применения внеклеточной
глутаматоксидазы . 16
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Определение в крови активности этих трансаминаз может дать ценную информацию о степени тяжести и о стадии повреждения сердечной мышцы i . . ii, . i . , . . . , . Определение в крови активное аланин трансаминазы имеет большую диагностическую ценность при заболевании печени и позволяет осуществлять раннюю диагностику острого гепатита. Меньшиков, . Определение в крови активности аспартаттрансаминазы может служить источником важной информации при целом ряде мышечных и инфекционных заболеваний, а также при заболеваниях нервной системы. Установлено, что повышенное содержание аспартаттрансаминазы при нормальном уровне аланинтрансаминазы наблюдается у людей, страдающих инфекционным монокулезом, мышечной дистрофией, дерматомиозитом, инсулярной гипогликемией . Vi . Известно, что основными продуцентами глутаматоксидазы являются микроорганизмы, относящиеся к группе актиномицетов, а именно к стрептомицстам i . . Ii . . . X . i, i . , i . Додзин и др. Виноградова, а. Производство этого фермента с использованием стрептомицетов в качестве продуцентов, способствовало началу широкого применения глутаматоксидазы на практике в ряде стран. Однако в России этот фермент до сих пор не производится. Поэтому поиск продуцентов глутаматоксидазы и разработка эффективных способов сс получения являются актуальными. Особенно перспективны в качестве продуцентов глутаматоксидазы микроорганизмы, способные к секреции этого фермента в среду, что облегчает операции по экстракции и очистке фермента, делая процесс производства экономически выгодным. Цель настоящей работы заключалась в поиске и выделении из разных мест обитания активных продуцентов внеклеточной глутаматоксидазы, относящихся к группе стрептомицетов, получении и очистке фермента, а также изучении его свойств для оценки целесообразности применения этого фермента на практике. Найти и выделить активные штаммыпродуценты внеклеточной Ьглутаматоксидазы и изучить их морфологокультуральные и физиологобиохимические свойства в целях идентификации. Изучить условия образования глутаматоксидазы выделенными штаммами. Оптимизировать состав среды и условия культивирования штаммапродуценга с целью повышения биосинтетической активности культуры. Увеличить выход фермента, применив мутационноселекционный подход. Разработать схему выделения и очистки Хглутаматоксидазы. Изучить свойства очищенного фермента. Рассмотреть перспективы использования данного фермента на практике. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ Глава 1. Общая характеристика стрегггомицетов. Одну из самых обширных надродовых групп актиномицетов образуют стрептомицеты , Зенова, . Это мицелиальные эубактерии, ветвящиеся гифы которых формируют, как правило, стабильный мицелий, хотя у некоторых представителей род Ii мицелий имеет тенденцию распадаться на различные по величине и форме фрагменты i а. , Зенова, . Исследование олигонуклеотидного состава РЖ актиномицетов, и в частности стрсптомицетов, показало, что они относятся к одной из ветвей филетической линии Грамположительных бактерий, представители которой отличаются высоким содержанием выше мол. ГЦпар в молекуле ДЖ i а. , Зенова, . Согласно Определителю бактерий Берджи , Зенова, в группу стрсптомицетов входит род с несколькими близкими родами Ii, i, viii, ii. Клетки стрептомицетов Грамположительны, хотя реакция по Г раму может изменяться с возрастом культуры, и на отдельных стадиях развития клетки могут окрашиваться Грамотрицательно, как, например, у представителей рода i. Клеточная стенка стрептомицетов, как и всех Грамположительных бактерий, состоит из пептидогликана, тейхоевых кислот и полисахаридов, которые с помощью ковалентных связей образуют сложную структуру с весьма упорядоченной пространственной организацией.