Влияние условий культивирования и некоторых экзогенных факторов на биосинтез и секрецию изоформ эндонуклеазы Serratia marcescens

• Автор: Богомольная, Лидия Михайловна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 170 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Секреция белков у грамотри нательных бактерий

1.1. Типы секреции

1.2. Секретируемые белки i

2. Внеклеточная эндонуклеаза i

2.1. Эндонуклеаза и е свойства

2.2. Особенности структуры макромолекулы и каталитический механизм действия эндонуклеазы

2.3. Изоформы эндонуклеазы i

3. Биосинтез и секреция эндонуклеазы i
3.1. Экспрессия гена и регуляция биосинтеза эндонуклеазы
3.2. Секреция эндонуклеазы
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬV
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
1. Отбор штамма бактерий i и питательной среды, обеспечивающей секрецию эндонуклеазы в два этапа
2. Подбор белковмаркеров цитоплазмы и периплазмы
3. Рост бактерий и изменение нуклеазной активности в
разных фракциях при культивировании на средах разного состава
4. Влияние субстратов и продуктов гидролиза на биосинтез и
секрецию изоформ эндонуклеазы
4.1. Влияние нуклеиновых кислот
4.2. Влияние мононуклеотидов
5. Влияние источников азотного и углеродного питания на биосинтез и секрецию изоформ эндонуклеазы
5.1. Влияние источников азотного питания
5.2. Влияние гидролизата казеина
5.3. Влияние источников углеродного питания
6. Влияние аэрации на биосинтез и секрецию изоформ
эндонуклеазы
7. Действие веществ, вызывающих ингибирование дыхания
азид натрия и репликации ДНК налидиксовая кислота на биосинтез и секрецию изоформ эндонуклеазы
7.1. Влияние азида натрия
7.2. Влияние налидиксовой кислоты
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
ЛИТЕРАТУРА


Два других представителя этого комплекса и также обладают трансмембранными сегментами и, повидимому, участвуют в транслокацию на более поздних ее этапах . ., . i . . ., . На первых стадиях транслокации существует большая зависимость от гидролиза АТФ, осуществляемого . Цикл, включающий связывание пребелка с , гидролиз АТФ, транслокацию короткого пептида через мембрану и новое связывание с , может повторяться несколько раз, вплоть до полной транслокации всего белка. В случае диссоциации и пребелка, транслокация может продолжаться за счет протон движущей силы. После того, как весь полипептид оказался на внешней стороне цитоплазматической мембраны, сигнальная последовательность отщепляется сигнальной пептидазой, и белок оказывается в периплазме i . ., . В периплазме белок претерпевает сразу несколько изменений. Вопервых, АТФзависимые шапероны связываются с попавшим в периплазму белком и катализируют его правильный фолдинг, предотвращая расщепление протеазами и агрегацию. После правильной укладки всей полипептидной цепи и некоторых модификаций, внеклеточные белки достигают состояния, необходимого для успешной транслокации через внешнюю мембрану. Высокоорганизованная третичная структура белков, формирующаяся в периплазме, является необходимым условием для правильной транспортировки и выхода белков за пределы клетки. Именно в самой третичной структуре, видимо, и заключается сигнал, позволяющий белкам пересекать внешнюю мембрану. В данном случае секреторный мотив, вероятнее всего, складывается из отдельных участков полипептидной цепи, оказывающихся рядом в процессе правильного фолдинга, или образуется участками цепи с особой вторичной структурой. Разнообразие подобных мотивов может обуславливать наличие нескольких ответвлений в конце , что ведет к различным способам транспортировки белков через внешнюю мембрану. Одним из наиболее изученных подобных способов является основное конечное ответвление МТВ. Первым белком, для которого был показан этот способ, является пуллуланаза, для которой было идентифицировано генов, необходимых для полной секреции фермента. Подобные гены были обнаружены и во многих других грамотрицательных бактериях, где они участвуют в секреции разнообразных белков. Другие способы секреции через внешнюю мембрану все еще остаются малоизученными, хотя в последние годы наметился определенный прогресс в их изучении А. . . . Третий тип секреции характерен для патогенных микроорганизмов родов ii, i, , а также отдельных видов родов ii, , X. Секреторный аппарат в этом случае состоит примерно из компонентов. i . . . . , . Четвертый тип секреции сначала был обнаружен в i. С его помощью экспортируется пертуссиновый токсин. Большая часть компонентов этого секреторного аппарата гомологична таковым Viсистемы, которая отвечает за транспорт iплазмиды из i ii в клетки растений. Предположительно, подобным типом секреции обладают многие факторы вирулентности i . . . Таким образом, сложный и все еще малоизученный процесс выхода секретируемых белков в окружающую среду представляется чрезвычайно интересным не только для изучения механизма секреции, но и для таких основополагающих жизненных процессов как фолдинг, компартментализация и транспорт веществ через биологические барьеры липидные мембраны. Как уже отмечалось выше, i может использоваться как модель для изучения секреции у грамотрицательных бактерий. Известно, что i является продуцентом большого количества внеклеточных белков, среди которых имеются эндонуклеаза, липаза, несколько протеаз и хитиназ. Такое обилие секретируемых белков является довольно необычным явлением для грамотрицательных бактерий v . . i . ., , . . ., , Лория Ж. К.и др. . . . V. i . i . . . Например, другая бактерия этого семейства . М.