Изучение устойчивости к лекарственным препаратам первой и второй линии штаммов Mycobacterium tuberculosis, выделенных от больных с хроническим течением туберкулеза

• Автор: Низова, Анастасия Валерьевна
• Шифр специальности: 03.00.07, 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Оболенск
• Количество страниц: 171 с. : ил.

Введение.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Эпидемическая ситуация по туберкулезу в Российской Федерации

1.2. Анализ причин сохранения сложной эпидемической ситуации

по туберкулезу

1.3. Распространенность лекарственноустойчивого туберкулеза на территории Российской Федерации.

1.4. Химиопрепараты, используемые для лечения туберкулеза.

1.5. Методы определения устойчивости микобактерий к

противотуберкулезным препаратам.

1.6. Критерии оценки лекарственной чувствительности М. i.

1.7. Заключение по обзору литературы

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1. Источники клинических штаммов М. i
2.2. Микробиологические методы
2.2.1. Культуральные методы исследования
2.2.2. Метод абсолютных концентраций на среде ЛевенштейнаЙенсена
2.2.3. Метод пропорций на среде i 7Н
2.2.4. Определение МПК лекарственных препаратов методом
серийных разведений на среде ЛевенштейнаЙенсена
2.2.5. Определение МПК лекарственных препаратов методом
серийных разведений на среде i 7Н.
2.3. Биохимические методы.
2.3.1. Тест с салициловокислым натрием
2.3.2. Тест на наличие термолабильной каталазы
2.3.3. Ниациновый тест
2.3.4. Тест на наличие нитратрсдуктазной активности
2.3.5. Тест на наличие пиразинамидазной активности.
2.4. Молекулярнобиологические методы
2.4.1. Выделение микобактериальной ДНК.
2.4.2. Метод сполиготипирования
2.4.3. Метод I.
2.4.4. Метод гибридизации на биочипах
2.4.5. Метод ПЦРсеквенирования
2.4.6. Компьютерный анализ.
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1. Определение критических концентраций противотуберкулезных препаратов второй линии
3.1.1. Создание панели клинических штаммов М. i.
3.1.2. Определение критической концентрации канамицина
для М. i
3.1.3. Определение критической концентрации каиреомицина
дляМ i
3.1.4. Определение критической концентрации офлоксацина
для М. i
3.2. Характеристика лекарственной устойчивости штаммов М. i, выделенных от больных с хроническим течением заболевания.
3.2.1. Видовая идентификация клинических штаммов М i
3.2.2. Определение устойчивости клинических штаммов М i
к противотуберкулезным препаратам методами абсолютных концентраций и пропорций
3.2.3. ПЦРсеквенирование генов, мутации в которых детерминируют устойчивость к противотуберкулезным препаратам.
3.2.4. Определение устойчивости клинических штаммов М i
к рифампицину методом биочипов.
3.2.5. Определение устойчивости клинических штаммов М. i
к пиразинамиду
Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ.
4.1. Определение критических концентраций противотуберкулезных препаратов второй линии канамицина, капреомицина и офлоксацина
для М. i.
4.2. Микробиологическая и молекулярнобиологическая характеристика штаммов М. i, полученных от больных туберкулезом, проживающих в Центральном и Приволжском регионах
Российской Федерации.
Выводы.
Список литературы


В, к стрептомицину в ,7 случаев в гене I и в ,4 в гене , к этамбутолу в ,2 случаев в гене етЬВ, к пиразинамиду в 0 случаев в гене рпсА, к канамицину в ,6 случаев в гене , к капреомицину в 1,3 случаев в гене , к офлоксацину в ,0 случаев в гене . Аннотация диссертационной работы по главам. В первой главе представлен литературный обзор по эпидемиологии туберкулеза в Российской Федерации, используемым противотуберкулезным средствам, механизмам лекарственной устойчивости М. Во второй главе описаны используемые материалы клинические штаммы М. МПК клинических штаммов М. В третьей главе охарактеризованы штаммы М. Определены МПК противотуберкулезных препаратов второй линии для М i методом серийных разведений. Приведены результаты по установленным значениям критических концентраций для противотуберкулезных препаратов. Представлены данные по определению лекарственной устойчивости 5 штаммов М. Центральном и Приволжском регионах Российской Федерации. В четвертой главе представлен анализ полученных результатов. В приложении 1 приведены сведения о пациентах, являющихся источниками микобактериальных культур. В приложении 2 представлены результаты анализа нуклеотидных последовательностей рпсА гена М. В приложении 3 описан алгоритм исследования по определению критических концентраций противотуберкулезных препаратов, используемых для оценки лекарственной устойчивости i i методом абсолютных концентраций на питательной среде ЛевснштейнаЙенсена. Автор выражает искреннюю благодарность своим научным руководителям профессору, д. Шемякину И. Г. и к. Степаншиной В. Н. за ценные консультации при выполнении данной работы и ее материальнотехническое обеспечение. Особую благодарность автор приносит Мироновой Р. И. за неоценимую помощь при проведении микробиологических исследований, а так же Николаевой О. Г. за содействие при математической обработке данных. Автор выражает признательность всем сотрудникам лаборатории молекулярной биологии, в особенности Майской Н. В., Богуну А. Г., Мухиной Т. Н., Благодатских С. А. за оказанное содействие в проведении необходимых экспериментов и за моральную поддержку. Глава 1. Эпидемическая ситуация по туберкулезу в Российской Федерации начала ухудшаться в начале девяностых годов прошлого столетия 6. Анализ данных свидетельствует, что самая благополучная эпидемическая обстановка по туберкулезу была в г. Основными причинами распространения туберкулезной инфекции явилось ухудшение социальноэкономических условий жизни населения, военные действия в ряде регионов России, увеличение миграционных процессов, а также резкое снижение финансирования противочуберкулезных мероприятий, что привело к снижению уровня организации противотуберкулезной помощи населению . Рис. Федерации в период гг. В данный период возросла численность пациентов, страдающих распространенными, запущенными и осложненными формами заболевания, а также больных, в мокроте которых выявляются лекарственноустойчивые микобактерии туберкулеза, снизилась эффективность лечения больных туберкулезом. Смертность населения от туберкулеза возросла и достигла самого высокого уровня среди инфекционных заболеваний . На сегодняшний день эпидемическая ситуация по туберкулезу в Российской Федерации оценивается как напряженная. Ежегодно выявляется значительное число новых больных, выделяющих М. В г. Российской Федерации верхняя кривая на рис. ООО населения территориальный показатель заболеваемости. Данный показатель значительно варьирует в разных регионах Российской Федерации табл. Таблица 1. Регион г. Уровень напряженности эпидемической ситуации по туберкулезу в значительной степени определяется динамикой показателя смертности , . Этот показатель является одним из самых наглядных эпидемиологических индикаторов, и рост его значений обусловлен, прежде всего, ростом смертности среди больных с хроническими формами туберкулеза. В гг. Владимирская область, Республика Ингушетия, в других уменьшался Орловская область, Ивановская область, Республика Марий Эл табл. Таблица 1. Регион г. В г. Российской Федерации нижняя кривая на рис. Неблагополучная ситуация по туберкулезу диктует необходимость модификации противотуберкулезной помощи населению Российской Федерации. Уже.