Биосинтез эндонуклеазы и хитиназ Serratia marcescens

• Автор: Петухова, Елена Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 123 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Регуляция синтеза внеклеточных ферментов бактерии

2. Внеклеточные гидролазы i свойства, регуляция биосинтеза и механизмы секреции

2.1. Эндонуклеаза

2.2. Хитинолитические ферменты

2.3. Протеазы

2.4. Липазы

Заключение по обзору литературы

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
1. Материалы и методы исследований
2. Результаты исследований
2.1. Характеристика штаммов . с повышенной активностью эндонуклеазы и хитиназы
2.2. Биосинтез внеклеточной эндонуклеазы .
2.1.1. Индукция синтеза эндонуклеазы . под влиянием агентов, вызывающих повреждения ДНК
2.1.2. Влияние митомицина С и налидиксовой кислоты на динамику и уровень синтеза эндонуклеазы
2.3. Влияние соединений, индуцирующих ответ на динамику
и уровень синтеза внеклеточных гидролаз .
2.4. Хиггаюлитический комплекс . и особенности
его биосинтеза
2.4.1 .Влияние хитина и индуктора функций клетки на биосинтез
ферментов хитинолитического комплекса .
2.4.2. Рост и биосинтез эндохитиназы исходным и мутантным штаммами в процессе развития на различных средах в присутствии и без митомицина С
2.4.3. Общая хитиназная активность в процессе роста исходного и мутантного штаммов
2.4.4. Состав внеклеточных белков с хитиназной активностью исходного и мутантного штаммов
2.4.5 . Получение частично очищенных хитииаз путем аффинной
сорбции на хитине
2.4.6. Разделение хитииаз частично очищенного препарата путем
изоэлектрического фокусирования
2.4.7 Фунгистатичсская активность хитиназ .
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
ЛИТЕРАТУРА


. с повышенной активностью эндонуклеазы и хитиназы, содержащей все четыре белка с хигиназной активностью, опробованные в полупроизводственных условиях на Вышневолоцком заводе ферментных препаратов. Способ получения культуральной жидкости с хигиназной активностью защищен Государственным патентом. Штамм рекомендован Министерством медицинской промышленности СССР г. Исследования получили финансовую поддержку программы Университеты России фундаментальные исследования гг. АН и фонда НИОКР Республики Татарстан гг. Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на IX Конференции межвузовского межотраслевого проекта Ферменты микроорганизмов Казань, , Конференции Российской Федерации Биосинтез ферментов микроорганизмами Москва, , XI Конференции Российской Федерации Ферменты микроорганизмов, Казань, , Пятой конференции Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана Москва Щелково, , итоговых научных конференциях Казанскою университета , , Международной конференции студентов и аспирантов Ломоносов Москва, . Внеклеточные белки у бактерий и других микроорганизмов включают различные ферменты, вызывающие деградацию биополимеров поли и олигосахаридов, нуклеиновых кислот, белков, липидов и др. С, И, Р. К этому классу относятся также детоксифицирующие ферменты, в первую очередь, инактивирующие Злактамные антибиотики. Бактерии секретируют в среду также различные токсины, обладающие литическими свойствами и способностью расщеплять клеточную оболочку эукариотических и прокариотических организмов, а гакже отдельных органелл. Благодаря ряду свойств продукции в высокой концентрации, легкости очистки и тестирования, стабильности и низкому молекулярному весу в среднем кДа внеклеточные ферменты являются не только идеальной моделью для решения фундаментальных проблем белковой химии и энзимологии, а также для изучения генов, кодирующих эти белки, но имеют большое практическое значение. Внеклеточные ферменты бактерий имеют и большое экологическое значение, отвечая за рециклинг огромного количества мирового нерастворимого материала и могут стать экономически выгодными в будущем, в решении, в частности, энергетической проблемы, за счет использования для деградации растительных отходов. Регуляция образования ферментов происходит на уровне транскрипции, постгранскрипционном уровне, трансляции и посттрансляционном уровне Прист, . У прокариот ведущую роль играет регуляция синтеза ферментов на уровне транскрипции, поскольку у бакгерий мРНК отличается коротким временем жизни, и трансляция начинается еще до завершения ее синтеза i, . В основе механизмов регуляции транскрипции лежит принцип оперонной организации ДНК, в которой кроме структурных генов, кодирующих аминокислотную последовательность белков, имеются регуляторные, некодирующие участки. Один или несколько структурных генов вместе с прилегающими к нему регуляторными участками образуют элементарную единицу транскрипции оперон. Эффективность считывания оперона определяется взаимодействием белковрегуляторов и фермента транскрипции РНКполимеразы с регуляторным участком. Оперон, в котором оператор допускает свободное продвижение РНКполимеразы, но эффективно блокируется при связывании молекулы специфического репрессора, находится под отрицательным контролем. Положительный контроль обуславливается оператором, который препятствует транскрибированию структурных генов РНКполимеразой, но способен связывать специфический активатор, облегчающий продвижение этого фермента. Эти два типа регуляции управляют у бактерий синтезом как индуцибельных, так и репрессибельных ферментов. Выделяют особый механизм регуляции синтеза белка катаболитную репрессию, где присутствие легко усвояемого источника углерода в основном глюкозы подавляет синтез ферментов, ответственных за утилизацию других источников углерода. Позитивным регулятором транскрипции катаболитных генов является цАМФ, который взаимодействует с белком активатором i, . Добавление в среду 3,5цАМФ снимает репрессию, вызываемую глюкозой.