Биосинтез липазы культурой Candida paralipolytica 739

• Автор: Вецозола, Анда Освалдовна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1983
• Место защиты: Рига
• Количество страниц: 149 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУШ

1.1. Липазы дрожжей

1.1.1. Характеристика микробных липаз

1.1.2. Методы определения липолитическо активности

1.1.3. Значение липаз в обмене липидов у дрожжей

1.1.4. Дрожжи как продуцент липазы. Лока лизация липазы в дрожжевой клетке

1.2. Влияние условий культивирования на

образование липазы

1.2.1. Состав сред для продуцентов липоли тических ферментов

1.2.2. Активаторы и ингибиторы биосинтеза липазы
1.2.3. Методы культивирования дрожжей
1.3. Получение и свойства .дрожжевых липаз
1.3.1. Оптимальные температуры и для действия препаратов дрожжевых липаз
1.3.2. Субстратная специфичность дрожжевых липаз
1.3.3. Влияние поверхностноактивных веществ на липолитическую активность дрожжей
1.3.4. Влияние ионов металлов на липояити ческую активность дрожжей
1.3.5. Влияние яирных кислот и фосфолипидов на активность дрожжевых липаз
1.3.6. Выделение и очистка микробных липаз
1.4. Значение микробных липаз
1.4.1. Применение микробных липаз
1.4.2. Перспективы использования
ЭКСПЕРуШНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
ГЛАВА П. 2.1. Материалы и методы исследований
2.1.1. Выращивание культуры дрожжей
2.1.2. Выделение и очистка липазы
2.1.3. Аналитические методы
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
ГЛАВА Ш. 3.1. Влияние условий культивирования на
биосинтез липазы культурой i ii
3.1.1. Влияние состава питательной среды
3.1.2. Влияние возраста посевного материала
3.1.3. Динамика роста культуры i
ii 9 и биосинтеза
3.1.4. Влияние интенсивности аэрации на биосинтез липазы
3.1.5. Влияние среды на рост культуры
и биосинтез липазы
3.1.6. Подбор питательной среды для выра щивания посевного материала при полупроизводственном культивировании
3.1.7. Влияние растительных масел и поверх ностноактивных веществ на образование липазы
3.1.8. Фракционный состав липидов и фосфоли ПИДОВ В биомассе ДрОКЯеЙ i ii
3.1.9. Электронномикроскопическое изучение ультратонкого строения i ii 9 при различных условиях культивирования
ГЛАВА У. 4.1. Получение и свойства ферментного
препарата липазы
4.1.1. Характеристика ферментного препарата
4.1.2. Субстратная специфичность препарата 2 липазы
ГЛАВА У. 0БСУ1ДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОда
РЕКОМЕНДАЦИЯ
СПИСОК ЛИТЕРАТУ


В результате гидролиза в культуральной жидкости накапливаются диглицерда, моноглицериды, глицерин и свободные жирные кислоты. Большое значение в липидном обмене организма имеют липолитические ферменты, так как они связаны с процессами биосинтеза жира, являющегося энергетическим резервом клетки, принимают участие в функционировании биологических мембран, в метаболизме внутриклеточных липидов. Известно также, что липиды имеют первостепенное значение в механизмах регуляции переноса ионов и различных метаболитов через биомембраны, а также входят в структуры и участвуют в функциях клеточных органелл Антонов, . Поэтому они играют не менее важную роль в процессах жизнедеятельности клетки, чем белки и нуклеиновые кислоты. Разработка и внедрение новых современных методов разделения и анализа липидов способствовали более углубленным исследованиям как этой группы соединений, так и ферментов их метаболизма. В настоящее время биохимические исследования липолитических ферментов сосредоточены на изучении их структуры и механизма каталитического действия, особенно на изучении способности этих активных белков действовать на поверхности субстратов, нерастворимых в воде. Благодаря этой особенности липслитические ферменты отличаются от большинства других ферментов, которые участвуют в реакциях, осуществляющихся в водных растворах. Ферментативный гидролиз липидов протекает на границе двух фаз масловода. Следовательно, ферментсубстратное взаимодействие происходит на поверхности раздела между субстратом и водной фазой. Очевидно, кинетика реакций, протекающих в этих условиях, имеет характерные особенности. Ферменты внутриклеточного метаболизма обычно иммобилизованы, и поэтому субстраты должны диффундировать к ним. Поскольку при липолизе под субстратом понимают не отдельные молекулы, а неводную фазу агрегированных липидов, типичные липолитические ферменты действуют в условиях, где субстрат неподвижен по отношению к ферменту. Надо отметить, что размеры агрегатов субстрата могут быть различными, часто превышающими размер молекулы фермента Брокерхоф, Дженсен, . Ферментативные метаболические процессы обычно протекают на мембранах, то есть на границе раздела фаз. Несмотря на то, что аналогия между внутриклеточными межфазными процессами и липолизом капель масла весьма отдаленная, изучение липолитических реакций может сыграть важную роль в понимании клеточного обмена. Липолиз и энзимология мембран имеют то общее, что один из компонентов реакции фермент или субстрат частично иммобилизован на матрице большого размера. В связи с этим, был предложен термин суперсубстрат для обозначения матрицы, в которую включена молекула субстрата вгоскегНоДД, . Необходимо, чтобы ферменты перемещались к субстрату и связывались с ним. При этом важно, чтобы соблюдалась правильная ориентация активных центров вблизи молекул субстрата. Верещагин, . Образующиеся при гидролизе жирные кислоты и моноглицериды десорбируются в водную фазу ,ii, . Сказанное выше позволяет рассматривать микробные липазы как удобную модель для решения ряда вопросов энзимологии, а их способность расщеплять различные природные и синтетические липиды представляет значительный практический интерес. Таким образом, изучение микробных липаз имеет большое теоретическое и практическое значение. I.I. В настоящее время существует целый ряд методов определения липолитической активности. Использование авторами различных методов и различных субстратов для определения липолитической активности затрудняет сравнение активности липаз различных культур, описанных в литературе. В связи с этим для выбирания более подходящего метода было необходимо рассматривать некоторые из них. Для качественного определения и сравнения липолитической активности разных культур ранее часто использовали чашечный метод, имеющий различные модификации i, . . Этот метод иногда применяют и в настоящее время для отбора активных продуцентов. В основе метода лежит образование прозрачных, или в присутствии индикаторов окрашенных зон накопления продуктов гидролиза.