Биологическая активность лектина Paenibacillus Polymyxa in vitro и в организме животных

• Автор: Кикалова, Татьяна Петровна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 143 с. : ил.

1. Обзор литературы

1.1. Лектины белки неиммуноглобулиновой природы.

1.2. Биологическая активность лектинов

1.3. Использование лектинов.

2. Экспериментальная часть

2.1. Объект и методы исследований.

2.1. 1. Объект исследований.

2.1. 2. Выделение и очистка лектина ЛИ .x

2.1. 3. Исследование возможной токсичности лектина ЛИ .

x на биотестобъекте iii

2.1. 4. Исследование гистологического и морфофункционального

состояния органов животных
2.1. 5. Воспроизведение экспериментального стресса
2.1. 6. Определение активности глутатион8трансферазы
2.1. 7. Определение активности аминотрансфераз
2.1. 8. Определение концентрации мочевины в сыворотке крови
2.1. 9. Определение концентрации холестерина в сыворотке крови
2.1 Определение концентрации церулоплазмина в сыворотке крови.
2.1 Определение концентрации глюкозы в крови
2.1 Определение микрофлоры толстого кишечника животных.
2.1 Определение бактерицидных и фунгицидных свойств лектина бацилл и экзополисахаридных гелей с добавлением лектина i vi.
2.1 Определение ранозаживляющих свойств лектина бацилл и
экзополисахаридных гелей с добавлением лектина
2.1 Статистическая обработка
2.2. Результаты исследований и их обсуждение
2.2.1. Оценка токсичности лектина бацилл на биотестобъекте Со1рос1а .
2.2.2. Влияние лектина ЛИ Р.ро1утуха на морфофункциональное состояние органов мышей.
2.2.3. Изучение влияния лектина бацилл ЛИ на некоторые биохимические параметры крови самцов крыс при стрессировании плаванием
2.2.4. Изучение влияния лектина ЛИ на микрофлору толстого кишечника крыс в норме и при различных видах стресса
2.2.5. Исследование бактерицидных, фунгицидных и ранозаживляющих свойств лектина ЛИ Р.ро1утуха и экзополисахаридных гелей с добавлением лектина.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ


Материалы диссертации были представлены на III Международной школеконференции Актуальные аспекты микробиологии Москва, региональных конференциях молодых ученых Вавиловские чтения , Саратов, всероссийской научнопрактической конференции, посвященной летию факультета института ветеринарной медицины Саратов, VI межрегиональной конференции молодых ученых Стратегия взаимодействия микроорганизмов и растений с окружающей средой Саратов, ИБФРМ РАН, . По теме диссертации опубликовано 9 работ, из них 1 статья в журнале, рекомендованном ВАК РФ. Диссертация состоит из введения, двух глав обзора литературы и экспериментальной части, включающей объект и методы исследований, результаты исследований и их обсуждение, а также заключения, выводов и списка использованных литературных источников. Работа изложена на 3 страницах, содержит таблиц и 6 рисунков. Список использованных литературных источников включает 9 наименований, в том числе 1 зарубежных. К лектинам относятся белки не иммуноглобулиновой природы, способные к специфическому узнаванию и обратимому связыванию с углеводами гликоконъюгатов и полисахаридами без нарушения ковалентной структуры связываемых углеводов , i, Лахтин, . К таким углеводсвязывающим белкам можно отнести рецепторы транспорта углеводов, некоторые гормоны, а также многие агглютинины клеток или преципитины гликоконъюгатов и полисахаридов , i, . Ферменты углеводного обмена с независимыми от каталитического центра участками специфического связывания углеводов, также относят к лектинам Лахтин, Запромтова, Лахтин, . Лектины чаще всего бывают гликопротеинами, в исключительных случаях белками, свободными от углеводов, как например конканавалин А Соп А , i, , . Содержание углеводов может колебаться от 5 до . В составе лектинов наиболее распространенными углеводами являются манноза, галактоза, фукоза и ацетилглюкозамин. Лектины относительно бедны серусодержащими аминокислотами цистином, метионином и богаты серином и треонином, содержащими гидроксильную группу. Они вступают в реакцию с углеводами рецепторами лектинов, при этом образуются нековалентные связи соединения в виде водородных мостиков, ионогенные соединения, возможно, гидрофобные связи. Поэтому соединение, получаемое в результате реакции можно относительно легко вновь расщепить. Место соединения внутри молекулы для группы рецепторов обычно называют по аналогии с антителами активными центрами. Лектины построены из субъединиц, которые могут, но не должны быть идентичными. Они связаны либо дисульфидными мостиками , Ii, Iii, i, , , , либо с помощью нековалентных связей , Ii, Iii, , i, , . Одна субъединица чаще всего имеет один активный центр. А наиболее широко изученный лектин с уже известной третичной структурой представляет собой, например, тетрамер, каждая субъединица из которых содержит по одному активному центру , i, , . Моновалентные субъединицы являются фрагментами лектинов, которые блокируют рецепторы, но не вызывают при этом агглютинации. Многие лектины имеют места соединения для двухвалентных ионов металлов Са , 4, Мп. Максимальная активность таких лектинов достигается только после фиксации соответствующего иона металла. Молекулярная масса большинства известных до сих нор лектинов варьирует в пределах 0 КДа. Известны также лектины с меньшей например, лектин пшеничного зерна КДа i, , , и большей лектин лимулусполифемус КДа ii, , молекулярной массой. Подобно энзимам, имеющим изоэнзимы, у лектинов известны изолектины с аналогичными структурами и одинаковой специфичностью. В одном организме могут встречаться лектины различной специфичности, к которым не подходит название изолектин. Основой классификации лектинов, как группы особых биохимических агентов, является их углеводная специфичность, поскольку понятно, что именно это их свойство является основополагающим. При этом специфичность отражает их максимальное сродство, которое по силе отличается от сродства к другим углеводам. Чем больше сродство лектина к данному углеводу, тем меньше этого углевода необходимо для блокирования лектина. Простым методом определения специфичности и сродства является ингибирование клеточной агглютинации после добавления углеводов. Клеткамииндикаторами могут служить эритроциты, дрожжевые клетки, бактерии и т. Во всех экспериментах с лектинами наблюдается зависимость их действия от величины .