Выделение и характеристика мицелиального лектина базидиомицета Grifola frondosa (Fr.) S.F. Gray

• Автор: Степанова, Лада Викторовна
• Шифр специальности: 03.00.07, 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 131 с. : ил.

Оглавление
ВВЕДЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Общая характеристика экогруппы базидиальных ксилотрофов

1.1 Л. Биологически активные вещества, обуславливающие полезные

свойства базидиальных ксилотрофов

1Л .2. i как типичный трутовик ксилотроф

1.2. Общие представления о лектинах

1.3. Лектииы с позиций современной гликобиологии

1.3Л. Лектины попытки классификации

1.3.2. Лектины и углеводный код
1.3.3. Факторы лектиновой активности
1.3.3.1. Субъединичная структура лектинов .
1.3.3.2. Посттрансляционная модификация и множественные формы лектинов
1.3.3.3. Расширенный центр связывания лсктина с рецептором конфигурационная и конформационная селективность связывающих сайтов
1.3.3.4. Гидрофобное связывание
1.3.4. Лектинрецепторная система как реализация эпигенетического углеводного кода организация и функционирование
1.4. Лектины базидиальных ксилотрофов
1.4.1. Лектины базидиомицетов общая характеристика
1.4.2. Лектины базидиомицетовксилотрофов
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Культуры микроорганизмов, использованные в работе
2.2. Условия выращивания микроорганизмов
2.3. Основные реактивы, использованные в работе
2.4.Выделение лектина с поверхности дикариотического мицелия
2.5. Постановка реакции гемагглютинации и получение нативных эритроцитов кролика
2.6. Определение специфичности выделенного лектина
2.7. Г ель электрофорез в денатурирующих условиях
2.8. Изучение химического состава лектина
2.9. Исследование морфологокультуральных характеристик колоний . в совместных культурах с . i 5 и его Омегон мутантами
2 Изучение влияния препарата мицелиального лектина . на подвижность клеток азоспирилл
2 Получение поликлональных кроличьих антител к лектину
. .
2 Мечение лектина и специфических антител коллоидным золотом
2 Иммунодотанализ на нитроцеллюлозиой мембране
2 Получение и фрагментов антител
2 ИФА взаимодействия лектина со специфическими и неспецифическими антителами
2 Определение локализации лектина .
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Обнаружение, выделение, физикохимические свойства
и локатизация мицелиального лектина .
3.1.1. Обнаружение и динамика лектиновой активности экстрактов дикариотического мицелия .
3.1.2. Выделение лектина .
3.1.3. Определение молекулярной массы лектина
3.1.4. Определение гликановой составляющей в расгворах лектина
3.1.5. Углеводная специфичность лектина
3.1.6. Анализ химического состава лектина
3.1.7. Влияние температуры на стабильность лектина
3.1.8. Локализация лектина на мицелиальных гифах
3.2. Иммунохимические свойства мицелиального лектина
. г а
3.2.1. Выявление специфичности связывания лектина . с гомологичными антителами
3.2.2. Изучение взаимодействия лектина . с негомологичными антителами методом ИФА
3.2.3. Расчет параметров взаимодействия лектина . со специфическими и неспецифическимими антителами
3.3. Изучение роли лектин углеводных взаимодействий в контакте . и ризобактерий . i
3.3.1. Исследование морфологокультуральных характеристик колоний . в совместных культурах
с . i 5 и его Омегон мутантами
3.3.2. Изучение влияния мицелиального лектина . на подвижность клеток азоспирилл
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРА ТУРЫ
БЛАГОДАРНОСТИ
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


При этом мутантные штаммы КМ8 и КМ9, в клеточной стенке которых экспонирован ЛПС1 с гаптенным лектину мицелия ОПС1 распознаются грибом с наименьшим проявлением антагонизма, чем в случае штаммов КМ2 и КМ8, в состав клеточной стенки которых входит Л ПСИ. Выявлено, что мицелиальный лектин уменьшает подвижность бактерий А. ЬгаяИете Бр5 и КМ 9 в жидкой среде. Научнопрактическая значимость. Получен гомогенный препарат мицелиального лектина 7. Комплекс данных, полученных в настоящей работе, может послужить основой дальнейших фундаментальных исследований механизма функционирования лектинрецепторной системы у базидиомицетов. Работа выполнена в лаборатории микробиологии и микологии ЛММ ИБФРМ РАН но планам НИР в рамках бюджетных тем Съедобные культивируемые грибы физиология и биохимия направление 5. ЛММ Никитина В. Е., гос. Роль углсводсвязывающих гликопротеинов в процессах жизнедеятельности бактерий и грибов направление 5. ЛММ Никитина В. Е., гос. Работа выполнялась также при поддержке гранта РФФИ 9а Лектины ксилотрофных базидиомицетов разных систематических групп. Материалы диссертации использованы при выполнении дипломной работы кафедры микробиологии и физиологии растений биологического факультета СГУ им. Н.Г. Чернышевского. Проявление лектиновой активности, обнаруженной у экстрактов дикариотического мицелия С. Лектин, выделенный с поверхности дикариотического мицелия базидиального ксилотрофа С. Зоьа , имеет молекулярную массу 1кДа и состоит из двух субъединиц по кДа. Полученный лектин представляет собой гидрофильный термостабильный гликопротеин с соотношением частей протеин гликан как проявляет высокую специфичность к линейному Эрамнану ОПС1, выделенному из ЛПС1 грамотрицательных диазотрофных ризобактерий А. ЬгаьИете 8р5. Лектин 7. Зояа взаимодействует как со специфическими к лектину, так и с неспецифическими к Оантигенам бактерий 8р5, 7 поликлональными кроличьими антителами, а также с углобулином человека. Связывание лектина с гомологичными антителами происходит с участием антигенсвязывающего центра ябфрагментов. Взаимодействие лектина с негомологичными антителами обусловлено его связыванием с углеводной частью молекул антител. Равновесные системы взаимодействия лектина С. Однако различие в величинах изменений стандартной свободной энергии АС обеих систем несущественно, что говорит о примерно одинаковом количестве связей, участвующих в контакте молекул лектина и антител обоих типов. При совместном культивировании базидиомицета О. А. ЬгаяИепзе штамма 8р5 и его ОмегонКт мутантов, дефектных по ЛПС, установлены биоспецифические лектинуглеводные взаимодействия, отражающиеся на морфологических характеристиках грибного мицелия. При этом с наименьшим антагонизмом распознаются штаммы А. Ьгаьйете, в клеточной стенке которых экспонирован ЛПС1 с гаптенным ОПС1. Лектин гогкУояа в диапазоне концентраций 0. КМ2 и КМ8 с ЛИСП не происходит. Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на 8 Пущинской школеконференции молодых ученых Биологиянаука века Пущино, Россия, , на 3ей Межрегиональной конференции молодых ученых Стратегия взаимодействия микроорганизмов и растений с окружающей средой Саратов, Россия, , на м Международном симпозиуме по углеводам Уистлер, Канада, , на 5м Всероссийском Конгрессе по медицинской микологии Москва, Россия, , на м Международном конгрессе европейских микологов СанктПетербург, Россия, , на Всероссийской конференции с международным участием Фундаментальные и прикладные аспекты исследования симбиотических систем Саратов, Россия, , на Всероссийской научнопрактической конференции Вавиловские чтения Саратов, Россия, . Диссертационная работа обсуждена на расширенном заседании лаборатории микробиологии и микологии ноября г. Публикации. По теме диссертации опубликовано работ, из них 2 статьи в отечественных рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК РФ, и 1 статья в зарубежном рецензируемом издании. Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследований, изложения и обсуждения результатов работы, заключения, выводов и списка цитируемой литературы, включающего 7 источников. Объем диссертации составляет 1 машинописных страниц. Работа содержит рисунков и 5 таблиц.