Выявление противодифтерийных антибактериальных антител с помощью иммуноферментного анализа

• Автор: Макарова, Светлана Игоревна
• Шифр специальности: 03.00.07, 14.00.36
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 139 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений

Введение.

Обзор литературы

Глава 1. Фило и онтогенетические механизмы гуморального иммунитета

1.1. Иммуноглобулины

1.2. Кинетика антителообразования. Первичный и вторичный ответ. Иммунологическая память.

1.3. Иммунная реактивность

1.3.1. Иммунная реактивность в детском возрасте

1.3.2. Иммунная реактивность при старении.

1.3.3. Иммунная реактивность при различных патологиях.

Глава 2. Противодифтерийный иммунитет
2.1. Ведущая роль антитоксического иммунитета
2.2. Методы определения противодифтерийных антитоксических
антител
2.2.1. Реакция пассивной гемагглютинации
2.2.2. Реакция нейтрализации токсина в культуре клеток Уего.
2.2.3. Иммуноферментный анализ
2.3. Антибактериальный иммунитет
2.3.1. Проблемы, связанные с дифтерийной инфекцией
2.3.2. Бактериальные антигены С. брДегае.
2.3.3. Особенности проявления антибактериального иммунитета
Глава 3. Материалы и методы исследования
3.1. Материалы исследования.
3.2. Методы исследования
3.3. Статистические методы
Собственные исследования Глава 4. Разработка иммуноферментной тестсистемы
4.1. Выбор рабочей дозы антигена и разведения конъюгатов.
4.2. Выбор оптимальных значений буферных растворов
4.3. Подбор оптимального температурного режима и времени инкубации
4.4. Специфичность.
4.5. Воспроизводимость.
4.6. Выражение результатов ИФА.
4.7. Оптимальные условия постановки ИФА для определения антибактериальных противодифтерийных антител I, I, I изотипов в сыворотках крови различных групп людей
Глава 5. Изучение противодифтерийных антител в сыворотках крови
различных контингентов людей
5.1. Здоровые взрослые люди лет контрольная группа.
5.2. Дети
5.3. Здоровые взрослые люди в возрасте лет.
5.4. Изучение противодифтерийных антител в сыворотках крови людей из очагов носительства токсигенных коринебактсрий дифтерии
5.4.1. Пациенты психиатрической больницы.
5.4.2. Воинский коллектив.
Глава 6. Обсуждение результатов.
Список литературы


Кроме того, антитела обнаруживают в других жидких средах организма, например в лимфе, молоке особенно в молозиве, спинномозговой и тканевой жидкостях, в различных секретах и воспалительных выпотах , , , 6, 2. Однако ИГ выявляют не только в свободном состоянии в жидкостях организма, но и на клетках лимфоидной системы, в основном на Влимфоцитах, где они выполняют роль антигенсвязывающих рецепторов . ИГ принадлежат к полуфункциональным белкам, которые в качестве антител и рецепторов Влимфоцитов, специфически распознают самые разнообразные лиганды АГ, способны взаимодействовать с лимфоидными и другими клетками, компонентами комплемента и пр. Структуры, ответственные за многообразные функции ИГ, находятся в разных участках молекул этих белков. Молекула ИГ состоит из 4 гликолизированных полипептидных цепей 2 легких и 2 тяжелых, соединенных дисульфидными мостиками в симметричную структуру, открытую Р. Портером и Дж. Эдельманом в году , , , , , 5, 8 рис. Согласно номенклатуре ВОЗ существуют 5 классов ИГ 10,1М, А, 1 Е. Они различаются по типу тяжелых цепей. Легкие цепи могут быть только двух типов к и X. ИГ одного класса могут содержать как к, так и Хцепи. Мономерные ИГ, например I, состоят из одной молекулы, полимерные I, I из нескольких. Помимо легких и тяжелых цепей молекулы полимерных ИГ включают цепь, а молекулы I секреторный компонент. Обе цепи ИГ имеют вариабельный V и константный С участки. Последовательность аминокислот константного участка ИГ постоянна для каждого вида животных, а структура вариабельного участка отличается большой изменчивостью до 0 ООО вариантов последовательности аминокислот. Но именно вариабельные участки каждой легкой и тяжелой цепей ИГ сообща образуют место связывания АГ , , . При воздействии на ИГ протеолитических ферментов можно выделить два антигенсвязывающих фрагмента англ. i ii и один кристаллизующийся фрагмент иммуноглобулина i . фрагменты содержат вариабельные участки и Нцепей вместе с активными центрами антитела. Именно эти участки ответственны за связь антитела с АГ. В фрагменте расположены центры, ответственные за разнообразные биологические функции ИГ фиксацию на фагоцитах и лимфоцитах, связывание первого компонента системы комплемента, транспорт через плаценту и другие биологические мембраны , 2, 2. В ходе становления иммунного ответа Влимфоциты последовательно экспрессируют ИГ разных изотипов. Этот феномен последовательного переключения с одного изотипа иммуноглобулина на другой изотипическое переключение позволяет одному Вклеточному клону продуцировать антитела одной и той же специфичности, но с разными эффекторными функциями, соответствующими строению их тяжелых цепей 9, 2. Рис. Это наиболее изученный класс антител. Содержатся в сыворотке крови в самой высокой концентрации и составляют всех ИГ. Это единственный ИГ, который способен проходить через плаценту , . После введения АГ в организме преобладают М, а по мере развития иммунного ответа повышается аффинитет активность вантитсл. Они двухвалентны, принимают участие в реакциях преципитации, агглютинации, опсонизации корпускулярных АГ, а также в реакциях лизиса при наличии комплемента, обладают выраженным свойством нейтрализации токсинов, выдерживают нагревание до С в течение минут 2. Для усиления синтеза 1в требуется более длительная стимуляция АГ, чем для синтеза М. Молекулы способны связываться АГ и фиксированными клетками тканей, а также вызывать специфическую сенсибилизацию организма по типу реакции гипсрчувствительности немедленного типа. Так, антитела против полисахаридов относятся преимущественно к подклассу антирезусные антитела к 1С4. Реакцией связывания комплемента обладают преимущественно подклассы 3i и вз, кожной чувствительностью 1 и 14 , . Аминокислотная последовательность подклассов очень сходна. В их константных областях на наблюдается совпадение аминокислотных последовательностей. Различия, в основном, касаются последовательностей шарнирных участков и числа сульфидных связей 0.