Изучение анти-ВИЧ активности новых комплексных мембранотропных соединений

• Автор: Тимофеев, Денис Игоревич
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Кольцово
• Количество страниц: 134 с. : ил.

Введение

Глава 1. Обзор Литературы . .

1.1. Антиретровирусные препараты и их мишени

1.2. Взаимодействие ВИЧ1 с рецепторами клеточной мембраны

2.2. Взаимодействие рецептора 4 с гликопротеином оболочки ВИЧ I.

2.3. Рецепторы хемокинов корецепторы ВИЧ

2.3.1. 5 клеточный корецептор ВИЧ.

2.3.2. x4 клеточный корецептор ВИЧ

3. АнтиВИЧ соединения, действующие на стадии проникновения вируса в клетку

3.1. Соединения, блокирующие взаимодействие гликопротеина ВИЧ1 с клеточным рецептором 4.

3.1.1. Соединения, воздействующие на вирусный оболочечный белок

3.1.2. Соединения, блокирующие клеточный рецептор
3.2. Соединения, воздействующие на хемокиновый рецептор
3.3. Соединения, воздействующие на хемокиновый рецептор x4.
3.4. Ингибиторы слияния вирусной оболочки и клеточной мембраны
3.5. Соединения комбинированного действия.
Глава 2. Материалы и методы исследования.
2.1. Материалы
2.1.1. Вирус.
2.1.2. Культуры клеток.
2.1.3. Исследуемые соединения
2.2. Методы.
2.2.1. Ведение культуры лимфобластоидных клеток МТ4.
2.2.2. Культивирование и определение инфекционноети штаммов ВИЧ
2.2.3. Оценка цитотоксичности противовирусных препаратов.
2.2.4. Определение антиВИЧ активности мембранотропных препаратов
2.2.5. Иммуноферментный анализ ингибирования накопления вирусного АГр в культуре клеток.
2.2.6. Статистическая обработка данных.
ГЛАВА 3. Результаты исследований
3.1. Токсичность комплексных мембранотропных соединений и их компонентов
3.2. Определение фазы жизненного цикла ВИЧ, на котором исследуемые соединения проявляют ингибирующее действие.
3.3. АнтиВИЧ активность базовых полимерных соединений
3.4. АнтиВИЧ активность адамантансодержащих соединений на базе матриц разных типов.
3.5. Активность комплексных препаратов в отношении штаммов ВИЧ1 в зависимости от длины спенсера и типа модификатора.
3.6. Анализ антиВИЧ активности соединений, с включенными в состав пептидами
3.6.1. Выбор и синтез пептидов имитаторов корецепторов ВИЧ ССК5, СхСЯ
3.6.2. Анализ антиВИЧ активности пептидов имитаторов корецепторов ВИЧ, комплексных пептидсодержащих препаратов и смесей их компонентов
3.6.3. АнтиВИЧ активность комплексных препаратов, содержащих гидрофобные агенты и пептидные имитаторы корецепторов ВИЧ.
3.6.4. Сравнение бинарных пептидсодержащих соединений с препаратами, модифицированными адамантаном или иорбориеном.
3.6.5. Исследование антиВИЧ эффективности препаратов при многократном внесении их в культуру клеток МТ4 в течение инкубации
3.6.6. АнтиВИЧ активность комбинаций мембранотропных препаратов
Глава 4. Обсуждение результатов
Заключение.
Выводы.
Список литературы


На модели острой ВИЧинфекции i vi определены количественные характеристики противовирусной активности данных соединений. Изучена антиВИЧ активность новых трехкомпонентных соединений тип МГАП, содержащих как пептидные фрагменты корецепторов ВИЧ, так и известные мембранотропные гидрофобные агенты адамантан, норборнен. Определены количественные характеристики противовирусной активности данных соединений в культуре клеток МТ4, инфицированной ВИЧ1. Определен этап жизненного цикла ВИЧ, на котором исследованные соединения реализуют противовирусную функцию. Выявлен аддитивный эффект при совместном применении бинарных соединений 7, 4, 2 тип МГА и 3, 5 тип МП в соотношениях 1 МГАМП. ВИЧ 5, в соотношении и аддитивность их совместного действия в соотношении 1. Апробация работы и публикации. Материалы диссертации вошли в 5 опубликованных статей, были представлены и обсуждены на следующих конференциях и семинарах II научной конференции Проблемы инфекционной патологии в регионах Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера Новосибирск, международных семинарах i i ii , Iiv ii Высокие Татры, Словакия, международной научной конференции Медикобиологические и экологические проблемы здоровья человека на Севере Сургут, I международном симпозиуме Стресс и экстремальные состояния КараДаг, Крым, Украина, X международной конференции Новые информационные технологии в медицине и экологии Феодоссия, Крым, Украина. Прогрессивные научные технологии для здоровья человека КараДаг, Крым, Украина, XIV научной конференции конкурсе молодых ученых ГНЦ ВБ Вектор Кольцово, . Личный вклад автора заключается в проведении основной части экспериментов по оценке цитотоксичности и антиВИЧ активности исследуемых соединений, как вирусологическим, так и иммуноферментным методом обработке и анализе полученных данных активном участии в поиске и анализе литературных данных при выборе фрагментов клеточных корецепторов ВИЧ для синтеза пептидов псевдолигандов для поверхностных гликопротеинов ВИЧ1. Карпышеву ГНЦ ВБ Вектор за синтез пептидов Я. Ю. Киселевой ГНЦ ВБ Вектор за любезно предоставленные данные по протективному действию ряда изучаемых препаратов на клетки, инфицированные устойчивым к АЗТ вариантом ВИЧ1 В. В. Неклюдову ГНЦ ВБ Вектор за разработку программного обеспечения для обсчета полученных данных Н. М. Бормотовой и Щуке ГНЦ ВБ Вектор за помощь при проведении экспериментальных работ Н. Г. Перминовой, Плясуновой и И. В. Тимофееву ГНЦ ВБ Вектор за обучение навыкам культуральной работы и ценные советы при написании статей и обсуждении результатов. Работа выполнена при поддержке гранта ВТЕРЮ МНТЦ р. Глава 1. Обзор Литературы. Антиретровирусные препараты и их мишени. Разработкой антиВИЧ препаратов заняты многие ведущие лаборатории мира. Помимо рутинного поиска, при котором проверяется любое новое антивирусное соединение, проводится направленный скрининг, основанный на знании принципиальных событий репликационного цикла ВИЧ см. Потенциальными мишенями для химиотерапевтического вмешательства являются не только ферменты вирусного происхождения, но и другие вирусные и клеточные структуры такие, как белки и нуклеиновые кислоты, задействованные в рспликационном цикле ВИЧ. В настоящее время для лечения ВИЧинфицированных пациентов используют, как минимум, лицензированных антиретровирусных препаратов, которые подавляют репликацию ВИЧ. Возможность использования этих препаратов в развитых странах значительно улучшили качество и продолжительность жизни заболевших людей. Однако, имеющийся в наличии арсенал лекарственных средств, позволяет лишь подавить вирусную репликацию у большей части больных на определенный, иногда довольно длительный срок, т. Таким образом, подобной терапией удастся только продлить жизнь больного, но нет возможности полностью остановить инфекционный процесс и излечить СПИД полностью , . Более того, применение ограниченного круга узкоспециализированных препаратов провоцирует активное формирование мутантных штаммов вируса, невосприимчивых к известным лекарствам I, . Поэтому поиск новых подходов для борьбы с инфекцией и новых антиВИЧ агентов является задачей актуальной и неотложной.