Обнаружение и характеристика инсулиноподобных пептидов нервной ткани моллюска Anodonta cygnea

• Автор: Шипилов, Валерий Николаевич
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 105 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 СТРУКТУРА И ФУНК1ЩИ ГОРМОНОВ СУПЕРСЕМЕЙСТВА ИСУЛИЛ ПОЗВОНОЧНЫХ ЖИВОТНЫХ.

1.1.1. Семейство инсулина

1.1.2. Семейство ИФР1..

1.1.3. Семейство ИФРН.

1.1.4. Семейство релаксина.

1.1.5. Сигнальные пути действия гормонов инсулинового суперсемейства.

1.2. ИНСУЛИНОПОДОБНЫЕ ПЕГ 1ТИДЫ НЕРВНОЙ СИСТЕМЫ БЕСПОЗВОНОЧНЫХ ЖИВОТНЫХ

1.2.1. Структурнофункциональная организация ИП беспозвоночных.

1.2.2. Клетки нервной системы, продуцирующие ИНН.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ЖИВОТНЫЕ
2.2. ВЫЯВЛЕНИЕ ИНСУ Л ИНИММУ НОРЕ АКТИВНЫХ КЛЕТОК В ГАНГЛИЯХ МОЛЛЮСКА ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИМ МЕТОДОМ
2.3. СРАВНИТЕЛЬНЫЙ КОМПЬЮТЕРНЫЙ АНАЛИЗ мРНК ИГ1П РАЗЛИЧНЫХ ВИДОВ БЕСПОЗВОНОЧНЫХ
2.4. ПОДБОР ПРАЙМЕРОВ И АМПЛИФИКАЦИЯ мРНК МОЛЛЮСКА С ПОМОЩЬЮ ПЦРАНАЛИЗА.
2.5. ВЫДЕЛЕНИЕ И ОЧИСТКА РИН ИЗ НЕРВНОЙ ТКАНИ МОЛЛЮСКА.
2.6. ПОЛУЧЕНИЕ ФРАКЦИИ ПЛАЗМАТИЧЕСКИХ МЕМБРАН ПЕЧЕНИ КРЫС
2.7. ПОЛУЧЕНИЕ ГЕТЕРОГЕННОЙ ФРАК1ЩИ КЛЕТОЧНЫХ МЕМБРАН МОЗГА КРЫС
2.8. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СПЕЦИФИЧЕСКОГО СВЯЗЫВАНИЯ РИП МОЛЛЮСКА С РЕЦЕПТОРАМИ ИНСУЛИНА И ИФР1
2.9. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ АДЕНИЛАТЦИКЛАЗЫ И ГТФСВЯЗЫВАНИЯ В МЫШЕЧНОЙ И НЕРВНОЙ ТКАНЯХ.
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ.
3.1. ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ В ГАНГЛИЯХ МОЛЛЮСКА НЕЙРОНОВ, СОДЕРЖАЩИХ ПЕПТИДЫ, РОДСТВЕННЫЕ ИНСУЛИНУ
3.2. АМПЛИФИКАЦИЯ УЧАСТКОВ мРНК, ПРЕДПОЛОЖИТЕЛЬНО КОДИРУЮЩИХ РИП МОЛЛЮСКА
3.3. ВЫДЕЛЕНИЕ И ОЧИСТКА РОДСТВЕННЫХ ИНСУЛИНУ ПЕПТИДОВ МОЛЛЮСКА
3.4. ОЦЕНКА СПОСОБНОСТИ РИП МОЛЛЮСКА ВЗАИМОДЕЙСТВОВАТЬ С РЕЦЕПТОРАМИ ИНСУЛИНА И ИФР1
3.5. ВЛИЯНИЕ РИП МОЛЛЮСКА НА АК ТИВНОСТЬ АДЕНИЛАТЦИКЛАЗЫ И ГТФСВЯЗЫВАНИЯ вБЕЛКОВ.
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ.
4.1. КЛЕТКИ, СИН ТЕЗИРУЮЩИЕ РОДСТВЕННЫЕ ИНСУЛИУ ПЕПТИДЫ В ГАНГЛИЯХ Я. СУСЖЯ.
4.2. ПРИРОДНЫЕ ВАРИАНТЫ ГОРМОНОВ ИНСУЛИНОВОГО СУПЕРСЕМЕЙСТВА КАК ОТРАЖЕНИЕ СТРУКТУРНОГО ПОЛИМОРФИЗМА ПЕПТИДОВ
4.3. ПЛЕЙОТРОПИОСТЬ ДЕЙСТВИЯ НЕЙРОПЕПТИДОВ БЕСПОЗВОНОЧЫХ КАК ПРИЗНАК ДИВЕРГЕНЦИИ ФУНКЦИЙ.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


ПЛЕЙОТРОПИОСТЬ ДЕЙСТВИЯ НЕЙРОПЕПТИДОВ БЕСПОЗВОНОЧЫХ КАК ПРИЗНАК ДИВЕРГЕНЦИИ ФУНКЦИЙ. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ. РИП родственные инсулину пептиды моллюска Апос Актуальность проблемы. Обнаружение инсулина, инсулиноподобных факторов роста ИФР, релаксина и их рецепторов в ЦНС позвоночных привело к изменению представлений о происхождении и роли гормонов инсулинового суперсемсйства Бондарева и др. Бондарева, Лейбуш, vv . i . vi . v . Однако, несмотря на идентификацию и выявление экспрессии генов инсулиноподобных пептидов И1Ш в нервной ткани, их биологические свойства и функции изучены недостаточно. Таким образом, установление природы и роли ИПП, синтезируемых нервной тканыо, остается одной из актуальных проблем современной нейроэндокринологии. Известно, что обнаруженные в нервной ткани гормоны инсулинового супсрсемейства регулируют утилизацию глюкозы по аутокринному и паракринному типу, а также осуществляют в ЦНС нейромодуляторные и нейромедиаторные функции . , . В их компетенцию также входят некоторые анаболические и антиапоптотические функции, контроль процессов роста, дифференцировки нейронов и синаптогеиеза, участие в регуляции пищевого поведения и ряда когнитивных функций Баркан и др. . . , . , , . Что касается нейрокрииной продукции гормонов инсулинового суперсемсйства, то она показана для ИФР и релаксина, тогда как сведения, позволяющие однозначно ответить на вопрос о синтезе инсулина в ЦТ 1 позвоночных до сих пор отсутствуют i . Синтез инсулина у позвоночных показан только в эмбриональной нервной ткани . v . Значительные успехи в изучении проблемы достигнуты в исследованиях на беспозвоночных, у которых основным местом синтеза ИПП является нервная ткань. ii . . . i . . i . i . i . Особенностью ИПП беспозвоночных является полиморфизм генов, кодирующих множественные изоформы, что практически не встречается у позвоночных. Число изоформ пептидов, синтезируемых нейронами отдельных видов, может колебаться от 2 моллюск i ii до нематода ii . Различия аминокислотных последовательностей между изоформами могут превышать , что предполагает разнонаправленность их действия. Немногочисленные данные свидетельствуют о проявлении метаболических и ростстимулирующих эффектов ИПП нервной ткани беспозвоночных, однако, регуляторная роль большинства известных пептидов во многом остается не выясненной . В данной работе впервые выявлена локализация инсулиноподобиых пептидов в ганглиях пресноводного двустворчатого моллюска , показана способность нейронов к их синтезу, проведены выделение и очистка из ганглиев пептидов, обозначенных нами как родственные инсулину пептиды РИП, оценена способность полученных РИП связываться с рецепторами инсулина и ИФРI, а также влияние пептидов на активность адснилатциклазной сигнальной системы, реализующей действие гормонов инсулинового суперсемейства. Целью настоящей работы явилось обнаружение и характеристика родственных инсулину пептидов в нервной ткани моллюска . Установить локализацию клеток, синтезирующих инсулиноподобные пептиды в ганглиях с помощью иммуногистохимического метода и показать присутствие мРНК, кодирующих пептиды моллюска. ИФР1 тканей позвоночных, а также по регуляторному эффекту пептидов на внутриклеточный аденилатциклазный сигнальный каскад. Основные ПОЛОЖСНШ Обнаружение в нервных ганглиях моллюска . Выделение РИГТ из ганглиев . ВЭЖХ очистка подтверждает присутствие в нервной ткани этого вида моллюска пептидов, сходных с инсулинами позвоночных. Оценка способности РИП, полученных из ганглиев . ИФР1 в специфичных радиолигандиых тестсистемах даст основание считать исследуемые пептиды функционально близкими к гормонам инсулинового суперсемейства.