Особенности регуляции апоптоза при опухолевых, вирусных и аутоиммунных заболеваниях

• Автор: Белушкина, Наталья Николаевна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 260 с. : ил.

Содержание Список сокращений Введение

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Апоптоз как общебиологический механизм гибели клеток

1.1.1. Морфологические изменения в процессе апоптоза

1.1.2. Молекулярнобиохимические изменения в процессе апоптоза

1.1.3. Пути передачи апоптотического сигнала в клетку

1.2. Белки семейства Вс

1.2.1. Функциональные домены белков семейства Вс и их участие в формировании димеров

1.2.2.Пороформирующая активность белков семейства Вс

1.2.3. Антиапоптотические белки 1.2.4.роапоптотические мультидоменные белки

1.2.5.Влияние белков семейства Вс на прохождение по клеточному циклу

1.2.6. Механизм действия белков семейства Вс
1.2.7. Взаимодействие различных путей апоптоза
1.3. Заболевания, связанные с нарушением регуляции апоптоза
1.3.1. Нарушение регуляции апоптоза при опухолевых заболеваниях.
1.3.2. Апоптоз и вирусная инфекция
1.3.3. Апоптоз и аутоиммунные заболевания
1.4. Принципы коррекции апоптоза клетки с использованием геннотерапевтических подходов
ГЛАВА II. МА ТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Исследование регуляции апоптоза при онкологических заболеваниях
3.1.1. Исследование нарушений регуляции внутреннего пути апоптоза 3 при новообразованиях желудка и толстой кишки
3.1.1.1. Иммуногистохимическое исследование уровня 4 экспрессии белков семейства Вс.
3.1.1.2. Выявление мутаций в С8последоватсльности 3 экзона гена 8 Вах
3.1.2. Исследование нарушений регуляции внешнего пути апоптоза при 5 новообразованиях желудка и толстой кишки
3.1.2.1. Экспрессия при новообразованиях желудка и толстой кишки
3.1.2.2. Экспрессия при новообразованиях желудка и толстой кишки
3.2. Исследование регуляции апоптоза при вирусных заболеваниях
3.2.1. Исследование апоптоза в лимфоцитах периферической крови пациентов 6 с Тклеточной лимфомой кожи.
3.2.1.1. Анализ геномов вирусов V, V, V1, IIV2 и V, у 7 пациентов с Тклеточными лимфомами кожи.
3.2.1.2. Исследование индукции апоптоза в первичной культуре 0 лимфоцитов пациентов с Тклеточной лимфомой кожи под действием доксорубицина.
3.2.2. Исследование уровня апоптоза и экспрессии белков и в ткани 6 печени больных хроническим вирусным гепатитом В и С.
3.2.2.1. Анализ основных клиниколабораторных показателей 6 исследованной группы больных.
3.2.2.2. Исследование уровня апоптоза гепатоцитов и клеток лимфо 8 гистиоцитарного инфильтрата в печени больных хроническим вирусным гепатитом В и С с помощью метода i i.
3.2.2.3. Иммуногистохимическое исследование уровня экспрессии белков
и в ткани печени больных хроническим вирусным гепатитом В и С.
3.2.2.4. Изучение взаимосвязи между уровнем апоптоза в клетках печени
и уровнем экспрессии белков и в этих клетках у больных хроническим вирусным гепатитом В и С.
3.2.3. Исследование уровня апоптоза в сравнении со степенью повреждения 0 ДНК в мононуклеарных и полиморфноядерных лейкоцитах периферической крови больных ХВГ В и С.
3.2.3.1. Исследование уровня апоптоза лейкоцитов периферической крови 3 больных хроническим вирусным гепатитом В и С непосредственно после выделения и после культивирования i vi в течение суток.
3.2.3.2. Анализ уровня апоптоза лейкоцитов периферической крови в сравнении с уровнем сывороточного фактора некроза опухолиа у 8 больных хроническим вирусным гепатитом.
3.3. Исследование регуляции апоптоза при аутоиммунной патологии.
3.3.1. Исследование уровня апоптоза клеток периферической крови при
системной красной волчанке.
3.3.1.1. Исследование взаимосвязи между уровнем повреждения ДНК и 2 апоптозом лейкоцитов.
3.3.1.2. Исследование корреляции между титром аутоантител, уровнем повреждений ДНК и апоптозом клеток крови.
3.3.1.3. Исследование предрасположенности к апоптозу различных субпопуляций лимфоцитов больных системной красной волчанке.
3.3.2. Исследование роли системы в регуляции апоптоза при
системной красной волчанке.
3.3.2.1. Исследование экспрессии и оценка уровня апоптоза 2 различных субпопуляций лимфоцитов.
3.3.2.2. Определение растворимого в плазме больных системной красной волчанке.
3.3.2.3.Определение зависимости относительного содержания от
содержания активированных лимфоцитов.
3.3.2.4. Изучение взаимосвязи уровня и титра антиядерных антител
3.3.2.5. Изучение системы комплемента у больных СКВ.
3.3.2.6. Изучение антифосфолипидного иммунного ответа.
3.4. Коррекция апоптоза на основе генной терапии
3.4.1. Изучение устойчивости клеточных линий к противоопухолевым 2 препаратам после трансфекции гена Вс.
3.4.2. Регуляция устойчивости опухолевых клеток к противоопухолевым 8 препаратам с помощью антисмысловых олигонуклеотидов к гену 2.
3.4.3. Инактивация и сенсибилизация опухолевых клеток с помощью
трансфекции гена Вах.
Заключение
Выводы
Список цитированной литературы


Стехиометрия компонентов I на настоящий момент не ясна 3. Имеются данные, что I включает олигомеризованный, наиболее вероятно, что тримеризованный, фосфорилирусмую по остатку серина адаптерную молекулу две изоформы каспазы8 каспаза8а и каспаза8Ь и САРЗ молекулу, которая содержит концевые каспазы8 и пока еще нехарактеризованную Сконцевую область. Кроме того, молекула подобная каспазе8, I является общим компонентом I. I устраняет связывание каспазы8 в I и, таким образом, предотвращает ее активацию 3, 5. После расщепления прокаспазы8 про домен каспазы остается в I, а активная каспаза8 отделяет от I и инициирует каскад активации последующих каспаз, что представляет собой эффекторную стадию апоптоза 3. Активная каспаза8 расщепляет и активирует молекулы эффскторной каспазы3 1. Далее каспаза3 способна аутокаталитически активировать другие молекулы касиазыЗ, а также ряд других каспаз. Кроме этого, активная каспаза3 индуцирует апоптотические изменения в ядре и цитоплазме 1. Так запускается каскад протеолитических событий, лежащих в основе апоптоза. Митохондрии биоэнергетические и метаболические центры эукариотических клеток. При апоптозе митохондрии подвергаются специфическим повреждениям, которые ведут к утрате их функций. На этой органелле сосредоточено множество сигнальных путей, которые образуют столь сложную систему взаимовлияний, что во многих случаях механизмы действия того или иного сигнала не выяснены, а данные, полученные разными исследователями, противоречивы 3, 4, 6. Митохондрии играют проапоптотическую роль в большинстве модельных систем, запуская падение электрохимического градиента и трансмембранного потенциала на внутренней мембране митохондрий ТМПМ, разобщение переноса электронов по дыхательной цепи и окислительного фосфорилирования, образование АФК, высвобождение ионов Са2 из внутриклеточных хранилищ, открытие РТпор, набухание матрикса, разрыв внешней мембраны митохондрий и высвобождение апоптогенных факторов в цитоплазму 0, 4. В первую очередь изменение функционирования митохондрий при апоптозе выражается в падении ТМПМ. Рассеивание ТМПМ является общей чертой апоптоза для большинства типов клеток и не зависит от условий индукции апоптоза. Это достаточно раннее событие в процессе развития апоптоза, за которым следуют характерные морфологические изменения апоптоза. Однако среди исследователей на сегодняшний день нет единого мнения, является ли коллапс ТМПМ причиной или следствием изменений, происходящих в клетке при ГОСТ 2. Вместе с падением ТМПМ в митохондриях происходят более глубокие изменения, связанные с изменением проницаемости мембран и выходом из межмембранного пространства митохондрий различных факторов, участвующих в регуляции апоптоза. Основными факторами, выбрасываемыми митохондриями в цитоплазму, являются цит с, I, , эндонуклеаза , термолабильный фактор, а также прокаспазы2, 3 и 9 , 0, 6. Высвобождение цит с универсальная особенность апоптоза. Однако в некоторых случаях высвобождение цит с протекает на более поздних стадиях развития апоптоза и, вероятно, является результатом активации каспаз 1. Цит с компонент цепи переноса электронов, водорастворимый положительно заряженный белок, свободно прикрепленный в межмембранном пространстве митохондрий инициирует каспазный каскад, при высвобождении из митохондрий . Цит с необходимый кофактор дтя активации каспаза3подобных протеаз. АТФ, активируют каспазу9 З, которая затем расщепляет прокаспазу3 до активной каспазы3 ,9,4,4. Д, который в норме существуют как неактивный мономер и содержит домен взаимодействия с каспазами, домен на конце, домен связывания с нуклеотидами и повторяющихся последовательностей на Сконце, которые необходимы для связывания с цит с 8, 4. I во внешнем пути апоптоза. Сам 1 плохо связывает нуклеотиды дАТФ или АГФ, несмотря на наличие соответствующих последовательностей. Связывание цит с увеличивает аффинность 1 к дАТФАТФ примерно в раз. Возможно, что в результате присоединения цит с открывается участок, связывания нуклеотидов или стабилизируется комплекс 1 с нуклеотидом.