Структурные особенности участка узнавания холинергических лигандов нАХР зрительных ганглиев кальмара

• Автор: Пляшкевич, Юрий Геннадьевич
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1985
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 143 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Биохимические свойства никотиновых рецепторов ацетилхолина Ю

а Нейромышечные нАХР Ю

б нАХР нервной системы позвоночных .

в нАХР нервной системы беспозвоночных . .

Заключение

2. Современные подходы к изучению участка узнавания нАХР

а Метод химической модификации.

б ХимикоФармацевтический подход к изучению участка узнавания нАХР

Заключение
ГЛАВА П. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
ГЛАВА Ш. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
1. Идентификация участков связывания Щ и СТК в мембранных препаратах ЗГК
2. Фармакологические и биохимические свойства
нАХР ЗГК
а рНзависимость специфического связывания МЦ и 4СТК с мембранными препаратами
б Изучение стабильности специфического связывания НЩ и 4СТК 6
в Фармакологические свойства нАХР ЗГК . .
Стр.
г Анализ содержания углеводных остатков
в нАХР ЗГК.
3. Анализ конформаций соединений, взаимодействующих с нАХР ЗГК
4. Химическая модификация нАХР ЗГК.
ГЛАВА 1У. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
ЛИТЕРАТУРА


Этот качественный скачок стал возможен благодаря удачному выбору объекта исследования электрического органа рыб, предложенного Нахманзоном 2, и использованию уникальных по своей специфичности к нейромышечным нАХР инструментов . Зги нейротоксины, введенные в практику лабораторных исследований Ли 3, нашли широкое применение в целях характеризации, выделения и очистки нАХР из различных источников 48. Электрический орган представляет собой производное мышечной ткани со значительно иннервированной поверхностью, образующей области постсинаптических контактов 9. За счет этого упрощается выделение мембранносвязанных и солюбилизированных рецепторов, содержание которых составляет около пмольг ткани. Содержание никотиновых рецепторов ацетилхолина в поперечнополосатых мышцах животных значительно меньше и колеблется от 6 пмольг ткани для нормальной до пмольг ткани для иннервированной мышцы . Итоги изучения нейромышечных нАХР изложены в ряде обзоров 1,5,, ниже будут приведены их основные структурные и функциональные характеристики. Совокупность результатов биохимических и физикохимических экспериментов доказывает, что нАХР являются интегральными мембранными белками II. Шкромолекулярный комплекс нАХР из электрического органа образован пятью белковыми субъединицами, две из которых являются эквивалентными, и имеет субъединичную формулу ыг , р,, , . Молекулярная масса субъединиц нАХР из электрического органа , рассчитанная на основании данных гельэлектрофореза на полиакриламидном геле в додецилсульфате натрия, составляет кД , кД р , кД Д . ЭТИМ значениям молекулярные массы субъединиц НАХР ИЗ кД, кД, кД, кД и нАХР из мышц быка кД, кД, кД, кД . В мембранах нАХР существует в виде дилера, образованного за счет гидрофобных взаимодействий мецду мономерами, стабилизированного дисульфидной связью между Сконцевыми фрагментами субъединиц ,. Каждый мономер рецепторного комплекса содержит по два участка связывания ацетилхолина , и катионспецифичный ионный канал ,. АХР имеет форму гриба, шляпка которого высотой 5,5 нм и диаметром II нм экспонирована наружу в синаптическую щель, тело проходит сквозь мембрану, а нояка находится на ее цитоплазматической поверхности и имеет диаметр около 1,5 нм ,. Ацетилхолиновый рецептор из мышц человека и быка имеет тот же радиус Стокса при центрифугировании в градиенте сахарозы, антигенные детерминанты, соответствующие всем четырем субъединицам НАХР , ЧТО ЯВЛЯеТСЯ ДОПОЛНИТвЛЪНЫМ СВИдетельством высокой степени гомологичности рецепторов из электрического органа и мышечной ткани млекопитающих. АХР электрического органа , при посттрансляционном встраивании рецептора в мембрану ыконцевые фрагменты оказываются экспонированными наружу . Эти не фрагменты субъединиц рецептора несут участки узнавания холинергических лигандов, что подтверждается способностью водорастворимых фрагментов, полученных ферментативным расщеплением мембранносвязанного нАХР, связывать . Все четыре субъединицы рецептора гликозилированы. Найдены остатки маннозы, Дглгакозы, галактозы и ацетилглюкозамина. Сиаловые кислоты отсутствуют 5,,. Углеводные компоненты расположены вблизи участка узнавания нАХР, причем, лсубъединицы одного мономера различаются по степени гликозилирования, что отражается на их способности взаимодействовать с алкилирующими агентами . Мышечный нАХР содержит ковалентно связанный остаток фаттиевой кислоты . Крупным достижением в исследовании холинергических рецепторов явилось определение с помощью методов генной инженерии полной аминокислотной последовательности всех четырех субъединиц нАХР из электрического органа т. ДНК функциональноактивного нАХР в ооцитах x . Все субъединицы синтезируются в виде белковпредшественников. Молекулярная масса субъединиц, рассчитанная из аминокислотной последовательности, составляла II6 Д , 1 Д Р , 0 Д л 5 Д . Для всех субъединиц были определены фрагменты, несущие антигенные детерминанты, и участки гликозилирования. Выявлена высокая степень гомологичности субъединиц нАХР. На основании первичной аминокислотной последовательности .