Сравнительное исследование экспрессии и иммунореактивности NMDA рецепторов при экспериментальной церебральной ишемии и геморрагии мозга

• Автор: Гаппоева, Мадина Умаровна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 117 с. : ил

Оглавление
ВВЕДЕНИЕ

ГI I. Обзор литературы

1.1. Перспективы молекулярной диагностики в неврологии

1.2. Нейротоксичность глутамата как один из механизмов инфаркта мозга

1.3. Ионотропные глутаматные рецепторы один из ключевых биомаркеров ишемии

1.4. Экспериментальные модели инфаркта мозга

1.1.1. Модели глобальной ишемии 3

1.1.2. Модели фокальной ишемии

1.4.3.Модели внутрицеребральной геморрагии

ГЛАВА II. Материалы и методики исследований

1. Экспериментальные модели церебральной ишемии и геморрагии
1.1. Субтотальная ишемия
1.2. Фокальная ишемия
1.3. Церебральная геморрагия
1.4. Оценка неврологического дефицита у экспериментальных
2. Подготовка образцов мозга и крови для исследования
3. Биохимические методы
4. Методы изучения экспрессии мРНК рецепторов
5. Иммунохимические методы
6. Методы статистического анализа результатов исследования
ГЛАВА III. Результаты исследования
3.1. Экспериментальные модели инфаркта мозга
определение объема инфаркта и неврологического дефицита у крыс
3.2. Изучение экспресии 2 рецепторов при церебральной ишемии и геморрагии на начальных стадиях образования инфаркта
3.3. Сравнение иммунореактивности 2 рецепторов при церебральной ишемии и геморрагии в зоне инфаркта и интактной области
3.4. Динамика накопления аутоантител к 1 и ЫЯ2В рецепторам в крови экспериментальных животных
ГЛАВА IV. Обсуждение результатов
ЛИТЕРАТУРА


Многолетними исследованиями нашей лаборатории определены ключевые молекулы нейротоксического каскада или аутоантитела к ним, специфично отражающие нарушение метаболизма при ишемии и геморрагии в определенных структурах мозга и коррелирующие с основной симптоматикой заболевания, которые могут быть измерены в биологических жидкостях пациентов и сопоставлены с неврологическими шкалами и данными прижизненной нейровизуализации iv . . . На основе этих исследований разработан гемотест для определения мозгового кровообращения НМКИФАнабор, который проходит в настоящее время клинические испытания в М3 РФ Хунгеев Г. А. и др. Вместе с тем остаются еще не решенными ряд теоретических и практических вопросов, касающихся временных аспектов синтеза, деградации и иммунореактивности рецепторов в условиях снижения мозгового кровообращения на начальных стадиях. Известно, что при моделировании процессов глобальной и фокальной ишемии у животных обнаружены противоречивые результаты экспрессия 2 субъединицы в СА1 нейронах понижается . V . ., . iiii . ., . Практически отсутствуют сведения о роли рецепторов в механизмах церебральной геморрагии . Возникают вопросы, какие ключевые биохимические изменения происходят в зоне инфаркта и прилежащих к ней областях мозга при ишемии и геморрагии в первые часы, когда появляются аутоантитела к нейрорецепторам в крови животного и могут ли они отражать объем инфарктной области, а также коррелировать с неврологическим дефицитом, выявляемым на системном уровне Мы предположили, что рецепторы по разному отражают процессы нейротоксичности на ранних стадиях инсульта экспрессия рецепторов увеличивается при ишемии и снижается при геморрагии Дамбинова С. А. и др. При ишемии избыточные количества глутамата приводят к нарушению функционирования рецепторов, с последующим их разрушением на пептидные фрагменты и инициацией апоптоза. Нарушенный ГЭБ пропускает деструктивные молекулы из мозга в кровоток, вызывая активацию иммунной системы, продуцирующую аутоантитела к собственным мозговым антигенам. При церебральной геморрагии нейротоксичность, вызванная глутаматом, приводит к некрозу нервной ткани и снижению экспрессии рецепторов, поэтому образование аутоантител подавляется. Целью настоящей работы является изучение свойств глутаматных А рецепторов на начальных стадиях развития инфаркта мозга при экспериментальной церебральной ишемии и геморрагии. Изучить иммунореактивность ЫЯ2А2В субъединиц в очаге инфаркта мозга у крыс с церебральной ишемией и геморрагией в первые 6 часов индукции инфаркта. Оценить изменение иммунореактивности А рецепторного комплекса в коре мозга у крыс с церебральной ишемией сроком один месяц после операции. Проследить временную динамику накопления аутоантител к А субъединице ЫМИАрецептора в крови экспериментальных животных. Показано, что ЫК2 рецепторы являются основными биомаркерами, способными дифференцировать процессы нейротоксичности, которые лежат в основе молекулярных механизмов церебральной ишемии. 2 подтипов ЫМЛА рецепторов при церебральной ишемии и геморрагии. Выявлены различия между экспрессией гена Ы2А и иммунореактивностью 2А рецептора при субтотальной и фокальной ишемии. Показано, что экспрессия гена 2 рецептора снижена при геморрагии. Обнаружена разная динамика уровня аутоантител к 12 А рецепторам в крови экспериментальных животных с церебральной ишемией и геморрагией. Впервые представлен биохимический профиль возрастания аутоантител к 2А рецепторам при субтотальной и фокальной ишемии, который позволяет, проводить различия между ишемическими и геморрагическими типами инсульта. На основе вышеуказанных экспериментальных исследований впервые обоснована теоретическая возможность исследования генной экспрессии ключевых биомаркеров нейротоксичности и определения значимости этих показателей для молекулярной генной диагностики инсультов. Научнопрактическое значение. В настоящее время существуют две основные проблемы в диагностике церебральных инсультов. Первая проблема заключается в своевременной оценке состояния мозга в критических ситуациях и дифференциации типа инсульта субтотальной, фокальная ишемии или геморрагия для точного выбора стратегии нейропротективной терапии. Второй важной проблемой является доклиническая диагностика с целью выявления группы риска для превентивного лечения.