Тканеспецифический синтез рецептора церулоплазмина и его взаимодействие с церулоплазмином

• Автор: Сасина, Людмила Константиновна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1995
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 93 с. : ил

Содержание.

Список сокращений

1. Введение.

2. Об литературы.

2.1. Общая характеристика группы микроэлементов.

2.2. Биологическая роль меди.

2.3. Механизмы, контролирующие баланс меди в клетках различных организмов.

2.3.1. Контроль баланса меди у микроорганизмов.

2.3.2. Поступление, распределение и выведение меда у млекопитающих.

2.3.2.1.Роль печени в метаболизме меди у млекопитающих.

2.3.2.2.Церулоплазмин и его роль в осуществлении печенью центральной роли в метаболизме меди.
2.4. Врожденные ошибки метаболизма меди.
2.5. Идентификация и частичная характеристика рецептора ЦП.
2.6. Внутриклеточные медьсвязывающие белки.
3. Материалы, использованные в работе.
4. Методы исследовании.
4.1. Клеточные линии и условия культивирования.
4.2. Измерение связывания, интернализации и деградации 1ЦП.
4.3. Определение площади клеточной поверхности.
4.4. Электрофоретический анализ связанного, интернализованного и
выделенного клетками ,1ЦП.
4.5. Фракционирование клеток.
4.6. Анализ препарата ЦП сыворотки крови.
4.7. Выделение рецептора ЦП.
4.8. Иммунопреципитация.
4.9. Аналитические методы.
5. Результаты и их обсуждение.
5.1. Перенос молекулы ЦП по каналам внутриклеточной и межклеточной
коммуникаций.
5.1.1. Взаимодействие ЦП с плазматической поверхностью клеток линии V1 и его регуляция по типу обратной связи.
5.1.2. Изучение внутриклеточного перемещения ЦП, связавшегося с
клеточной поверхностью.
5.1.3. Молекулярновесовой анализ ЦП, связанного, интернализованного, а затем освобождаемого фибробластами в среду культивирования.
5.1.4. Свойства ЦП, освобождаемого фибробластами.
5.1.5. Предполагаемый механизм межорганного переноса ЦП у млекопитающих.
5.2. Роль специфического рецептора во внутриклеточном транспорте ЦП в клетках нсгепатоцитарного ряда.
5.2.1. Сравнительный анализ антигенных свойств рецептора ЦП из эритроцитов и фибробластов.
5.2.2. Тканеспецифический синтез рецептора ЦП.
5.2.3. Анализ перемещения новосинтезированного рецептора ЦП в
фибробластах.
5.2.4. Внутриклеточное перемещение ингернализованного ЦП.
6. Заключение.
7. Выводы.
8. Список цитируемой литературы,
ВВЕДЕНИЕ.
Актуальность


Поэтому многоклеточные организмы, в том исле и млекопитающие, должны на молекулярногенетическом уровне решать опросы, связанные с упаковкой ионов меди в безопасные оболочки и с их ранспортировкой, как по межклеточным и внутриклеточным пространствам ргаиизма, так и через мембранные барьеры клеток и внутриклеточных ом и ар ментов. Нарушение работы любого звена в этом транспортном цикле, в ависимости от локализации поломки, приведет или к дефициту, или к гакоплению токсических количеств меди в различных частях организма, что, южет быть, и, повидимому, является, причиной разнообразных медьзависимых икроэлементозов, природа которых не ясна 1. Выяснение молекулярногенетических основ таких заболеваний, и, следовательно, их лечение, может быть успешным только при полном знании сругооборота меди в организме. Однако, сведения о молекулярном механизме тоступления, распределения и выведения меди в различных организмах и эсобенно у млекопитающих отрывочны. Почти не вызывав Зелком по каналам межклеточных коммуникаций является медьсодержащий ликопротеин сыворотки крови церулоплазмин ЦП, белок, синтезирующийся в гепатоцнтах ,,0,8. К тому же установлен факт существования специфического рецептора ЦП на поверхности некоторых клеток негепатоцитарного ряда ,,9. В то же время почти ничего не известно о молекулярном механизме взаимодействия Ц с его рецептором. Изучение этого взаимодействия поможет понять механизм поступления энов меди в клетку. Целью данной работы является изучение молекулярного механизма гаимодействия ЦП со специфическим рецептором плазматических мембран и следование особенностей экспрессии гена рецептора ЦП в организме лекоиитающих. Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи. Исследовать экспрессию гена рецептора ЦП в организме млекопитающих . Сопоставить перемещение ЦП и импульсномеченного рецептора ЦП в ибробластах и реконструировать в опытах на различных клеточных линиях ежорганный маршрут пептидной части молекулы ЦП. Научная новизна. В ходе работы установлено, что рецептор ЦП интезируется только в клетках негеиатоцитарного ряда, а количество его на легочной поверхности рег улируется по типу обратной связи уровнем ЦП в среде оста. Фибробласты ингернализуют связанный с клеточной поверхностью ЦП, и, осле трансклеточного переноса в составе мембранных везикул, освобождают его культуральную среду. Выделяемый фибробластами ЦП приобретает пособность связываться с клеточной поверхностью гепатоцитов, которые, нтернализуют его и затем секретируют. В ходе трансклеточного переноса через епатоциты ЦГ1 значительно деградируется. Динамика и внутриклеточный гаршрут ЦП и импульсномеченого рецептора ЦП полностью совпадают. ЦП, рецептором ЦП и медьтранспортной ЛТРазой 1типа, мембранным транспортером меди. Научнопрактическое значение. Полученные в диссертации данные о теточноспецифической экспрессии гена рецептора ЦП и регуляции его сспрессии по обратному типу могут быть использованы для описания новых эзологических форм медных микроэлементозов наследственного и риобрстенного происхождения. К тому же, антитела к рецептору ЦП, олученные в ходе выполненной работы, являются диагностическим тестом для становления молекулярной природы специфических нарушений экспрессии гена ецептора ЦП. Основные положения выносимые на защиту. Синтез рецептора ЦП носит тканеспецифический характер и зависит от эдержания ЦП в среде роста клеток. ЦП после связывания с рецептором клеточной поверхности фибробластов нтернализуется, модифицируется и, после трансклеточного переноса, свобождается в культуральную среду. Выделяемый фибробластами ЦП риобретает способность связываться с поверхностью гепатоцитов, нтернализуется, частично деград и руется и вновь секретируется. Межорганный маршрут молекул ЦП обеспечивает доставку меди к клеткам егепатомитарного ряда и, возможно, выведение определенной ее части из рганизма через желчь. Апробация диссертации. Результаты диссертации опубликованы в 2ух гатьях и доложены на Первом Российском съезде медицинских генетиков, осква, декабря г. Структура диссертации. Диссертация изложена на страницах, состоит з разделов Введение, Обзор литературы, Материалы, использованные в работе, Методы исследования, Результаты и их обсуждение, Заключение и Выводы, писок цитируемой литературы включает 3 работы.