Оптимизация экстракционного флуориметрического метода количественного определения катехоламинов и серотонина в головном мозге крыс и использование его в исследованиях функциональной роли этих соединений

• Автор: Калмыков, Вячеслав Львович
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 172 c. : ил

1.1. Общие представления о катехоламинах

и серотонине и их роль в ЦНС

1.1.1. Метаболизм.катехоламинов и серотонина

1.1.2. Локализация.катехоламинов.и серотонина в ЦНСдз

1.1.3. Функциональное значение катехоламинов

и серотонина в ЦНС1В

1.2. Методы анализа катехоламинов и серотонина .

1.2.1. Сравнительный анализ современных методов количественного определения катехоламинов и серотонина .

1.2.1.1. Методы выделения катехоламинов и серотонина

1.2.1.1.1. Экстракционный способ очистки БА . .

1.2.1.1.2. Обычная жидкостная хроматография . .

1.2.1.1.3. Высокоэффективная жидкостная хроматография .
1.2.1.1.4. Газовая хроматография
1.2.1.2. Методы специфического количественного определения катехоламинов и серо .
. тонина
1.2.1.2.1. Флуориметрические методы .
.1 Электрохимические методы.
1.2.1.2.3. Радиоэнзиматические методы.
1.2.1.2.4. Массспектрометрические методы
1.2.1.3. Перспективы дальнейшего развития методов определения катехоламинов и серотонина.
1.2.2. Методы выделения и очистки биогенных аминов органическими растворителями
1.2.3. Флуориметрические методы определения биогенных аминов.
РАЗДЕЛ 2. РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКОТЕРШЕНТОВ И ИХ ОБОТДЕНИЕ
2.1. Оптимизация экстракционного флуориметрического метода определения БА .
2.1.1. Реактивы, используемые нами при определении богенних аминов .
2.1.2. Выделение структур мозга и хранение выделенных проб до анализа
2.1.3. Оптишзация количественного флуоримет
. . рического определения биогенных аминов
2.1.3.1. Модификация флуориметра ЭФЗМА для
. . . определения биогенных аминов
2.1.3.1.1. Абсорбционные светофильтры для флуориметрического определения биогенных аминов.
2.1.3.1.2. Сливная кювета и термоотаткрование кюветного отсека
2.1.3.2. Автоматизация проведенй химических процедур получения флуорофоров .
2Л.3.3. Определеше катехоламинов.
2.1.3.4. Определение серотонина и 5оксииндолилуксусной кислоты
2.1.3.5. Определение гомованллиновой кислоты . .
2.1.3.6. Математическая обработка результатов . .
2.1.4. Оптимизация процедур выделения и очистки
БА органическими растворителями
2.1.4.1. Общее описание процедур выделения и очистки биогенных аминов экстракцией органическими растворителями
2.1.4.2. Построение калибровочных кривых. .
2.1.4.2.1. Основные калибровочные кривые .
2.1.4.2.2. Тканевые калибровочные кривые .
2.1.4.3. Исследование наиболее общих факторов, определяющих эффективность и корректность экстракционных процедур при выделении и очистке БА органическими растворителями .
2.1.4.4. Оптимизация экстракционных процедур при выделении и очистке БА органическими растворителями с учетом выявленных нами факторов.
2.1.4.5. Спектральная характеристика специфичности экстракционного флуориметричес
кого метода.Й
2.1.4.6. Определение ДА, НА, Т, МУК и ГВК в переднем мозге и стволе головного
мозга крыс.
2.2. Оптимизированный экстракционный флуориметрический метод в исследованиях функциональной
роли БА головного мозга крыс .
2.2.1. Влияние условий содержания крыс на
уровень БА головного мозга П
2.2.2. Изучение роли уровня БА в механизмах
действия этанола .
2.2.3. Изучение влияния на уровень БА головного мозга крыс хронического введения ингибитора моноаминоксидазы ипрониазида, а также хронического введения предшественника катехоламинов ЬДОФА в рамках комплексного исследования связи уровня БА и обучения с
пищевым подкреплением .
2.2.3.1. Исследование содержания БА в головном мозге крыс при хроническом введении ипрониазида.
2.2.3.2. Исследование содержания БА в головном
мозге крыс при хроническом введении ьДОЗД.
2.2.4. Изучение влияния оборонительного обучения на содержания БА головного мозга в выборках крыс из общей популяции линии Вистар по устойчивости к аудиогенному раздражителю . .
ЗАКЛЮЧЕНИЕ .
ПРИЛОЖЕНИЯ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Отдела проблем памяти Института биологической физики АН СССР. Полученные наш результаты при изучении роли БА ЦНС в механизмах поведения, действия фармакологических препаратов и этанола могут найти практическое применение в соответствующих областях. ГЛАВА I. Общие представления о катехоламинах и серотонине и их роли в ЦНС. Метаболизм катехоламинов и серотонина в ЦНС. Биогенные амины, к числу которых относятся доташн 3,4диоксифенил этил амин, норадреналкн 3,4диоксифенил этанолметиламин и серотонин 5окситряптамин являются производными ашнокислот фенилаланина и триптофана. Биосинтез катехоламинов в настоящее время хорошо изучен и монет быть представлен следующей последовательностью превращении тирозин диоксифенилаланин дофамин в норадреналин адреналин. И метилтрансфераза г. Серотонин образуется из триптофана через 5окситриптофан с участием триптофангидроксилазы и 5 окситриптофандекарбоксилазы. Основные пути ферментативной инактивации и для катехоламинов и для серотонина окислительное дезаминирование ферментМАО и ортометилирование ферлент КОЖ . Главным путем метаболического превращения серотонина также является окислительное дезаминирование в результате чего образуется 5оксииндолацетальдегид, который под действием альдегиддегздрогеназы превращается в 5оксииндолилуксусную кислоту. Если основным конечным метаболитом серотонина является 5оксииндолилуксусная кислота, то для дофамина таким метаболитом
является гомованилиновая кислота, которая образуется из дофамина в результате последовательного действия МАО, алвдегвдцегвдрогеназы и КОМГ. Концентрация гомованилиновой кислоты шкет служить показателем активности дофаминергической системы . Большой интерес представляет путь хиноидного окисления катехоламинов ввиду его возможной вовлеченности в механизмы возникновения патологических состояний ЩС Не исключено участие продуктов хиноидного сисления катехоламинов и в нормальной жизнедеятельности , . Локализация катехоламинов и серотонина в ЦНС. В головном мозге существуют специальные группы химически специфических нейронов, в которых происходит синтез определенных медиаторов и использование их для синаптической передачи импульсов с нейрона на нейрон. НА, ДА и Т занимают уникальное место в нейробиологии в связи с тем, что они локализуются в совершенно определенных структурах и связаны наиболее вероятно со специфическим поведением человека и животных. Все это вызывает большой интерес к изучению биогенных аминов. Локализация моноаминсодержащих нейронов и их проводящих пу
тей в мозге млекопитающих была изучена группой шведских ученых, которые разработали гистохимический флуоресцентный метод идентификации катехоламинов к Т , . Для гистохимического выявления других медиаторов подобных методов пока не существует. Клетки моноаминергических систем располагаются, за некоторым исключением, в стволе мозга, т. Аксоны этих клеток направляются в различные области головного мозга, а такке спускаются в спинной мозг. По медиаторной специфичности моноаминергические системы можно разделить на норадрекергические, дофаминергические, серотонинергические, адренергичес1ше, имеющие в головном мозге четкую морфологическую локализацию. По общепризнанной классификации Дальстрем и фукса группы катехоламинсодержащих нейронов условно обозначаются II3. Локализация моноаминергических. На приведенных ниже схемах видно, что дофаминергические терминали сосредоточены в. Много дофаминовых терминалей. Норадренаяинсодержащие терминали присутствуют в большинстве в гипоталамических ядрах, во многих висцеральных афферентных и эфферентных ядрах, в определенных частях ретикулярной формации и в вентролатеральной части центрального серого вещества среднего мозга. Большинство областей в нижнем мозговом стволе содержат мало этих терминалей рис. Гистохимическое выявление серотонинсодержащих структур в мозге сложнее, чем катехолашнсодержащх, в связи с нестабильностью в первом случае продукта гистохимической реакции. Рис. В ГОЛОВНОМ МОЗГе 1фЫС 6 5 . Рис. Схема распределения норадреналинсодержащих нейронов в головном мозге крыс 5 .