Соотношение активности цАМФ-зависимой и - независимой систем фосфорилирования белков в клетках и его значение в регуляции пролиферации

• Автор: Гроздова, Ирина Дмитриевна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 267 с. : ил.

I. Главное различие между ними заключается в том. II подвергается аутофосфорилированию, I нет. Данный тест является основным критерием отнесения регуляторной субъединицы ПКА к I или II типу. Это различие обусловливает разные механизмы активации образуемых ими ферментов п. Второе существенное различие между I и I заключается в том, что в молекуле 1 участок присоединения Ссубьединицы окружен с обеих сторон кластерами кислых аминокислот рис. I такие кислотные группировки отсутствуют i, . Таблица 1. М. м. Источник Ксубьелиницы,первичная структура которой установлена Скелетные мышцы быка i, , ii, 1 лимфоциты человека . Мозг быка . ПКЛ 5,2 . К0 комплекса 0,. МАТФ . Гомологичных участков последовательности аминокислот в этой области у I и I не обнаружено , а , . Различен и механизм их димеризации. Димер субъединиц I типа стабилизируется двумя днеульфидными связями, возникающими между цис и цнс каждого мономера . В отличие от I, димеризация II происходит без образования связей в результате белокбелкового взаимодействия двух молекул II в области их 8 аминокислотных остатков. Разный механизм димеризации I и II имеет большое биологическое значение благодаря этому не образуются гибридные формы протенпкнназы IСг и не происходит смешения функций ферментов I и II типа в клетке. Регуляторные субъединицы I и И типа резко различаются по иммунохимическнм свойствам. В многочисленных работах было однозначно установлено, что антитела, полученные к регуляторной субъединице одного типа, не реагируют с регуляторными субъединицами другого типа. Как свободные, так и находящиеся в составе фермента I и II не дают перекрестной реакции независимо от источника антигена и вида животного продуцента антител i, . Антитела к и Ссубьедишцам также не дают перекреслюй реакции и не взаимодействуют с цГМФзависимой протсинкнназой i, i, , . Строгая специфичность антител по отношению к субъеднннце определенного типа позволила их использовать для количественного определения 1 и II и их соотношения в тканевых экстрактах i, . I.ii, v, ii, Viv, . Ссубъединиц i, , а i, . Таким образом, регуляторные субъединицы ПКА I и И типа четко различаются по ряду свойств подвержен посл аутофосфорнлированию, молекулярной массе, нммунохнмичсским свойствам. Различия между а и изоформами регуляторных субъединиц одного типа гораздо менее выражены. Их первичная структура почти идентична в цАМФсвязывающих доменах . Ссубъединицы рис. Консервативность в области димеризации позволяет ассоциировать аи 3изоформам одною и того же типа с образованием гстсродимеров. Такая гибридная ПКЛ состава II2 была обнаружена в злокачественных клетках человеческих Влимфошгтов линии и, в малом количестве, в нормальных Тлнмфоцитах периферической крови человека , . Однако обычно в молекуле ПКА содержатся одинаковые изоформы регуляторной субъединицы. За исключением участка димеризацин вся остальная часть концевого домена а и 5изоформ весьма вариабельна по первичной структуре. Гомология между и II3 выражена слабо, а в области аминокислот отсутствует совсем , , рис. Вследствие этого сдвигается нумерация аминокислотных остатков. Так, например, остаток серина, который подвержен аутофосфорнлированию, в занимает ое положение, в быка 4ое, в крысы ое, а в единственной 0 кДа субьсдиницс 1 дрожжей, гомологичной , 5ос , , , . Вариабельность концевого домена контрастируете остальной частью молекулы, которая стабильна по длине у а и нзоформ 1I и содержит лишь замены эквивалентных аминокислот рис. В исследовании регуляторных субъединиц заметную роль сыграли методы иммунохимического анализа. Само существование изоформ было обнаружено с их помощью. Флейшер первым использовал антисыворотку к ПКА, выделенной из сердца быка, для анализа экстрактов разных тканей млекопитающих и обнаружил отличие ПКА мозга от протеинкнназ всех других тканей i, . Это открытие было подтверждено Эрлихманом при изучении иммунохимических свойств II, выделенной из мозга быка, и легло в основу выделения нейрональных регуляторных субъединиц ПКА в отдельную группу .