Роль окислительного стресса и глутатион-зависимых процессов в развитии клеточной лекарственной устойчивости и при терапии ряда заболеваний

Роль окислительного стресса и глутатион-зависимых процессов в развитии клеточной лекарственной устойчивости и при терапии ряда заболеваний

Автор: Калинина, Елена Валентиновна

Шифр специальности: 03.00.04

Научная степень: Докторская

Год защиты: 2009

Место защиты: Москва

Количество страниц: 230 с. ил.

Артикул: 4402368

Автор: Калинина, Елена Валентиновна

Стоимость: 250 руб.

ВВЕДЕНИЕ.
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Окислительный стресс. Условия возникновения.
1.1.1. Основные активные формы кислорода
1.1.2. Антиоксидангная защитная система. Антиокидантные ферменты.
1.1.2.1. Супероксиддисмутаза.
1.1.2.2. Каталаза
1.2. Глугатион и глутатионзависимые ферменты
1.2.1. Глутатион. Синтез v и рссинтез. Роль в организме и редоксзависимых процессах.
1.2.2. Глутатионпероксидаза
1.2.3. Глутатион трансферазы.
1.3. Редоксзависимые белки
1.3.1. Тиорсдоксин.
1.3.2. Тиоредоксипредукгаза
1.3.3. Пероксирсдоксин.
1.3.4. Глутаредоксин.
1.4. Мультилекарственная устойчивость опухолевых клеток. Основные факторы формирования.
1.4.1. Трансмсмбранныс белки.
1.4.2. Система детоксикации ксенобиотиков
1.4.3. Топоизомеразы.
1.4.4. Ключевые гены, контролирующие апоптоз и развитие
мультилекарственной устойчивости опухолевых клеток
1.5. Свободнорадикальиый механизм действия антрациклинов и их противоопухолевая активность.
1.6. Окислительный стресс в этиопатогенезе ряда заболеваний
1.6.1. Патологии сердечнососудистой системы.
1.6.1.1. Ишемия и инфаркт миокарда.
1.6.1.2. Гипертензия.
1.6.1.3. Атеросклероз
1.6.2. Хронические обструктивные болезни легких
1.6.3. АФК и онкогенез.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1 Культура клеток. Условия культивирования
2.2. Оценка цитотоксичности
2.3. Схема оценки содержания вБН и ОББв, соотношения ОБНОББС, активности антиоксидантных ферментов, глутаредоксина и тиоредоксина в эритроцитах больных ИБС, постинфарктным кардиосклерозом и сердечной недостаточностью пожилого
возраста при использовании в терапии эмоксипипа, мелатонина, элтацина
2.4. Схема оценки содержания вБН и вББв, соотношения ОБНАЗББО, активности антиоксидантных ферментов, глутаредоксина и тиоредоксина в эритроцитах больных хроническим обструктивным бронхитом пожилого возраста при использовании в терапии элтацина.
2.5. Схема получения эритроцитов и гемолизата
2.6. Схема разрушения клеток.
2.7. Оценка уровня образования супероксиданионрадикала О
2.8. Измерение хемилюменисценции.
2.9. ЭПРспектроскопия.
2 Определение активности Сипсупероксиддисмутазы
2 Определение активности Мпсупсроксиддисмутазы
2 Определение активности катал азы.
2 Определение активности глутатионпероксидазы
2 Определение активности глутатионБтрансферазы.
2 Определение активности глутатионредуктазы
прсделсние активности НАДФНхиноноксидоредуктазы
предслснис активности НАДФНцитохром 0рсдуктазы
2Определение активности глутаредоксина
2 Определение активности тиоредоксина.
2Определенис активности тиоредоксинредуктазы
2 Определение активности углутамилцистеинсинтетазы.
2Определение активности углутамилтрансферазы.
2Определение концентрации белка и гемоглобина.
2 Определение содержания общего глутатиона .
2 Определение содержания окисленного глутатиона
2 Оценка внутриклеточного уровня белков с помощью метода Вестерн блотгинга
2.2б.Оцснка экспрессии генов с помощью ОТПЦР анализа.
2 Методы статистического анализа
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
ГЛАВА 3. Развитие адаптивного антиоксидантного ответа при формировании
резистентности опухолевых клеток к доксорубицину.
3.1. Экспрессия генов антиоксидантних ферментов при формировании резистентности опухолевых клеток к доксорубицину
3.1.1. Оценка экспрессии генов ключевых антиоксидантиых
ферментов
3.1.2. Оценка экспрессии гена гемоксигеназы 1.
3.2. 1I и 1 Iзависимые ферменты в формировании резистентности опухолевых клеток к доксорубицину.
3.2.1. Изменение экспрессии генов ферментов, связанных с синтезом
v, углутамилцистеинсинтетазы и глутатионсинтетазы.
3.2.2. Роль углутачилтрансферазы в развитии резистентности опухолевых
клеток к доксорубицину.
3.2.3. Экспрессия гена глутатионредуктазы при формировании резистентности опухолевых клеток к доксорубицину.
3.2.4. Изменение содержания вБН, ОББв при формировании резистентности
опухолевых клеток к доксорубицину. Оценка соотношения индекса клеточного редоксстатуса.
3.2.5. Нзависимые ферменты, связанные с антиоксидантно защитой
3.2.5.1. Роль глутатион Этрансфераз
3.2.5.2. Роль глутатионпероксидазы
3.2.5.3. Роль глутаредоксина в развитии адаптивного антиоксидантного ответа.
3.3. Роль тиоредоксина и тиоредоксинредуктазы в развитии адаптивного антиоксидантного ответа в опухолевых клетках, резистентных к доксорубицину
3.4. Экспрессия генов семейства пероксиредоксинон при формировании резистентности К2, МСР7, 8КОУ3 клеток к доксорубицину
3.5. Изменение экспрессии генов ключевых ферментов, участвующих в одноэлсктронном и двухэлсктронном восстановлении доксорубшцгна,
в результате формирования лекарственной резистентности опухолевых клеток
3.5.1. Изменение уровня мРНК и активности НАДФНцитохром Р
редуктазы в резистентных к доксорубицину опухолевых клетках
3.5.2. Изменение уровня мРНК и активности НЛДФНхиноноксидорсдуктазы
в резистентных к доксорубицину опухолевых клетках
3.6. Влияние формирования резистентности опухолевых клеток к доксорубицину
на систему транспорта и депонирования железа
3.6.1. Изменение экспрессии генов рецептора трансферрина 1, Н и Ьцепей ферритина в опухолевых клетках, резистентных к доксорубицину.
3.6.2. Изменение уровня свободного и связанного железа в клетках эритролейкемии человека К2 в результате формирования резистентности к доксорубицину
3.6.3. Активация продукции АФК в резистентных клетках эритролейкемии человека К2ЭОХ при действии доксорубицина и ФМА.
3.7 Роль транскрипционного фактора в развитии адаптивного антиоксидантного
ответа в опухолевых клетках, резистентных к доксорубицину
3.8. Экспрессия генов белков семейства Вс Вс2, Вс1х, Вах при формировании
резистентности опухолевых клеток к доксорубицину
ГЛАВА 4. Исследование роли глутатиона и редоксзависимой регуляции в
антиоксидантной терапии больных ишемической болезнью сердца и
хроническим обструктивным бронхитом.
4.1. Сравнительное исследование влияния эмоксипина, мелатонина, элгацина
на содержание вЗН и вЗЗО, соотношение ОЗНАЗЗЗО, активности антиоксидантных ферментов, глутаредоксина и тиоредоксина у больных ИБС, постинфарктным кардиосклерозом и сердечной недостаточностью пожилого возраста
4.2. Исследование влияния элтацина на содержание ОБН и ОББО, соотношение
СЗНОББО, активности антиоксидантаых ферментов, глутаредоксина и тиоредоксина
у больных пожилого возраста с хроническим обструктивным бронхитом.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Несомнепно важное значение играет характер диеты, компоненты которой способны вызывать изменение регуляции клеточного редоксзависимого сигналинга и модулировать экспрессию генов, повышая уровень антиоксидантной защиты. Основные активные формы кислорода. Обычным путем метаболизма молекулярного кислорода является его полное восстановление до воды с акцептированием четырех электронов. Основными источниками образования У2 являются комплекс I НАДНубихинолоксидоредуктаза и комплекс III убихииолци тохром соксидорсдуктаза электронтранспортной цепи митохондрий, электронтранспортные системы мембран эндоплазматического ретикулума и ядра, включающие в себя цитохромы Р0 и , а также НАДФН и НАДНзависимыс редукгазы, НАДФНоксидаза, ксангиноксидаза, циклоокеш еназа, липоксигеназа, МОсинтаза 6, 4. Характеризуя химические свойства , можно отметить, что он является плохим окислителем и хорошим восстановителем, обладает умеренной реакционной способностью и может оказывать генотоксическое действие. Протонированная форма О2 гидропсрскисный радикал НО2 является более сильным окислителем, лучше растворяется в липидах и способен инициировать перекисное окисление. АФК, включая Н, ОН, ГЬСЬ и синглетный кислород. Так, следует отметить, что может индуцировать выход железа из ферритина и восстанавливать Рс3 до Ре2 усиливая реакции разложения гидроперекисей, катализируемых металлами переменной валентности, с образованием реакционных ОН и ЯО, которые инициируют цепные процессы свободнорадикального окисления 3, . Изменение среды существенно влияет на поведение 0. При кислых он спонтанно превращается в Н2О2. БОИ 1,6 х 9 М с1. Этот путь является главным источником образования перекиси водорода в клетках. В отличие от она легко проникает через гидрофобные мембраны и способна диффундировать на значительные расстояния 0. Н2О2 является чрезвычайно важной для клеточного сигналинга молекулой, регулирующей активность кВ, 2 и ряда других транскрипционных факторов. Поэтому степень внутриклеточного уровня перекиси водорода в ответ на изменение клеточного редокссгатуса является значимым моментом в процессах адаптации, пролиферации, дифференцировки, апоптоза и некроза 4. Перекись водорода недостаточно активна для окисления органических молекул в водном окружении. Хотя константы скоростей этих реакций невелики, они обеспечивают образование примерно радикаловсекунду 9. Эти две реакции являются основными источниками радикалов ОН в клетках. В последние годы было показано, что по аналогичному с реакцией Фентона механизму происходит образование радикалов ОЫ при взаимодействии перекиси водорода с ионами других металлов переменной валентности, таких как медь, хром, ванадий, кобальт , . При этом, как и в случае ионов железа, восстановленные формы ионов этих металлов при реакции с Н2О2 продуцируют радикал ОН с большими скоростями, чем их окисленные формы 4. Г идроксильный радикал обладает чрезвычайно высокой реакционной способностью И исключительно коротким Временем ЖИЗНИ Т2 9 сек. Химическая активность радикала ОН в основном реализуется через три типа реакций отрыв атома водорода от молекулы К 4,7 х 8 V1 для реакции с метанолом, передача электрона на другую молекулу К7 Мс1, присоединение к молекуле по двойной связи К 4,4 х 9 Мс1 для реакции с бензолом . Окислительное действие ОН проявляется как в результате прямого окисления молекул, так и посредством инициации ценных разветвленных свободнорадикальных реакций, в частности, перекисного окисления липидов II1. Индукция ПОЛ может быть опосредована высвобождением железа в каталитически активной форме Ке2 в реакции гипохлорита с оксигемоглобином . В процессах 1 ЮЛ большую роль играют ионы металлов переменной валентности, в первую очередь железа. Предложены различные механизмы их каталитического действия. В частности, было показано, что первичным агентом, инициирующим свободнорадикальные процессы в НАДФНзависимом ПОЛ в микросомах, является перферрильный комплекс 2 , . Н2 на липосомных препаратах не удалось инициировать 1 зависимое ПОЛ в отсутствие ионов железа 8. Ими установлено, что оптимальное соотношение должно быть равным .

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.204, запросов: 145