Свойства и регуляция глутаминсинтетазы Azospirillum brasilense с разными степенями аденилирования

• Автор: Смирнова, Виктория Евгеньевна
• Шифр специальности: 03.00.04, 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 141 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

Список сокращений и обозначений

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Азоспириллы характеристика рода и его экологических особенностей

1.2. Азотный метаболизм азоспирилл

1.3. Бактериальные глутаминсинтетазы катализ, структура и физикохимические свойства

1.4. Регуляция активности1 и кинетические характеристики додекамерных глутаминсинтетаз

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Объект исследования и условия его культивирования

2.2. Разрушение клеток и получение грубого экстракта

2.3. Хроматографические методы
2.4. Определение концентрации белка.
2.5. Электрофорез в полиакриламидном геле.
2.6. Определение активности глутаминсинтетазы.
2.7. Определение степени аденилирования глутаминсинтетазы.
2.8. Метод кругового дихроизма
2.9. Метод эмиссионной спектроскопии ядерного гаммарезонанса.
2 Получение пермеабилизированных клеток.
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Влияние различных источников азота и углерода в среде культивирования на степень аденилирования ГС А. ЬгаэНете Бр5.
3.2. Получение электрофоретически гомогенных препаратов глутаминсинтетазы А.ЬгаэИете.
3.3. Исследование термостабильности глутаминсинтетазы.
3.4. Специфичность фермента к катионам двухвалентных металлов.
3.5. Кинетическое поведение глутаминсинтетазы при активации катионами двухвалентных металлов
3.6. Влияние агглютинина зародышей пшеницы на активность и степень аденилирования глутаминсинтетазы
3.7. Исследование вторичной структуры глутаминсинтетазы.
3.8. Изучение металлсвязывающих центров глутаминсинтетазы
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


Работа поддержана фантами Российского фонда фундаментальных исследований проект 5, ИНТАС проект и Комиссии РАН по работе с молодежью 6й Конкурсэкспертиза проектов, проект 5. Апробация работы. Iiii i i i i i, ii, vi , , 7, Ii i I i i ii . , , III Съезде биохимического общества СанктПетербург, , Первой региональной конференции молодых ученых Стратегия взаимодействия микроорганизмов с окружающей средой Саратов, , , ii , . Публикации. По теме диссертации опубликовано работ в зарубежных и отечественных научных изданиях. ГЛАВА 1. Азоспириллы, как и некоторые другие бактерии, образуют симбиозы с высшими растениями, фиксируют молекулярный азот атмосферы и передают связанные его формы растениюхозяину. В этой связи они представляют большой интерес и изучаются в разных лабораториях мира. В отличие от хорошо известных бобоворизобиальных симбиозов, для которых характерно образование клубеньков, азотфиксирующие бактерии, живущие в тесной ассоциации с растением, но не образующие при этом клубеньков или других морфологических структур, значительно менее исследованы. Для таких растительнобактериальных образований ранее использовали термин ассоциации, в последние же годы чаще употребляют термины ассоциативные симбиозы и эндофитные симбиозы , . Ассоциативные в случае, когда бактерии колонизируют наружные части растения, эндофитные когда местом колонизации являются межклетники, проводящие ткани или корневые волоски. Полученные биохимические, микробиологические и генетические сведения об азоспириллах осмысливаются в свете понимания функционирования ассоциативных и эндофитных симбиозов. В этой связи первый раздел обзора литературы посвящен накопленным к настоящему времени сведениям о ростстимулирующих свойствах азоспирилл в первую очередь . Хорошо известно, что азоспириллы представители группы альфапротеобактерий, i , колонизируют как наружную, так и внутренние части корневой системы i , v . . i, i . i , i, , , , . Два вида . . i из семи описанных к настоящему времени ранее были известны как ii i их выделил и описал Бейеринк в году ii, . В году вышла работа, посвященная уточнению классификации ii i . Согласно этой работе, классификация известных штаммов вида . . i, другая к . Впоследствии были описаны еще три вида рода ii . , . i . . i . V, ii пополняется новыми видами как за счет уточнения классификации уже известных бактерий, так и за счет описания и классификации выделенных из природной среды изолятов. Так, бактерия, выделенная из пресной воды и первоначально идентифицированная как iii . ii ii i . , . Недавно описан еще один новый вид ii i . По современным представлениям, азоспириллы распространены в почвах в ассоциации с корневой системой растений повсеместно, включая районы Арктики . . К году i, уже насчитывалось вида растений, корни которых колонизируются азоспириллами, причем только треть из них культивируемые человеком растения пшеница, хлопок, томаты, перец, горчица остальные дикорастущие травы. Список растений, образующих симбиозы с азоспириллами, все время пополняется. Так, например, И. Башан с коллегами i, установили, что азоспириллы образуют симбиозы с мангровыми деревьями. Позитивное влияние азоспирилл проявляется только при оптимальном уровне инокуляции.