Моноклональные антитела к нейроспецифическим белкам (НСБ). Получение, иммунохимический анализ, исследование гематоэнцефалического барьера

• Автор: Гурина, Ольга Ивановна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 269 с. : 50 ил.

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА В ИММУНОХИМИЧЕСКОМ АНАЛИЗЕ НЕЙРОСПЕЦИФИЧЕСКИХ БЕЛКОВ

I. Ненроспецнфические белки

Глиофибриллярный кислый протеин СЕАР.

Нейроспецифическая енолаза ИБЕ, или антиген .

Основной белок миелина МВР.

II. Моноклональные антитела к нейроспсцифическим белкам и их клиниколабораторное применение.

Современные представления о моноклональных антителах и способах их получения.

Моноклональные антиСЕАРАТ и их клиниколабораторное применение Моноклональные антиЕАТ и их клиниколабораторное применение Моноклональные антиМВРАТ и их клиниколабораторное применение ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Характеристика исследуемого материала

2.2. Общие методы, применяемые при очистке нейроспецифических антигенов
2.3. Получение антисывороток к нейроспецифическим белкам, их анализ и стандартизация
2.4. Получение моноклональных антител к нейроспецифическим белкам и их характеристика
2.5. Методы иммуиохимичсскиго анализа
2.6. Методы количественного определения белка
2.7. Приготовление ПЭГилированных липосом, конъюгированных с антиНСБантителами
2.8. Статистическая обработка полученных результатов
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
ГЛАВА 3. Разработка способов получения нсйросисцифичсских белков ,
и МВР высокой степени чистоты.
ГЛАВА 4. Получение моноклональных антител к нсйроспсцифичсским белкам
анти, анти и антиМВРантитсл.
ГЛАВА 5. Разработка тестсистем иммуноферментного определения нейроспецифичсских антигенов и антител к ним в биологических жидкостях на основе моно 0 клональных антител.
ГЛАВА 6. Комплексный иммуноферментный анализ нсйроспсцифичсских белков , , МВР и антител к ним в биологических жидкостях больных, с забо 1 леваниями, сопровождающимися нарушением проницаемости ГЭБ.
ГЛАВА 7. Исследование резистентности ГЭБ для антитсл в экспери
ГЛАВА 8. Исследование перспектив направленного транспорта ПЭГилированных иммунолипосом на основе моноклональных антиОБАРантител к клеткам 6 мишеням нервной ткани.
ГЛАВА 9. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Астроциты таких мышей характеризовались сниженной цитоархитектурной стабильностью, причиной которой может быть потеря обильно и нерегулярно расположенных хсмидесмосом. Тупые отростки астроцитов содержали промежуточные филаменты, состоящие в основном из виментина, однако в меньшей степени,, чем у беспородных животных. В противоположность, астроциты беспородных беспорядочно скрещивающихся животных содержали в более высокой концентрации, а нес гин присутствовал на более низком уровне. Эти исследования позволили предположить о том, что может играть важную роль в контролировании патологических процессов, ассоциированных с формированием четко определенных границ ЕАЕ поражения и что этот белок может принимать участи в оперативной рефляции компонентов промежуточных филаментов при реактивном фибриллярном астроглиозс. Антисенсные олигонуклеотиды к были широко использованы для изучения нейронглиальных взаимодействий. Так, ii . Клетки, экспрессирующие антисенсные олигонуклеотиды не могли более простирать стабильные отростки в присутствии гранулоклеточных нейронов. Последующие исследования группы i . Несколько позднее i Т. С тех пор, как было доказано существование феномена аккумуляции в астроцитах как наиболее специфической характеристики астроглиоза, несколько научных i в США и Европе сфокусировали свое внимание на механизмах ингибирования синтеза в том числе и с помощью антисенспых олигонуклеотидов, стремясь создагь молекулярнобиологическую систему, способную задерживать формирование рубца, к которому нередко приводит поражение нервной ткани. Задержка формирования физического барьера может дать возможность нейронам и олигодендроцитам восстановить функционирующее окружение. В згой связи крайне интересно проанализировать серию работ группы . В году им удалось доставить препарат катиоиизированных липосом ii с включенными антисснсными внутрь церебральных астроцитов и показать осуществимость ингибирование синтеза . В серии работ этой группы . Весьма многообещающими выглядят исследование этой же группы, в которых липосомальный препарат антисенсных олигонуклеотидов, был введен в спинной мозг взрослых крыс спустя 3 и 7 дней после экспериментальной травмы спинного мозга в области Т8. У 8 из экспериментальных животных был продемонстрирован достоверный эффект снижения уровня . В добавлении, при иммуноцитохимичсском анализе было выявлено снижение уровня и редукция гипертрофии в астроцитах зоны повреждения только у животных, получавших антисенсную терапию. Несомненно, эти результаты дают ос
иование полагать, что ингибирование синтеза препаратами специфических антисенсных олигонуклеотидов может быть рекомендовано для создания систем контроля процессов глиоза, сопровождающего течение травм спинного мозга. Несколько позднее ii . Повышение экспрессии поврежденными астроцитами, детектируемое иммуноцитохимичсскими методами, было нивелировано введением в систему ретровирусов, экспрессирующих антисенсную . Эти наблюдения показывают, что повышение уровня в месте повреждения может быть ингибировано с помощью введенных в систему специфических ретровирусных конструкций. При этом продемонстрированы, возможности ретровирусопосредованного генного переноса, способного модулировать образование рубца в нервной ткани. Нейроспецифическая енолаза , или антиген . Идентификация, очистка, физикохимические свойства и молекулярнобиологическая характеристика . В г. В. . Один из них впоследствии, на основании параметров элгации в процессе колоночной хроматографии, был обозначен белок . По своим физикохимическим свойствам антиген представляет собой одноцепочечный протеин с молекулярной массой 4. Аминокислотный анализ антигена из мозга быка
выявил присутствие большого количества моноаминодикарбоновых кислот аспарагиновой и глутаминовой, а также глицина, аланина и лейцина, что подтверждает данные о кислой изоэлектрической точке и высоких анионообменных свойствах этого белка 2. Исследования клеточной локализации белка в мозге млекопитающих и человека свидетельствуют о преимущественном синтезе его в нейронах.