Метаболизм ядерных белков и ДНК печени, тимуса и костного мозга у крыс и мышей при изменении пролиферативной активности

• Автор: Савина, Марина Ивановна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 1983
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 303 c. : ил

СОДЕРЖАНИЕ
введение

Глава I. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ. .

1.1. Экспериментальные животные, модели и общая схема постановки экспериментов.

1.2. Препаративные методы

1.3. Аналитические методы

Глава П. МЕТАБОЛИЗМ ЯДЕНЖ БЕЛКОВ И ДНК В РЕГЕНЕРИШОЩЕЙ

ПЕЧЕНИ МЫШЕЙ

2.1. Ядерные белки в составе хроматина.

2.2. Ядерные белки и ДНК при пролиферации

2.3. Ацетилирозание гистоновг

2.4. Ядврные белки и ДНК в регенерирующей печени мышей
2.4.1. Синтез ДНК и митотическая активность в регенерирующей печени мышей
2.4.2. Метаболизм ядерных белков в регенерирующей печени мышей.
2.4.3. Метаболизм ядерных белков в ядрах разного типа регенерирующей печени мышей.
2.4.4. Ацетилирование гистонов в регенерирующей печени мышей.
Глава Ш. МЕТАБОЛИЗМ ЯДЕДНЫХ БЕЛКОВ И ДНК В ТЕЧЕНИЕ СУТОК У
ИНТАКТНЫХ ЖИВОТНЫХ
3.1. Суточная периодизация процессов в живых системах
Стр.
3.2. Метаболизм ядерных белков к ДНК в печени интактных крыс в течение суток
3.3. Метаболизм ядерных белков и ДНК в клетках интактного тимуса в течение суток.
3.4. Метаболизм ядерных белков и ДНК в клетках костного мозга крыс в течение суток.
Глава 1У. ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ МЕТАБОЛИЗМА ЯДЕРНЫХ БЕЛКОВ И
ДНК К ВВЕДЕНИЮ ГИДРОКОРТИЗОНА И АДРЕНАЛИНА В
РАЗНОЕ ВРЕМЯ СУТОК.
4.1. Влияние гидрокортизона и адреналина на активность хроматина
4.2. Метаболизм ядерных белков и ДНК в печени крыс при введении гидрокортизона и адреналина в разное время суток.
4.3. Метаболизм ядерных белков и ДНК в тимусе крыс при введении гидрокортизона и адреналина в разное время суток.
4.4. Метаболизм ядерных белков и ДНК в клетках костного мозга крыс при введении гидрокортизона и адреналина в разное время суток.5 Глава У. МЕТАБОЛИЗМ ЯДЕНЖ БЕЛКОВ И ДНК ПРИ РАЗВИТИИ
ОПУХОЛИ В ОРГАНИЗМЕ.
5.1. Ядерные белки в клетках опухолей
5.2. Системное влияние опухоли на организм.
5.3. Метаболизм белков ДНП и ДНК в клетках гепатомы .
5.4. Метаболизм белков ДЕЛ и ДЕК в клетках пе
.Стр.
чени мышей с гепатомой .
5.5. Метаболизм белков ДНП и ДНК в клетках тимуса мышей при развитии гепатомы
5.6. Метаболизм белков ДНП и ДНК в клетках кроветворного костного мозга мышей при развитии гепатомы
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУ


К осадку для полноты извлече ния прибавляли этанол, также подкисленный I, в отношении 12, тщательно перемешивали и центриугировали мин. Супернатанты объединяли. Полученный раствор содержал суммарную фракцию Н2АНЗН4. В части экспериментов ее не разделяли изза малого количества материала и очень незначительного выхода фракции Н2АНЗ. Для определения аминокислотного состава выделяемых белков суммарную фракцию Н2АНЗН4 разделяли на фракции НЗ и Н2АН4. Для этого к полученное объему содержащее суммарную фракцию Н2АНЗ Н4, приливали ацетон в отношении 15 и добавляли 0,5 мл I При этом фракция НЗ выпадала в осадок , и ее отделяли центрифугированием в течение мин. Рис. ТХ7 до конц. Для очистки фракции НЗ полученный осадок промывали ацетоном и высушивали. Затем осадок растворяли в мл смеси, приготовленной по прописи мл воды , 0 мл этанола с 0, А НС и проводили диализ против этанола в течение суток. Осадок промы вали в этаноле и отделяли центрифугированием мин. Осадок триады промывали ацетоном и высушивали. Для экстрагирования фракций Н2АН4 к надосадочной жидкости, оставшейся после осаждения фракции НЗ, добавляли ацетон в отношении 13, гистояы Н2АН4 при этом выпадали в осадок и их отделяли центрифугированием в течение мин. Осадок дважды промывали ацетоном иагсушивали. Для выделения фракции Н2Б к осадку, полученному после выделе ния суммарной фракции Н2АНЗН4, приливали 0, М НС в отношении 12, тщательно перемешивали и центрифугировали мин. С. Надосадочная жидкость оо держала фракцию Н2Б. Эту операцию повторяли дважды для полноты извлечения фракции супернатанты объедини ли и определяли количество белка этой и других фракций гистонов. Для определения аминокислотного состава перед гидролизом фракцию Н2Б очищали. Для этого весь объем, содержащий фракцию Н2Б, пропускали через стеклянный фильтр 4 и приливали раствор ацетона в отношении 15. Фракция Н2Б выпадала в ооадок, и ее отделяли центрифугированием в течение мин. Полученный осадок дважды промывали ацетоном иагсушивали. Рис. Профиль элюции фракции общего гистона интактной печени мыши. По оси абсцисс количество элюирующего раствора в мл , по оси ординатоптическая плотность при длине волны 4 ммк. Вещест ва, внесенные на колонку, выходят в зависимости от их голекулярного веса, причем, более высокомолекулярная фракция первой выходит из колонки. Гельхроматографию общего гистона проводили на колонке разме ром 0 х 3,5 см, наполненной гелем сефадекса Г Л при помощи элюции 0,М НС при комнатной температуре Счи Реч е а Однако, их можно достаточно надежно определять количественно и качественно и при работе на минимуме поглощения Детерман . Суммарный гистон при хроштографии на сефадексе Г дает два отчетливых пика и один слабо выраженный. Профиль элюции суммарного гистона интактной печени мыши представлен на рис. В дальнейшем было проведено изучение аминокислотного состава этих пиков, которое показало, что они, в основном, соответству ют трем фракциям гистонов Щ, Н2Б и Н2АНЗН4 по Джонсу ЗоИл . При фракционирования суммарного гистона выходящие из колонки фракции собирали на коллекторе по 3 мл и спектрофотометрировали на спектрофотометре 4Хитачи и в диапазоне волн 0 0 ммк а также определяли количество белка в каждой фракции. При спектро фотометрировании все гистоны имели характерный максимум поглощения цри 5 8 ммк, однако, каждый из трех пиков, зарегистрированный на увикорде, не был гомогенным, а состоял из ряда подфракций. Наиболее гетерогенной была фракция, первой выходящая из колонки и соответствующая лизинбогатым гистонам, что совпадает с литературными данными о гетерогенности гистонов вообще и лизинбогатых гистонов, в частности Нйусоп , ВивЬиг Эта гетерогенность связана как с гетерогенностью самой фракции, так и с загрязнениями ее за счет других, фракций при выделении и фракционировании. Анализ аминокислотного состава подфракций пиков показал, что фракция Ш содержит около примесей других фракций, фракция Н2Б около , а суммарная фракция Н2АНЗН4 около , что совпадает с данными Мюльберг с соавт.