Минорный белок сыворотки крови - связанный с беременностью альфа-глипопротеин: теоретические и практические аспекты

• Автор: Никулина, Дина Максимовна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 225 с. : 28 ил.

ВВЕДЕНИЕ.

Постгеномный этап изучения белков обзор литературы.

Современные стратегические направления изучения белков в

биологии и медицине

Новые технологии определения белков клеток и биологических жидкостей.

Значение и перспективы использования иммунохимических

методов в исследовании белков

Общая характеристика и классификация минорных белков сыворотки крови человека, ассоциированных с беременностью

Связанный с беременностью альфа2гликопротеин

. Материалы и методы исследования

Характеристика и объем материалов исследований.

Методы исследований.
Биохимические методы исследований
Иммунохимические методы исследований.
Иммунологический метод.
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ Биохимическое изучение связанного с беременностью
альфа2гликопротеина СБАГ
Физикохимические свойства СБАГ
Характеристические окраски.
Отношение к денатурирующим агентам.
Электрофоретическая подвижность в геле.
Коэффициент диффузии в геле
Определение молекулярной массы СБАГ
Изучение межмолекулярпых взаимодействий СБАГ с другими белками сыворотки крови
Анализ аминокислотной последовательности СБАГ и МГ Подходы к рациональным способам выделения и очистки
Фракционирование осаждающими агентами
Гидрофобная хроматография
Ионообменная хроматография.
Г ельпроникаюцая хроматография
Аффинная хроматография.
Иммунохимическое изучение связанного с беременностью
альфа2гликопротсина
5.1. Иммунохимическая характеристика СБАГ.
5.2. Разработка иммунохимических способов идентификации
5.2.1. Моделирование иммунодиффузионной тестсистемы па
5.2.2. Разработка метода иммуноферментного анализа СБАГ
ГЛАВА 6 Распределение СБАГ в биологических жидкостях и тканях.
6.1. Иммупохимическое выявление СБАГ в биологических жидкостях человека. 1
6.2. Выявление СБАГ в крови здоровых лиц в различные возрастные периоды и в зависимости от пола
6.3. Иммуногистохимическое изучение клеточной локализации
СБАГ в нормальных и патологически измененных тканях человека тканях человека.
6.4. Идентификация аналогов СБАГ и других ассоциированных
с беременностью белков у обезьян Старого Света
ГЛАВА 7 Изучение биологической роли СБАГ.
7.1. Определение иммуномодулирующей активности СБАГ
7.2. Возможная связь СБАГ с факторами апоптоза и интерлейкинами
7.3. Зависимость продукции СБАГ от уровня гормонов ..
ГЛАВА 8 Клиническое изучение иммунохимического теста на СБАГ.
8.1. Определение содержания СБАГ в крови женщин при
физиологически протекающей и осложненной беременности
8.2. Изменение уровня СБАГ при воспалительных заболеваниях
8.3. Изменение уровня СБАГ при заболеваниях сердца
8.4. Изменение уровня СБАГ в крови при опухолях.
8.5. Изменение уровня СБАГ при хирургических заболеваниях.
ГЛАВА 9 Обсуждение полученных результатов
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Возможности двумерного электрофореза позволяют одновременно выявлять до 0 различных белков. Несмотря па то, что основные успехи протсомики связаны с двумерным электрофорезом, в настоящее время продолжают быстро развиваться многие другие методы разделения белков на первом этапе протеомного анализа, такие, как капиллярный электрофорез, капиллярная хроматография, двумерная и многомерная хроматографии 6, 2, 9. С помощью таких методов можно создать протеомную каргу любого биологического материала, представляющую собой фенотипическое проявление генома клетки, ткани или даже целого органа 1, 9. В зависимости от сути решаемых задач протеомику подразделяют на структурную или экспрессионную протеомику и функциональную или клеточпокартируемую протеомику, выясняющую взаимодействие белков в метаболических путях 0. К настоящему времени с помощью протсомики охарактеризовано несколько сотен различных типов посттрансляционной модификации 9, 5. Комбинация двумерного электрофореза и массспектрометрии привела к совершенно непредсказуемому результату. Одним из основных ограничений метода двумерного электрофореза являлась его плохая воспроизводимость, особенно в первом направлении, в котором белки разделялись по их изоэлектрической точке. Однако создание иммобилизованных 1радиентов сокращенное название нового типа электрофореза I позволило преодолеть эту нестабильность и сделать результаты анализа вполне воспроизводимыми, не только в одной, но и в различных лабораториях 9. Теоретически возможно разделение полипептидных цепей, различающихся по одному заряду, а по молекулярной массе вполне возможно идентифицировать полипептидиые цепи, отличающиеся одним аминокислотным остатком. Современные методы массспектрометрии позволяют анализировать не только выделенные белки, но даже их смеси. В массспектрометрическом анализе следует выделить несколько подходов. Наиболее широко используемый в структурной протеомике комбинация методов I ix i Iii с ii. Последовательность анализа белки из неокрашенного гсля электроблоттингом переносят на мембрану с иммобилизованным трипсином, где они, соответственно, расщепляются до пептидов. I массспектрометре, таг за шагом, с определенным интервалом между пятнами для установления молекулярных масс этих пептидов. По сути, содержимое пятна второй мембраны является в геле отпечатком белка в пептидной форме. В результате после массспектрометрического анализа доступны два типа данных. Простейшие масс спектрометры, такие, как I анализаторы измеряют массу полученных пептидов. Тандемные массспектрометры позволяют также прочитать последовательность этих пептидов 1. На второй стадии анализа ионизированные пептиды, выбранные по массе в первом массспектрометре, разрушаются дальше при столкновении с молекулами газа и фрагментированные остатки пептидов анализируются во втором спектрометре. Безусловно, последовательность плюс масса болсс информативны, чем анализ одной массы, но для многих случаев уже достаточно бывает определения массы пептида, так как существующие методы биоинформатики на основании имеющихся баз данных и мощных алгоритмов их анализа позволяют установить принадлежность того или иного пептида соответствующему белку и идентифицировать этот белок 1. Такой подход особенно эффективен для тех объектов, где геномная карта уже известна. Существующие базы данных позволяют проводить этот анализ достаточно быстро и эффективно. При этом следует учитывать, что для идентификации пептидов используются специальные базы данных, содержащие не целые белки, а полученные из них компьютерным путем i ii пептидные фрагменты. Это, прежде всего, I2 , , и другие. Если учесть, что для представления результатов электрофореза имеется собственное программное обеспечение и базы данных, такие как , , то становится очевидным, что методы биоипформатики в данном случае играют столь же важную роль, что и сам массспектрометрический анализ 3.