Липоксигеназа пшеницы Triticum Aestivum L. в норме и при воздействии ионизирующей радиации

• Автор: Оганесян, Нунэ Альбертовна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 138 c. : ил

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ .

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. К истории открытия фермента . II

1.2. Механизм действия и структура липоксигеназы

1.2.1. Субстраты липоксигеназной реакции .

1.2.2. Продукты липоксигеназной реакции . .

1.2.3. Свойства и структура фермента

1.2.4. Механизм действия

1.2.5. Сопряженные реакции,катализируемые липоксигеназой

1.3. Гетерогенность липоксигеназных систем .
1.4. Физиологическая роль липоксигеназы в норме и при патологических состояниях .
1.5. Процессы перекисного окисления липидов в норме и
при радиационном воздействии
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Объект исследования и методы очистки фермента .
2.2. Определение белка
2.3. Определение активности липоксигеназы .
2.4. Аналитический дискэлектрофорез в ПААГ .
2.5. Метод изоэлектрического фокусирования .
2.6. Аминокислотный анализ .
2.7. Методы кругового дихроизма и УФспектроскопии .
2.8. Рентгеновское облучение
2.9. Используемые реактивы
ГЛАВА 3. ЛИПОКСИГЕНАЗНЫЕ СИСТЕМЫ ПШЕНИЦЫ ВИДА II IV
ЗЛ. Получение препаратов липоксигеназы из семян и
проростков пшеницы
3.2. Множественные молекулярные формы липоксигеназы пшеницы
3.3. Изучение некоторых кинетических свойств липоксигеназы пшеницы
3.3.1. Зависимость активности липоксигеназы от
3.3.2. Зависимость активности липоксигеназы от
концентрации фермента .
3.3.3. Субстратная специфичность липоксигеназы пшеницы .
3.3.4. Зависимость активности липоксигеназы от времени
реакции и от концентрации гидроперекисей в реакционной среде.
3.3.5. Зависимость активности липоксигеназы от температуры
3.3.6. Определение молекулярной массы липоксигеназы пшеницы.
ГЛАВА 4. ДЕЙСТВИЕ РЕНТГЕНОВСКОГО ИЗЛУЧЕНИЯ НА ЛИПОКСИГЕНАЗНЫЕ
СИСТЕМЫ ПШЕНИЦЫ ВИДА II IV .
4.1. Изменение активности липоксигеназы после облучения
i viv и i vi
4.1 Л. Облучение i viv.
4.1.2. Облучение i vi
4.2. Влияние рентгеновского излучения на состав молекулярных форм липоксигеназы пшеницы .
4.3.Изучение аминокислотного состава липоксигеназы .
4.4. Изучение вторичной структуры липоксигеназы
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ
ЛИТЕРАТУРА


Покровская, Кретовин , Попов, vi i Настоящая работа является продолжением исследований по изучению липоксигеназных систем перекисного окисления растений, проводимых в лаборатории эволюционной и радиационной биохимии Института биохимии им. А. Б. Баха АН СССР. Целью настоящей работы является исследование липоксигеназных систем разных сортов пшеницы вида i. . в норме и после рентгеновского облучения i viv И i vi. ЛОГ из семян и проростков пшеницы вида . ЛОГ разных сортов пшеницы, включая сорта, отличающиеся по устойчивости к возбудителю стеблевой. ЛОГ пшеницы в норме и после лучевого поражения. Научная новизна и практическая ценность работы. Впервые проведено исследование активности и кинетических свойств ЛОГ пшеницы в зависимости от состава молекулярных форм этого фермента. На примере ЛОГ из разных сортов пшеницы вида тг. ПНЖК с образованием конъюгированных гидроперекисей и не активен в реакции сопряженного окисления каротиноидов. Обнаруженная особенность обусловлена отсутствием в составе ЛОГ пшеницы молекулярных форм, катализирующих этот . ЛОГ бобовых растений. Исследована структурная организация ЛОГ пшеницы впервые определены аминокислотный состав, вторичная структура и молекулярная масса фермента. Применение метода радиационной инактивации фермента показало, высокую радиоустойчивость ЛОГ пшеницы Д Гр по сравнению с ЛОГ бобовых ДдгбООПОО Гр, что обусловлено особенностями структуры фермента пшеницы. Снижение общей активности ЛОГ пшеницы при облучении в деталью ных дозах связано с радиационным нарушением структуры радиочувствительных молекулярных форм и с их инактивацией. Полученные в диссертационной работе экспериментальные данные об особенностях ЛОГ пшеницы имеют большое значение для развития теоретических представлений о структуре и механизме действия этого фермента в растениях. Результаты радиобиологических исследований позволяют подойти к объяснению механизмов устойчивости ферментов к действию радиации и роли ЛОГ при развитии патологии. Данные настоящей работы могут быть использованы при оценке хлебопекарных качеств муки из пшеницы разных сортов с учетом активности и состава множественных молекулярных форм ЛОГ. Апробация работы. Ереван, I Всесоюзной научной конференции молодых ученых по сельскохозяйственной радиологии Обнинск, Симпозиуме по модификации лучевого поражения растений Чернигов, I Всесоюзной конференции по применению хроматографии в биологии и медицине Москва, ХУ1 Международном конгрессе по липидам ВНР, Будапешт, Совместном коллоквиуме лаборатории энзимологии и лаборатории эволюционной и радиационной биохимии Института биохимии им. А.Н. Баха АН СССР и кафедры биохимии и зерноведения Московского технологического института пищевой промышленности Москва,. ГЛАВА I. Липоксигеназа ЛОГ была впервые обнаружена в семенах соевых бобов Теореллем i i. В настоящее время показано широкое распространение этого фермента в тканях большинства высших растений Долесников, Будницкая, Пшенова и др. , , Покровская, i i. Vi, i, , i, . , , , i, Борисова и др. Установлено, что наиболее высокой активностью ЛОГ обладают семена бобовых . iii, , i, v, Vi . . Кирсанова, Ауэрман И др. , , ПЛОДЫ баклажан i . i . Изучение субклеточного распределения фермента показало, что ЛОГ и многие молекулярные формы, входящие в ее состав, связаны с мембранами. Мембранносвязанные формы ЛОГ высокоактивны и ассоцированы с микросомальной фракцией митохондрий и пластид, а также с мембранами эндоплазматического ретикулума и аппарата Гольджи Сисакян, Кобякова, . Борисова, Будницкая, , . i,iv, i, , . Несмотря на данные ряда авторов о присутствии ЛОГ в животных тканях , , i . , , , до х годов ЛОГ считалась сугубо растительным ферментом.