Кислые нуклеазы и их роль в приспособительных реакциях водных организмов

• Автор: Амелина, Виолетта Сергеевна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Петрозаводск
• Количество страниц: 175 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Ферменты деполимеризации нуклеиновых кислот, классификация.

1. 1. 1. Локализация нуклеаз в клетке

1.1.2. Структура ферментов.

1.1.3. Механизм действия и специфичность нуклеаз.

1.2. Особенности нуклеаз водных организмов

1.3. Биологическая роль кислых нуклеаз

1.4. Участие ферментов лизосом в адаптивных реакциях гидробионтов

к некоторым факторам среды.

Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.
2.1. Характеристика материала.
2. 1. 1. Объекты исследования
2.1.2. Определение возраста, пола и стадии зрелости гонад
2. 1.3. Отбор и хранение биологических проб
2.2. Методы исследований
2.2. 1. Приготовление гомогенатов тканей.
2.2.2. Определение активности кислых нуклеаз.
2.2. 3. Количественное определение содержания белка в тканях
2.2.4. Выявление множественных форм кислой дезоксирибонуклеазы методом электрофореза в полиакриламидном геле
2.2.5. Статистическая обработка данных.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Глава 3. Распределение нуклеазной активности лизосом в органах и
тканях различных видов рыб.
Глава 4. Влияние различных типов антропогенного загрязнения на
активность кислых нуклеаз водных организмов
4. 1. Влияние накопления ртути в тканях рыб в сочетании с закислением и гумификацией водоема на активность кислых нуклеаз
окуня viii
4.2. Изменение активности лизосомальных нуклеаз пресноводных рыб при загрязнении водоема отходами предприятий горнообогатительной
и металлургической промышленности Кольского полуострова.
4.3. Влияние антропогенного загрязнения морских побережий на
активность кислых нуклеаз беспозвоночных гидробионтов.
4.4. Изменение нуклеазной активности лизосом двустворчатых моллюсков МуШш ес1иШ Ь. под действием нефтепродуктов и буровых
растворов в аквариальных экспериментах
Глава 5. Влияние естественных абиотических и биотических факторов
на нуклеазную активность лизосом морских гидробионтов
5. 1. Изменение активности кислых нуклеаз беломорских мидий
МуШш ес1иИз Ь. в условиях экспериментальной аноксии.
5. 2. Лизосомальные нуклеазы в приспособительных реакциях морских
моллюсков к различной солености воды
5. 3. Влияние биотических взаимодействий на биохимические
показатели мидий МуШиэ ебиНэ Ь
Глава 6. Альтерации спектра множественных молекулярных форм кислой дезоксирибонуклеазы под действием различных факторов
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
выводы.
ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ СОКРАЩЕНИЯ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


При исследовании нуклеодеполимераз человека все ферменты условно подразделяют на две большие группы секреторные, иначе панкреатические , i , и несекреторные , i нуклеазы i, , i, ii, . Причем, под нуклеазами панкреатического типа подразумевается весьма широкий спектр ферментов, обладающий способностью деполимеризовать нуклеиновые кислоты, продуцируемые не только поджелудочной железой, но и другими тканями, и обнаруживающиеся в жидких средах. Чаще всего нуклеазную активность определяют, в плазме крови, секретах слюнных желез и в моче. Однако, необходимо заметить, что такое деление весьма условно, так как некоторые ферменты могут иметь как тканевую, так и секреторную форму с одинаковой ферментативной активностью, но различающиеся по структуре Барановский и др. i, ii, . Работы по исследованию внутриклеточной локализации нуклеаз ведутся с момента их открытия с х годов прошлого столетия и материал по данному вопросу накоплен значительный. Первой ДНКдеполимеразой, внутриклеточная локализация которой была установлена, является секреторная панкреатическая ДНКаза. Для выяснения ее локализации использовались антитела, меченые флуоресцеином. В митохондриях и в ядрах этот фермент обнаружен не был , . Напротив, тканевая ДНКаза I поджелудочной железы, печени, клеток асцитной опухоли Ландщютца карциномы Герена была обнаружена во фракции митохондрий. В ядерной фракции удельная активность этого фермента значительно ниже. При разделении клеток с помощью органических растворителей на цитоплазматическую и ядерную фракции, активность ДНКазы была обнаружена в основном в цитоплазматической фракции , . Неспецифические к рибозе нуклеазы, выделенные из печени крыс и тканей i , также были связаны с митохондриальной фракцией клеток . , ii, . В митохондриях обнаруживаются наиболее щелочные рибонуклеазы, имеющие оптимум выше 9 , i, I . Активность нейтральной ДНКазы была обнаружена также в ядрах регенерирующей печени и других клеток млекопитающих i . i . Ферменты с оптимумом i I в кислой среде локализованы, преимущественно, в лизосомах. Исключительно лизосомальная природа кислых ДНКдеполимераз была доказана еще в х годах i, i, . Кислая ДНК, или ДНКаза II, и кислая РНКаза обнаруживаются в лизосомах самых различных тканей печени, лимфоидной ткани, почек, костей, мозговой ткани надпочечника, эпителия хрусталика глаза, эпителия тонкого кишечника, сердечной мышцы, эпидермиса кожи и др. Куриненко, Юсупова, Покровский, Тутсльян, Покровский, Крыстев, Барановский и др. ii . . v, i, . Имеются также данные о локализации ДНКазы II в ядре. ,2. Эта особенность белковой молекулы фермента не исключает возможности ее адсорбции материалом ядерной фракции при нарушении целостности структуры лизосом, вовсе не означая, что фермент функционирует в составе ядра. В связи с этим, уместно напомнить об аналогичных результатах изучения локализации латентной рибонуклеази . Этот фермент первоначально был обнаружен в рибосомах в латентном состоянии и лишь последующими исследователями была установлена его локализация в подоболочечном пространстве бактериальной клетки и показано, что при разрушении клетки фермент связывается с рибосомами Куриненко, Юсупова, , , . В частности, в растительных клетках велика активность этих ферментов в хлоронлаегах . i . . Одними из первых исследований, касающимся внутриклеточного распределения экзонуклеаз были работы Линдала, описавшем две экзонуютеазы, отличавшихся предпочтением к нативной и денатурированной ДНК i . Одна из них ДНКаза III, гидролизующая преимущественно одноцепочечную ДНК, локализована в ядре, другая ДНКаза IV, предпочитающая нативную ДНК в ядре и цитоплазме. У организмов, стоящих на более низкой ступени развития моллюсков, плесневых грибов и простейших наблюдается примерно сходное распределение нуклеаз.