Катионные ингибиторы сериновых протеиназ из семян гречихи (Fagopyrum esculentum Moench. )

• Автор: Цыбина, Татьяна Александровна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 117 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Классификация ингибиторов протеиназ растительного происхождения введение.

1.1.1. Семейство соевого ингибитора трипсина Кунитца БТ1.

1.1.2. Семейство ингибитора БауманаБирк

1.1.3. Семейство ингибиторов I из картофеля.

1.1.4. Семейство ингибиторов II из картофеля

1.1.5. Семейство тыквенных ингибиторов

1.1.6. Семейство серпинов.

1.1.7. Семейство фитоцистатинов.
1.1.8. Семейство напинов
1.1.9. Ингибиторы аспартильных протеиназ
1.1 Семейство ингибиторов субтилизинааамилазы у злаков
1.2. Другие ингибиторы протеиназ
1.3. Антимикробные пептиды и запасные белки, гомологичные ингибиторам протеиназ.
1.4. Физиологическое значение ингибиторов и возможности их применения .
2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
2.1. Материалы и реактивы.
2.2. Методы исследования
2.2.1. Определение активности ингибиторов.
2.2.2. Гидролиз ингибиторов пепсином
2.2.3. Определение концентрации белка.
2.2.4. Нативный электрофорез в полиакриламидном геле
2.2.5. Определение ИЭТ ингибиторов.
2.2.6. Определение аминокислот, входящих в реактивный центр ингибиторов.
2.2.7. Изучение рНстабильности и термостабильности ингибиторов .
2.2.8. Определение аминокислотного состава.
2.2.9. Восстановление и алкилирование белков.
2.2 Автоматическая деградация белков по Эдману.
2.2 Определение константы ингибирования К, протеиназ.
2.2 Определение молекулярной массы.
2.3. Результаты и их обсуждение
2.3.1. Выделение и очистка катионных ингибиторов из покоящихся
семян гречихи Раоругит езси1еп1ит Моепсй. сорта Шатиловская 5 .
2.3.2. Характеристика физикохимических свойств катионных ингибиторов из семян гречихи
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Классификация ингибиторов, несколько различающаяся в работах разных авторов, основывается на гомологии аминокислотных последовательностей, строения активных центров, расположения дисульфидных связей и механизмов ингибирования i , Мосолов и Валуева, . Большинство известных и исследованных в настоящее время ингибиторов протеиназ из растений взаимодействуют с сериновыми протеиназами трипсином, химотрипсином, субтилизином. В последние годы были также открыты и охарактеризованы белковые ингибиторы цистеи новых протеиназ цистатины. Практически мало изученными остаются белковые ингибиторы металлопротеиназ и аспартильных протеиназ. Кроме того, к настоящему времени накоплено много данных об ингибиторах протеиназ, принадлежность которых к какомулибо из описанных семейств не установлена. Семейство соевого ингибитора трипсина Кунитца I. Семейство соевого ингибитора трипсина и химотрипсина БауманаБирк I. Семейство ингибиторов I из картофеля I1. Семейство ингибиторов II из картофеля I2. Семейство тыквенных ингибиторов. Семейство ингибиторов субтилизинааамилазы у злаков. Семейство фитоцистатинов. Семейство нанинов. Семейство серпинов. Семейство ингибиторов аспартильных протеиназ. Неклассифицируемые ингибиторы протеиназ. Большой интерес к изучению белковингибиторов протеиназ семян связан в первую очередь с их вероятным участием в регуляции процессинга и распада белков семян, а также в защите от поражения насекомыми и микроорганизмами Мосолов и Валуева, . В то же время ингибиторы протеиназ привлекают внимание исследователей и с практической точки зрения, вопервых, как потенциально токсические вещества, способные влиять на пищевую и кормовую ценность растительных белков, и, вовторых, как вещества, обладающие определенным терапевтическим антиканцерогенным действием. В стратегии балансирования между позитивными и негативными эффектами действия ингибиторов необходим всесторонний подход к изучению этих белков характеристика биохимических, генетических и молекулярных свойств. Семейство соевого ингибитора трипсина Кунитца I. Ингибитор трипсина из сои был первым белком ингибитором протеолитических ферментов, выделенным из растительной ткани в чистом виде i, . Определена первичная структура этого белка i I, . Молекула I состоит из 1 а. Да и стабилизируется двумя дисульфидными связями в положениях и . Трипсинсвязывающий реактивный центр ингибитора, включающий в себя пептидную связь I, расположен внутри пептидной петли, образованной первым из указанных выше дисульфидных мостиков. В настоящее время ингибиторы семейства Кунитца выделены из семян целого ряда бобовых растений, а также из некоторых растений других семейств таблица 1. Все эти белки имеют сходную структуру. Пол и пептидная цепь каждого ингибитора состоит из 01 а. Молекулярная масса составляет кДа. Таблица 1. Ингибиторы семейства соевого ингибитора Куиитца. Растительный источник Ингиби тор Фермент мишень Свойства Мол. Семена сои i x I Тр Р, ,1 i, . Семена мимозы i I Тр 11 Хтр21 Р, ,0 i . Семена канавалии vi i IIII Тр 11 Хтр К,3,7 нМ ,5 . Семена канавалии vi i III IIII Субт Субт i ,0 ,0 . Семена эритрины i vi i, сорта ii I I Тр 11 Тр 11 ,2 ,3 . Ютубни картофеля . I1 I2 Тр, Субт ИЭТ 6,9 ИЭТ 8,6 . i, . Клубни картофеля . Истринский I I ЛЭЧ Хтр Тр тр, Хтр не опр. i i ,0 ,5 4,5 ,0 Vv . Валуева и др. Семена горчицы ii . I Тр 11 ,2,2 нМ ,0 i , . Семена крылатых бобов . . I1 I Тр 11 Хтр 2,5 нМ ИЭТ 8,5 ,2 , . , . Семена i i Тр К,0, нМ Рь ,0 , . Семена i ii II Тр К,1,1 нМ ИЭТ 7,0 ,0 x2 iv , . Ссмяна i i Тр Хтр К, нМ ИЭТ 4,0. . Тр трипсин Хтр химотрипсин ЛЭЧ лейкоцитарная эластаза человека, Субт субтилизин.