Исследование влияния антиангиогенных агентов и конъюгатов альфа-фетопротеина и эпидермального фактора роста с химиотерапевтическими препаратами на онкогенез

• Автор: Киселев, Сергей Михайлович
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 97 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Физиологический аигиогенез

1.2. Роль ангиогенеза в развитии злокачественных новообразований

1.3. Морфологические особенности опухолевого ангиогенеза

1.4. Генетическая детерминация опухолевого ангиогенеза

1.5. Основные медиаторы опухолевого ангиогенеза

1.5.1. УЕвР фактор роста эндотелия сосудов

1.5.2. Ангиопоэтины

1.5.3. Основной фактор роста фибробластов ЬБОР
1.5.4. Окись азота 0
1.6. Ингибиторы опухолевого ангиогенсза.
1.7. Перспективы антиангиогенного и антиваскулярного воздействия в противоопухолевой терапии.
1.7.1. Антиангиогенная терапия
1.7.1.1. Ингибиторы ангиогенных факторов роста
1.7.1.2. Ингибиторы протеолитических ферментов ВКМ, опосредующих процесс ангиогенеза.
1.7.1.3. Ингибиторы клеточноматриксных взаимодействий
1.7.1.4. Ингибиторы пролиферации эндотелиальных клеток
1.7.2. Антиваскулярная терапия
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Получение ангиостатина
2.1.1 Приготовление аффинной смолы для выделения плазминогена
2.1.2. Выделение плазминогена.
2.1.3. Протеолиз плазминогена эластазой.
2.1 4.Выделение и очистка ангиостатина
2.2 Получение и очистка фрагментов плазминогена, полученных протеолизом сериновыми протеазами
2.2.1 , кДа протеолитический фрагмент плазминогена
2.2.2. кДа протеолитический фрагмент плазминогена К
2.2.3. Электрофоретическое разделение белков в полиакриламидном геле.
2.2.4. Иммуноблоттинг
2.3. Выделение и очистка АФП.
2.4. Выделение и очистка ЭФР
2.5. Получение конъюгатов
2.5.1. Получение конъюгата Др с АФП.
2.5.2. Получение конъюгата Др с ЭФР
2.6. Культивирование клеток
2.7. Определение циготоксической активности препаратов i vi
2.7.1. Определение ЦТА ангиостатина в отношении эндотелиальных клеток АВАЕ
2.7.2. Определение ЦТА ангиостатина, протеолитических фрагментов
плазминогена и конъюгатов доксорубицина с АФП и ЭФР в отношении эндотелиальных клеток НЦУЕС.
2.7.3. Определение ЦТА плазминогена, ангиостатина и конъюгатов
доксорубицина с АФП и ЭФР в отношении клеток ЗТЗ, ЬБМС, МСР7,
2.7.4. Оценка жизнеспособности клеток
2.8. Определение противоопухолевой активности препаратов i viv
2.8.1. Животные и опухоли
2.8.2. Дозы препаратов и схемы их введения
2.8 2.1. Ангиостатин
2.8.2.2. Интерферона
2.8.2.3. Доксорубицин и его конъюгаты с АФП и ЭФР
2.8 2.4. Контрольные животные
2.8.2.5. Объем опухолей
2.8.2.6. Продолжительность жизни животных
2.9. Статистическая обработка результатов
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Получение и очистка ангиостатина
3.1.1. Выделение плазминогена из плазмы крови человека
3.1.2. Получение и очистка ангиостатина
3.2.Определение цитотоксической активности ангиостатина
3.3. Изучение активности фрагментов протеолиза плазминогена
сериновыми протеазами
3.3.1. Протеолитическое расщепление плазминогена ахимотрипсином
3.3.2. Протеолитическое расщепление плазминогена плазмином
3.3.3. Цитотоксическая активность протеолитических фрагментов Пг
3.4. Исследование противоопухолевой активности ангиостатина i viv
3.5. Исследование антиангиогенной и противоопухолевой активности интерферонаа i vi
3.6. Получение и исследование противоопухолевой активности конъюгатов доксорубицина с векторными белками афетопротеином и эпидермальным фактором роста
3.5.1. ЦТА доксорубицина и его коньюгатов с АФП и ЭФР
3 .5.2. Цитотоксическая активность конъюгатов АФПДР и ЭФРДР в
отношении эндотелиальных клеток
3.5.3. Противоопухолевая активность ДР и его конъюгатов с АФП и ЭФР i viv
3.5.4. Исследование противоопухолевой активности конъюгата АФП с ДР и интерферонаа i viv
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


ГЛАВА 1. Ингибиторы опухолевого ангиогенсза. Перспективы антиангиогенного и антиваскулярного воздействия в противоопухолевой терапии. Ингибиторы протеолитических ферментов ВКМ, опосредующих процесс ангиогенеза. ГЛАВА 2. Выделение плазминогена. Протеолиз плазминогена эластазой. Получение и очистка фрагментов плазминогена, полученных протеолизом сериновыми протеазами
2. Электрофоретическое разделение белков в полиакриламидном геле. Выделение и очистка АФП. Получение конъюгата Др с АФП. АФП и ЭФР в отношении эндотелиальных клеток НЦУЕС. АФП и ЭФР в отношении клеток ЗТЗ, ЬБМС, МСР7,
2. ГЛАВА 3. АКК еаминокапроновая кислота. ТТБСтвинтриссольсодержащий буфер 0. М ТрисНС1, 7. М НаС1, 0. ТТБСЧСА ТТБС с добавлением 0. ФСБ фосфатносолевой буфер мМ дигидрофосфат натрия, рН7. Одной из ключевых проблем современной медицинской науки и смежных с ней дисциплин является поиск путей повышения эффективности терапии злокачественных новообразований. Развитие опухолей представляет собой сложный морфогенетический процесс, полностью интегрированный в систему жизнеобеспечения организма. Интенсивные метаболитические потребности опухолевых клеток требуют адекватного снабжения их питательными веществами. Известно, что поддержание роста злокачественных новообразований тесно связано с процессом ангиогенеза, заключающегося в образовании кровеносной сосудистой сети, питающей опухоль. Подавление ангиогенеза приводит к резкому торможению роста опухолей и развития регионарных метастазов. В связи с этим особенно актуальной задачей является разработка методов получения и изучения возможностей терапевтического применения антиангиогенных препаратов, среди которых наиболее перспективным является ангиостатин мощный эндогенный ингибитор ангиогенеза, образование которого инициируется рядом опухолей. Также важным представляется исследование антиангиогенного потенциала известных, хорошо зарекомендовавших себя в клинической практике препаратов, обладающих широким спектром терапевтического действия стимуляция иммунной системы, подавление роста опухолей, способность снижать мутагенность химиопрепаратов и т. Одним из таких препаратов может служить интерферон, изучение антиангиогенного и противоопухолевого действия которого в комбинированной терапии, совместно с противоопухолевыми препаратами направленного действия, может привести к значительному увеличению эффективности лечения онкологических заболеваний. Несмотря на достигнутые в последние годы успехи в применении антиангиогенных агентов в области онкологии, необходимо отметить, что хотя их действие приводит к эффективному торможению роста опухолей, после прекращения терапии происходит быстрое возобновление опухолевого роста. Однако, применение химиопрепаратов, в свою очередь, имеет ряд ограничений, важнейшими из которых являются низкая избирательность их действия и развивающаяся в короткие сроки резистентность опухолевых клеток к лекарственным препаратам. Одним из наиболее перспективных путей повышения терапевтической эффективности химиопрепаратов является их избирательный транспорт в виде конъюгатов с белковыми векторными молекулами. В связи с этим актуальной задачей исследования являлось получение конъюгатов АФП и ЭФР с доксорубицином препаратом, широко используемым в клинической практике, а также сравнительное изучение противоопухолевой активности полученных конъюгатов. Параллельно решались задачи разработки метода препаративного выделения ангиостатина и изучения антиангиогенной и противоопухолевой активности ангиостатина и интерферона i vi и i viv.