Исследование механизмов активации генов CYP2B в печени крыс при индукции трифенилдиоксаном и фенобарбиталом

• Автор: Шварц, Елена Ивановна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 91 с. : ил.

1 1 Функционирование микросомалыюй моноокенгеназной системы в печени человека н животных.

1.2 Множественные формы цитохрома Р0. Суперссмсйсгво Р0.

1.3 Типы ксенобиотиков

Глава 2. Подсемейство 2.л

1

2 1 Характеристика подсемейства 2 у разных видов животных и человека.

2.2 Питохромы 2В1 и 2В2 печени крыс

2.3. Механизмы активации генов 2 под действием фенобарбитала.

Глава 3. Материалы

Глава 4. Методы

Глава 5. Результаты исследований .

5.1. Исследование экспрессии генов щгтохромов РВ в печени крыс при воздействии ксенобиотиков с различной химической структурой.
5.2. Изучение динамики накопления мРГПС генов 2 крыс при индукции фенобарбнталового типа
5.3. Связывание участка ДНК п.н. гена с ядерными белковыми экстрактами, выделенными из печени контрольных и индуцированных фенобарбиталом или трифенилдноксаном животных
5 4 Связывание фрагмента ДНК п н гена СУР2И2 с ядерными белковыми экстракгами, выделенными из печени контрольных и индуцированных фенобарбиталом
или трифенилдноксаном животных
5.5. Влияние индукторов фенобарбнталовоготипа на образование ДНКбслковых комплексов участками минимальною нромоторною элемента и ядерными белковыми факторами.
5.6. Роль тр ифешишиоксана в формировании белковых комплексов с учасисами минимального промоторного элемента
5.7. Влияние индукторов фенобарбт аловоготнпа на связывание участков Барбибокса и негативного элемента гена СУР2В2 с белковыми ядернымм экстрактами, выделеннычш из печени фенобарбитал или трифснилдиоксан индуцированных
животных
Глава 6. Обсуждение результатов
6 Изучение роли минимального про моторного элемента в индуцируемой
фенобарбитал или трифснилдиоксан экспрессии генов СУР2В
6.2. Влияние индукторов фенобарбт алового типа на формировании белковых
комплексов с участками минимального промоторного элемента .
СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ


Живые организмы, взаимодействуя с окружающей средой, подвергаются продолжительному воздействию различных химических компонентов биологического и антропогенного происхождения лекарств, ядов, химических факторов загрязнения окружающей среды, пищевых добавок, юрмоиов, содержащихся в воле, воздухе, почве, пищевых продуктах Дегоксикаимю н последующее выведение из организма утих веществ, как экзогенного, так и эндогенного происхождения, осуществляет микросомальная моноокенгеназная система ММС, локализованная в экдоплазматнческих мембранах различных органов и тканей Способность ММС метаболизировать ixi число ксенобиотиков КС и эндогенных субстратов обусловлена функционированием множественных форм ее ключевого компонента цитохрома Р0 Мишин. Ляхович, Ксенобиотики претерпевают в организме метаболическую активацию, превращаясь в промежуточные электрофильные продукты. Эти метаболi либо удаляются из организма либо взаимодействуют с макромолекулами клетки ДНК, РНК, белки, что приводит, в конечном счете, к развитию процессов канцерогенеза Например, показано, что активация цитохромов Р0 лолицикличсскими ароматическими углеводородами и ароматическими аминами предшествует токсическому и канцерогенному действию этих соединений на организм человека и животных . Следователыю. Известно более 0 ксенобиотиков, обладающих способностью вызывать обратимое увеличение ферментативной активности монооксигеиаз. В связи с этим становится очевидной необходимость изучения механизмов, регулирующих активность множественных форм цитохрома Р0. В последнее время большое внимание уделяется изучению подсемейства генов 2 Ферменты этого подсемейства участвуют в метаболизме лекарственных препаратов, а также осуществляют детоксикацию многих ксенобиотиков с самой разнообразной химической структурой , . Эти же могут активировать некоторые опасные токсины такие, как афлатоксин В, с образованием, генотоксичных канцерогенных аддукюв с ДНК и белками . Подсемейство 2 индуцируется большой группой структурно неродственных индукторов органические растворители, пестициды, хлорированные бифенилы и лекарства. Прототипом этой группы является фенобарбитал ФБ, применяемый с года как снотворное и протнвосудорожнос лекарство при лечении эпилепсии К этой группе также относится трифенилдноксан ТФД ii , Механизм активации генов 2 в печени крыс во время индукции ФБтипа до конца не ясен и широко дискутируется в специальной литературе x , x, . Кроме этого, неизвестно, является ли действие индукторов ФБтипа универсальным, как это описано для полнцнкличсских ароматических углеводородов ПАУ, которые имеют планарное строение, или каждый индуктор запускает особенный механизм активации генов 2. В настоящее время происходит накопление экспериментальных данных о регуляторных элементах, участвующих в транскрипции генов 2 под действием индукторов ФБтипа Не , i , , i . В районе, локализованном между 9, названном группой Падманабана минимальным промотором, выявлены два участка, с которыми связываются факторы транскрипции По своим функциям эти участки были названы негативным и позитивным регуляторными элементами, НЭ и ПЗ соответственно. В сосгав ПЭ входит последовательность , названная Барбибоксом, встречающаяся у большинства прокариот и эукариот Не , , , , . В литературе описаны гельретардацнонные эксперименты по изучению взаимодействия позитивных или негативных элементов с ядернымн экстрактами из печени контрольных и индуцированных крыс При этом выделение ядерных экстрактов из печени индуцированных крыс осуществляют в мерные часы после введения индуктора Не . К настоящему моменту нет данных о динамике связывания ГГ и НЭ с ядернымн экстрактами, выделенными в разнос время от начала введения индукторов Кроме этого, в последнее время роль как всего минимального промоторного элемента, так и собственно Барбибокса в регуляции транскрипции генов 2 была поставлена под сомнение Так, в работе Рамсдена с соавт. ФБчувствнтельным , . В лаборатории Андерсона показано, что введение в Барбибокс 3 нуклеотидных замен не оказывает влияния на активируемую индукторами экспрессию гена . Таким образом, ряд вопросов, касающихся регуляции экспрессии генов 2.