Исследование влияния липоевой и селенолипоевой кислот на активность НАДФН-цитохром Р450 редуктазы и на ее окислительное повреждение под действием пероксинитрита

• Автор: Сергеева, Светлана Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 114 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. НАДФНцитохром Р0 редуктаза фермент микросомальной монооксигеназной системы

1.2. Биологическая роль липоевой кислоты

1.3. Пероксишггрит как медиатор окислительных повреждений в биологических системах

Заключение по обзору литературы и постановка задачи

1 ЛАВА 2.МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

ГЛАВА 3. ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ ЛИПОЕВОЙ И СЕЛЕНОЛИПОЕВОЙ КИСЛОТ НА АКТИВНОСТЬ НАДФНЦИТОХРОМ Р0 РЕДУКТАЗЫ И МИКРОСОМАЛЬНОЙ МОНООКСИГЕНАЗНОЙ СИСТЕМЫ
3.1. Влияние липоевой кислотой на активность изолированной НАДНцитохром Р0 редуктазы печени крыс
3.2. Исследование механизма инактивации изолированной НАДНцитохром Р0 редуктазы печени крыс липоевой кислотой
3.3. Исследование обратимости инактивации изолированной НАДНцитохром Р0 редуктазы печени крыс
3.4. Влияние липоевой кислоты на акгивность микросомальной НАДФНцитохром Р0 редуктазы печени крыс
3.5. Влияние липоевой кислоты на активность рекомбинантной НАДФНцитохром Р0 редуктазы человека
3.6. Влияние селенолипоевой кислоты на активность рекомбинантной НАДФНцитохром Р0 редуктазы человека
3.7. Влияние липоевой и селенолиповой кислот на активность микросомальной монооксигеназной системы печени крыс i vi
Обсуждение результатов Главы 3
ГЛАВА 4. ИССЛЕДОВАНИЕ АНТИОКСИДАНТНЫХ СВОЙСТВ ЛИПОЕВОЙ И СЕЛЕНОЛИПОЕВОЙ КИСЛОТ ПО ОТНОШЕНИЮ К ПЕРОКСИНИТРИТУ НА
ФЕРМЕНТАТИВНОЙ МОДЕЛЬНОЙ СИСТЕМЕ
4.1. Исследование возможности применения НАДФНцитохром Р0 редуктазы в качестве модели для тестирования антиоксидантов
4.2. Влияние селенолипоевой и липоевой кислот на скорость окисления дигидрородамина3 пероксинитритом
4.3. Влияние селенолипоевой кислоты на инактивацию НАДФНцитохром Р0 редуктазы пероксинитритом
4.4. Влияние липоевой кислоты на инактивацию НАДФНцитохром Р0 редуктазы пероксинитритом
Обсуждение результатов Главы 4
Приложение 1
Приложение 2
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Несмотря на известные антиоксидантные свойства Л К ее защитное действие при вызываемых пероксинитритом окислительных повреждениях, а также взаимодействие с ПН изучены крайне мало. Кроме того остались в стороне исследования антиоксидантных свойств ее селеносодержащего аналога селенолипоевой кислоты СЛК, хотя особенность ее химического строения предполагает наличие высокой антиоксидаитной активности. В настоящее время селеносодержащим соединениям уделяется особое внимание в связи с поиском эффективных антиоксидантов для пероксинитрита . Целью настоящей работы является исследование механизмов действия липоевой кислоты и ее селеносодержащего аналога в свете их возможных реакций с сульфгидрильными группами ферментов и с пероксинитритом. В рамках поставленной цели исследуется возможность проявления ингибиторного действия ЛК и СЛК в отношении НАДФНцитохром Р0 редуктазы, а также защитного действия этих соединений при окислительном повреждении редуктазы под действием пероксинитрита. ПН, исследовать эффекты ЛК и СЯК на окислительное действие ПН на этой ферментативной модельной системе. Научная новизна. Исследовано влияние и механизм действия липоевой и селенолипоевой кислот на активность изолированной и мембраносвязанной НАДФНцитохром Р0 редуктазы печени крыс, а также влияние этих соединений на окисление субстратов цитохрома Р0. В работе на примере ингибирования НАДФНцитохром Р0 редуктазы впервые продемонстрирована ингибиторная способность липовой и селенолипоевой кислот в отношении ферментов, содержащих существенные сульфгидрильные группы. Впервые показано, что под действием пероксинитрита происходит ингибирование изолированной НАДФНцитохром Р0 редуктазы и изучен механизм этого ингибирования. На ферментативной модельной системе исследована антиоксидантная активность липоевой и селенолипоевой кислот в отношении пероксинитрита. Впервые показано, что в реакции ПН с ЛК образуется реакционноспособный продукт, способный взаимодействовать с сул ьфгидрильными группами белков. В работе обнаружен ранее не описанный механизм защитного действия липоевой и селенолипоевой кислот, показанный на примере окислительного повреждения редуктазы под действием пероксинитрита. Практическая значимость. Обнаруженные в работе ингибиторные свойства липоевой кислоты и ее селеносодержащего аналога в отношении НАДФПцитохром Р0 редуктазы указывают на возможность проявления аналогичного действия этих соединений на активность микросоматьной моноокеш еназной системы в случае применения их в качестве лекарственных препаратов. Предложенная в настоящей работе ферментативная модель на основе НАДФНцитохром Р0 редуктазы позволяет тестировать антиоксидантные свойства соединений по отношению к псроксинитриту. Полученные в настоящей работе данные по защитным эффектам липоевой и селенолипоевой кислот расширяют понимание механизмов действия антиоксидантов, и могут использоваться для создания новых антиоксидантов. Апробация работы и публикации. Основные результаты работы были доложены на м Европейском симпозиуме по Метаболизму лекарств Йена, Германия, и на 6м Международном симпозиуме но Биологически активным интермедиатам Париж, Франция, . По материалам диссертации опубликовано три статьи и тезисы двух докладов 2,36. ГЛАВА 1. В настоящей работе для исследования эффектов липоевой и селенолипоевой кислот на ферменты, содержащие существенные сульфгидрильные группы, а также на окислительные повреждения ферментов, вызываемые пероксинитритом, был использован фермент микросомальной монооксигсназной системы АДФ1цитохром Р0 редуктаза. Функция микросомальной монооксигеназной системы состоит в том, чтобы активировать инертную молекулу кислорода и внедрить один или два атома кислорода в органическое соединение А субстрат системы. Микросомальная монооксигсназная система представляет собой комплекс ферментов, встроенных в мембрану эндоплазматического ретикулума. НАДФНзависимый флавопротеид НАДФНцитохром Р0 редуктаза К. Ф.1. НАДНзависимый флавопротеид НАДНцитохром Ь5 редуктаза К. Ф.1. Р0 К. Ф. 1. Ь5 в дальнейшем Ь5.