Ингибиторы сериновых протеиназ из семян кукурузы

• Автор: Ливенская, Ольга Анатольевна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1985
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 144 c. : ил

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ А

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Белкиингибиторы сериновых протеиназ у растений семейства злаковых .

1.1. Распространение и локализация

1.2. Аминокислотный состав и физикохимические свойства

1.3. Первичная структура

1.. Физиологические функции

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Материалы

2.2. Аффинная хроматография.А

2.3. Гельхроматография . А
2.А. Изоэлектрическое фокусирование . А
2.5. Электрофорез в полиакриламидном геле . А
2.6. Аминокислотный анализ А
2.7. Восстановление дисульфидных связей и их алкилирование
2.8. Определение содержания сульфгидрильных групп .
2.9. Спектры кругового дихроизма
2 Спектры поглощения и собственная флуоресценция .
2 Диссоциация комплекса ферментингибитор .
2 Определение активности ингибиторов
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Содержание ингибиторов протеолитических ферментов
в семенах растений семейства злаковых .
3.2. Ингибиторы химотрипсина и трипсина из семян кукурузы.
3.2.1. Выделение и очистка
3.2.2. Аминокислотный состав
3.2.3. Физикохимические свойства .
3.2.А. Особенности структурной организации. Действие
денатурирующих факторов
3.2.5. Взаимодействие с ферментами
А. ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
5. ВЫВОДЫНА
СПИСОК ЦИТИРОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


Отдельные части диссертации докладывались на Всесоюзной конференции по перспективам использования биоспецифической хроматографии в технологии производства высокоочшценных ферментов Вильнюс, , 1У Всесоюзном симпозиуме Инженерная энзимология Киев, , Международном симпозиуме ФМО Регуляция микробного метаболизма факторами внешней среды Пущино, , У1 Всесоюзном симпозиуме Химия белков и пептидов Рига, , ХУТ конференции ФЕБО Москва, , а также на научных конференциях Института биохимии им. А.Н. Баха АН СССР. I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. I.I. С тех пор, как Кунитц первым выделил ингибиторы трипсина из поджелудочной железы быка и бобов сои, обнаружено большое количество белковых ингибиторов протеиназ в различных органах и тканях животных, в растениях и микроорганизмах 5,8,,. Панкреатические ингибиторы трипсина, овомукоиды и овоингибиторы, ингибиторы из молозива и ингибиторы i протеиназ хорошо известные примеры ингибиторов протеолитических ферментов, найденные в тканях животных . Ингибиторы трипсина из соевых бобов и ингибиторы из лимских бобов, ингибитор химотрипсина из картофеля примеры детально изученных ингибиторов протеиназ из растений . Присутствие белковых ингибиторов протеиназ в растениях семейства злаковых отмечалось еще Линером в г. Необходимо отметить, что наиболее изученные к настоящему времени эндогенные протеиназы зерна являются в основном ферментами тапаинового типа с оптимумом в кислой среде ,, ингибиторы этих протеиназ в настоящем обзоре рассматриваться не будут. В семенах злаков белкиингибиторы сериновых протеиназ содержатся в эндосперме, зародыше, алейроновом слое и оболочке табл. I. Они обнаружены в корнях, колеоптили, листьях проростков, но отсутствуют в дифференцированных вегетативных тканях. i ii . ii v . Семенная оболочка 6. iv 1. . i . v iv 1. v . Зародыш, эндосперм. ИНГИБИТОРЫ ХИМОТРИПСИНА . i ii . ii v . i iv . Ь. i . v iv . i v . СПЕЦИФИЧЕСКИЕ ИНГИБИТОРЫ МИКРОБНЫХ ПРОТЕАЗ Ингибитор протеаз v . i . ii v . v Ъ. iv . ii v . В эндосперме и зародыше ячменя, пшеницы, ржи на долю ингибиторов трипсина приходится 5 водорастворимого белка, а группа ингибиторов химотрипсина и микробных протеаз в ячмене составляет 45 водорастворимой фракции белков . Высокое содержание ингибиторов трипсина также отмечалось в семенах кукурузы . Наиболее высокая антитриптическая активность обнаружена в зародыше пшеницы, ржи, овса и ячменя ,. В значительно меньших количествах ингибиторы трипсина присутствуют в эндосперме этих культур ,,,, ,, алейроновом слое ячменя ,,, семенной оболочке пшеницы . С помощью высокочувствительного иммунологического метода для таких культур, как пшеница и ячмень было показано, что локализованный в зародыше ингибитор трипсина отличен от ингибитора, присутствующего в эндосперме семени. Более того, иммунологический и иммуноэлектрофоретический анализ показал, что данный белок из зародыша ячменя аналогичен соответствующим ингибиторам зародыша пшеницы и ржи , а ингибитор трипсина из эндосперма ячменя аналогичен соответствующему белку из эндосперма ржи , . Иммунологические свойства очищенного из эндосперма пшеницы ингибитора трипсина, повидимому, являются отличными не только от ингибиторов, локализованных в зародыше пшеницы, но и от ингибиторов, полученных из эндосперма ячменя и ржи . Выделенный из кукурузы ингибитор трипсина ,,0,1 локализован в эндосперме, однако, имеются сведения о присутствии белков, подавляющих активность трипсина, и в зародыше . В семенах проса , сорго , тритикале локализация ингибиторов не изучена. Развивающиеся новые органы корни и колеоптили пшеницы ,, ячменя ,,, кукурузы ,, 2, ржи также содержат белки, инактивирующие трипсин. Ингибиторы химотрипсина и ряда сериновых микробных протеиназ, подобно ингибиторам трипсина,присутствуют на всех стадиях развития ячменя и пшеницы в меристематических тканях ,,,.