Иммунохимический анализ конформационных изменений и наследственных нарушений экспрессии гликопротеидов IIb-IIIa тромбоцитов человека

• Автор: Хаспекова, Светлана Георгиевна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1998
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 133 с.

Эти свойства ГП IIII определяют интерес к изучению его структуры и механизмов функционирования. Кроме того исследование этого белка, относящегося к семейству интегринов, позволяет понять основные принципы функционирования других молекул представителей этого семейства. При исследовании структуры и механизмов функционирования ГП IIII большое распространение получило использование моноклональных антител моноАТ. В начале х годов и соавт. АТ, способные блокировать связывание тромбоцитов с фибриногеном и показали, что это антитело связывается с ГП III. В последующие годы было получено большое количество разных моноАТ, направленных как против комплекса ГП I, так и его отдельных компонентов. Особый интерес представляют антитела, направленные против эпитопов, специфических для разных конформационных состояний комплекса так называемые конформационно зависимые антитела. Использование подобных антител помогает расширить представления о механизмах активации комплекса и регуляции связывания фибриногена. С помощью таких антител было доказано существование активированной и оккупированной лигандом конформаций комплеса. Однако многие вопросы, связанные с функционированием ГП III остаются неясными. Так, необходимо выяснить роль различных участков молекул ГП НЪ и 1а в конформационных изменениях комплекса, неизвестны механизмы конформационных изменений ГП ПЬШа при адгезии и распластывании тромбоцитов на поверхности субстрата,. Применение моноклональных антител против ГП III позволило развить подходы для дифференциальной диагностики больных с тромбастенией Гланцманна. Иммунохимический анализ нарушений экспрессии ГП i и Ii являются необходимым этапом для понимания молекулярных основ патогенеза этого заболевания в каждом отдельном случае. Целью настоящей работы явилось исследование конформационных изменений и наследственных нарушений экспрессии комплекса гликопротеидов III тромбоцитов человека с помощью иммунохимических методов. Были поставлены следующие задачи. Получить и охарактеризовать моноАТ, способное различать ГП ПЬ1ТТа в различных конформационных состояниях. Исследовать закономерности конформационных изменений ГП НЬШа и их взаимосвязь с функциональной активностью тромбоцитов. Исследовать механизмы агрегации тромбоцитов, стимулированной моноАТ против конформационнозависимых эпитопов ГП НЬШа. Используя иммунохимические методы анализа, выявить и охарактеризовать наследственные нарушения экспрессии ГП ИЬШа при некоторых вариантах тромбастенин Гланцманна. Структура и функциональные реакции тромбоцитов. Тромбоциты, или кровяные пластинки, представляют собой безъядерные клеточные компоненты крови, играющие центральную роль в начальных стадиях процессов гемостаза и тромбообразования. Циркулирующие тромбоциты имеют форму диска с диаметром мкм и в нормальных условиях не взаимодействуют с внутренней поверхностью сосуда, полностью покрытой атромбогенным пластом эндотелиальных клеток. Однако при механическом нарушении целостности сосуда или при повреждении сосудистой стенки в результате патологических процессов атеросклероз, инфекция, аутоиммунные патологии в просвет сосуда экспонируются компоненты субэндотелия, главным из которых является коллаген, и тромбоциты при участии фактора Виллебранда быстро прилипают адгезируют к поврежденному участку. Параллельно процессу адгезии происходит активация тромбоцитов коллагеном субэндотелия, АДФ, высвобождающимся из поврежденных клеток, и тромбином, образующимся в участке повреждения в результате инициации каскада свертывания. Способствовать активации тромбоцитов могут и некоторые друтие появляющиеся в плазме соединения адреналин, серотонин, фактор активации тромбоцитов, иммунные комплексы и т. Эти индукторы, юли агонисты, взаимодействуют со специальными рецепторами на поверхности тромбоцитов и опосредуют свое действие через систему вторичных посредников, стимулируя активацию фосфолипазы С, образование фосфоинозитидов и диацилглицерина, повышение концентрации цитоплазматического кальция, активацию протеинкиназ и другие процессы.