Иммунохимическое изучение деструктивных процессов в нервной ткани при различной нервной патологии

• Автор: Абрамова, Оксана Сергеевна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 118 с.

1.1. Краткая история изучения аутоантител к нервной ткани

1.2. Роль и значение естественных аутоантител

1.3.1 Изучение аутоантител при наркологических заболеваниях

1.3.2 Болезнь Паркинсона

1.3.3 Эпилепсия

1.3.4. Рассеянный склероз

1.3.5 Боковой амиотрофический склероз

1.3.6. Травматическая болезнь головного мозга

1.3.7. Шизофрения

1.4 Заключение

Материалы и методы

2.1 Экспериментальный материал
2.2 Приготовление тканевых экстрактов и фракций
из солюбилизированных мембран
2.3. Выделение и очистка белка
2.3.1 Выделение нейроростового фактора НВвАМ
2.3.2. Выделение белка БЮОЬ
2.4. Дискэлектрофорез
2.4.1. Дискэлектрофорез в полиакриломидном геле
2.4.2. Дискэлектрофорез в ПААТ, содержащем
додецил сульфат натрия
2.5. Иммунизация животных
2.6. Перекрестный иммуноэлектрофорез
2.7.Твердофазный иммунофсрментный анализ
2.7.1. Твердофазный иммуноферментный анализ антигена
2.7.2. Твердофазный иммуноферментный анализ антител Глава
. Выделение, идентификация и разработка метода очистки нейроспецифического кислого протеина как одного из
аутоантител при деструктивных процессах.
Определение уровня аАТ к белкам нервной ткани НКП,
0Ь и р в образцах сыворотки крови больных с различной патологией нервной системы Глава 5.
Результаты и обсуждение работы Выводы
Указатель литературы
Введение


К настоящему времени получены i . Vi . АГ организма, т. Таким образом, естественные аАТ являются нормальными физиологическими компонентами организма, наделенными множеством различных функций , , i. Полетаев, . В свете этого пересматриваются прежние взгляды на иммунопривилегированность ткани мозга . Штарк, . Целью данной работы являлось исследование уровней аутоантител к ряду нейроспецифических белков и создание иммуноферментной тестсистемы, с помощью которой возможно оценить степень аутоиммунной агрессии к антигенам нервной ткани, что могло бы более объективно характеризовать тяжесть состояния больных и найти свое отражение в проводимой терапии. В соответствии с этим были поставлены следующие задачи
1. Выделить из ткани мозга человека белковый антиген с выраженными иммуногенными свойствами и высокой степенью нейроспецифичности. Идентифицировать данный антиген и изучить его основные физикохимические свойства. Разработать иммуноферментные тестсистемы для определения как самого данного антигена, так и антител к нему. Провести широкую апробацию разработанной тестсистемы для определения аАТ к полученному антигену в клинической практике. Провести тестирование коллекций образцов сыворотки пациентов с различными НПЗ. Для комплексного изучения аутоиммунных изменений, происходящих при НПЗ, разработать тестсистемы для определения аАТ к ряду известных белковых антигенов нервной ткани. Провести комплексное изучение результатов тестирования образцов сыворотки пациентов с различными НПЗ с помощью созданных тестсистем. В ткани мозга человека впервые идентифицирован ранее неописанный белок, что было подтверждено результатами изучения его аминокислотной последовательности. Белку было дано название нейроспецифический кислый протеин НКП. Разработан метод его очистки, позволяющий получать препарат данного белка с высокой степенью чистоты. Получены моноспецифические антисыворотки к НКП. Изучены его основные физикохимичесие свойства. Установлена клеточная локализация НКП. Разработаны иммуноферментные тестсистемы как для определения самого НКП, так и антител к нему. Проведена предварительная апробация разработанной тестсистемы для определения антител к НКП на клиническом материале в комплексе с тестсистемами для определения антител к белкам нервной ткани БЮОЬ и НВвАМ р. Проанализированы характер и специфические особенности изменений титров аАТ к указанным белкам при различной патологии нервной системы. Приготовлен стандарт высокоочищенного препарата НКП, к которому получены моноспецифические антисыворотки. Показана возможность применения разработанной иммуноферментной тестсистемы для определения антител к НКП в клинике для оценки степени аутоиммунной агрессии с направленностью к нейроантигенам, а также контроля проводимой терапии. Глава 1. Обзор литературы. Антитела к нейроспецисЬическим белкам мозга. Гипотеза об участии иммунной системы в патогенезе нервнопсихических заболеваний была выдвинута в конце прошлого столетия И. И. Мечниковым, который впервые обнаружил цитотоксический эффект сывороток крови больных с психозом на клетки ткани мозга. Позднее В. К. Хорошко высказал предположение о возможности участия аутоиммунных механизмов в развитии нервных и психических заболеваний, выявив циркулирующие аутоантитела против ткани мозга в сыворотке крови больных шизофренией. В г. С появлением более совершенных методических подходов обладающих большей специфичностью, процент позитивных результатов несколько снизился. В г. Н.И. Кузнецова и С. Ф. Семенов с помощью реакции связывания комплемента показали присутствие аАТ к нормальному мозгу человека в сыворотке крови больных шизофренией, а в г. АТ только у таких больных. Впоследствии появились сообщения об обнаружении в сыворотке крови больных нервнопсихическими заболеваниями АТ к гетерологичным АГ ткани мозга обезьян, мышей, крыс Кузнецова, , Vi . Большой сенсацией явились сообщения из США о выделении из крови больных шизофренией особой белковой фракции, названной тараксеином, обогащенной антимозговыми АТ, что связано с именем .