Изучение каталитических свойств липаз, иммобилизованных в гидрофобных средах

• Автор: Горохова, Ирина Викторовна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 129 с. : ил

Р.иос. В.свраса в. Вд. Р вгв. У.сЬоюав

Аса1соас. Р.сопв. Г.Пиогвв. С.у. Р . Ко1гае Ргад1 А сасслс. Рссс. РСиогв. Р.уидаг . О.дим Сувсиа Р. В.диаа
А В С
ОА 2 р
XX Я С
ОЛ Я. Р
я. АОВУУТВУОАОТ . ЕV Я. А5АТХ5 . Ш ПгУРХ 5 ААМО . ПСА УТйОвТАЯ. Х V А 8 V А А Р 0 . АУОУРЯ . Т V РТА8 . АРМ5 . XV УУАХ 5 0Р 0 0 5 РЯС А К В а X 1 5 з з 1 0 Р Я с . А.ч5 0ос5Р. Пууаях с . ХОЬЬООУВКУАЬОРК ЕфПАдУ ПАУТСАЕК . А 1АВ0 УрХААООООХ КОПАЯХОЕ ЯЕТвААЯ е0меруогуме7гагк 0. V7V. А X . РЭХС. Г Р 3 Т1АО . Г 1 РВЕО. I С РХТОС. Г 1 Е Р КИ . Р РООХУО. Г Г 0 К У А 0 . К Р А Я . ГЭГ РАЯ . Й Г У А 5 . РТ5АС5Е0АУК7Н . РГ5АСОЕОАУВ . ОЬ Р0РИКСРАС7 . ОУРТТАССООЕЗУИ. ЯЗСАКЕ7ННУЙ0И оьРЕтиссасргууя . РА Я О О Е О К Е V 7 Я . СЬОАРСЯ. С ЮР. РО . А 5 Р 7 З Я А А Р 5 З Г
а
. ЕЕАЕ
. АЗТАОРТ УГ ,. СА РУОРА 7а0РТ7У. СУТСАТО. Ю. гсагогто . АРНЕ г г. С И Г. УХ0У Г. УЗЕЛА Г 5 С С. ЕЛНРР1АЛЛ 7 Г 5 . Г РЕ . С РЯЕ КЬКЬАРУРСВЕАААР5ЛРА5К. СРАР. X У К 7 1А . СГПВАГХ АТХРНУАХХРХ ХООРЕ ОРОВУРХНЕУОААУ 7 Е 3 А 0 Г. РВ а т А . С V Г УУЯОУСР РС0ЕС0АЯААЯЛСЛУХ. Р0ЯЯА1ЭТ 7 ГАГА1В 5 А Н X. Р X К ООН У Р АЯ7АГ0ВИЕАВ1аХ1ИАВ1К7СУНОРГ1РЧНА2НЗ 7 у г зуа В . V Я Н 1УВВХВЕ0 . РКР V. ЛЗVЛVV . ЯК7ХА1АА1Р. Т 1 а а а уВ . Р И К . РНР. Г РУОСУЭКТОРГОСЕБТУХ ААРУЯУРСПУЕ . АЛОВ 5е X 0 0 V1А У С Р 7 5 5 5 V А А У V Я 7 Р 5 5 . ЯХАЯООААаГ Т . С . ВЯ0АГ1ОА1 . ТГР. Я РИ7ЛХ . V Р М Е Р1НМА1Р7Р ГГТЕ РГСТ. ГК АЛЕ РРАРТЗ . Р Т К А А X К V1в А . Р . М. У. ЬоХвга Ргад Лсасоас Г1асом. Р1иОГв. Всра В. С У. ОТ . АР . Р СТЕК Н Е . X5 0 . Г V Я. Е г . ГС5 И5 8ЛЯС2А Х. Р 1РС1ЕС вЬОЬУО УАОУО 1 V В в Ь С 7 В 5 ИЬСВС С 7 К
. Р . МТ ГОЛ . А X А Е . РУ5УГВОКАХ ОРУУВ0НАХ
РУРЗЕХИРУЯ . РУ1УВОНАХ . О Р V й 1 Р V Е И А А . А1УТХНАХ . О Р V А V В 7 Н А X . ОРУАУ ЯТ7Х . О Р V А V Я 7 Н V Я . Рис. Первичная структура бактериальных липаз выделены участки аминокислотной последовательности каталитические триады голубым, сходные фрагменты черным , а различающиеся желтым. Рис. Структура липазы из i, полученная методом кристаллофафии 3складчатая структура представлена стрелками, аспираль спиралью и прямоугольниками, красным цветом выделен связывающий участок активного центра. Третичная структура липазы из i ii и панкреатической липазы впервые была определена в году методом кристаллографии ,. С тех пор была определена структура липаз из источников, причем все, кроме панкреатической, имеют микробную природу. Молекулы липаз представляют из себя эллипсоид размером х х Л. Анализ третичной структуры липаз показал, что в цени содержится до 8 участков рскладчатого листа, связанных с 6 аспирапями. Активный центр фермента формируется аминокислотной триадой , и i, нуклеофильный остаток располагается на Сконцс р5складчатого листа в прочном пентапептиде XX, образующим участок рпетля аспирапь, называемый нуклеофильный изгиб. Нужно отметить, что аминокислотная триада, хотя и химически аналогична триаде ссриновых протеиназ, но имеет значительные структурные отличия. На Рис. Исследования четвертичной структуры липаз показали, что в зависимости от происходения они состоят из двух , четырех и шести субьединиц. Некоторые липазы также ассоциированы с глюкозидами и липидами . Впервые активация липазы на поверхности раздела фаз была описана Вильштеттсром в году при изучении гидролиза тристеарина . Позже Сарда и др. При изучении катализируемого панкреатической липазой гидролиза сложных эфиров, ограниченно растворимых в воде триацетин, метилбутират, было обнаружено, что активность фермента по отношению к истинному раствору субстрата низка. При повышении концентрации субстрата до значений, превышающих предел растворимости, субстрат образует эмульсию, что сопровождается резким возрастанием ферментативной активности Рис. Резкое возрастание активности липазы по отношению к трикапроину при превышении предела растворимости субстрата наблюдалось также в работе . Рис. Зависимость скорости гидролиза триацетина под действием панкреатической липазы 1 и эстеразы из печени 2 от концентрации субстрата. За единицу концентрации субстрата принята концентрация его насыщенного раствора.