Изучение иммуноцитохимическими методами локализации цитокинин-связывающего белка 70 кД в тканях и клетках этиолированных проростков кукурузы

• Автор: Васильева, Виктория Сергеевна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 107 с. : ил.

Содержание

СПИСОК УПОТРЕБЛЯЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Передача гормонального сигнала в растениях.

1.2. Передача цитокининового сигнала в растении.

1.2.1. Физиологические функции цитокининов.

1.2.2. Биосинтез цитокининов.

1.2.3. Механизм трансдукции цитокининового сигнала.

1.2.3.1. Мембранные рецепторы цитокининов

гибридные гистидиновые протеинкиназы.

1.2.3.2. Трансдукция сигнала внутри клетки
фосфотрансмиттеры
1.2.3.3. Гены первичного ответа на цитокннин
и их продукты регуляторы ответа
1.2.3.4. Передача цитокининового сигнала
через мембранный рецептор, общая схема.
1.2.3.5. Цитоплазматические рецепторы цитокинина.
2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
2.1 Материалы и методы исследования
2.1.1. Объекты исследования
2.1.2. Выделение растворимых растительных белков для
подбора условий иммуноцитохимического анализа ЦСБ
2.1.3. Выделение ЦСБ для анализа специфичности моноклональных антител разных групп
2.1.4. Измерение концентрации белка
2.1.5. Проведение аналитического электрофореза
и иммуноблоттинга ЦСБ
2.1.6. Иммуноферментный анализ влияния фиксации
и дегидратации на сохранение иммунореактивности ЦСБ
2.1.7. Иммуноферментный анализ влияния химических
реагентов на сохранение иммунореактивности ЦСБ.
2.1.8. Фиксация и заливка в смолу растительной ткани
2.1.9. Выявление ЦСБ на полутонких срезах
для световой микроскопии с помощью иммуномечения
2.1 Выявление ЦСБ на ультратонких срезах
для электронной микроскопии с помощью иммуномечения.
2.1 Количественная оценка выявления ЦСБ с помощью электронной микроскопии в компартментах клеток
проростка кукурузы
2.2. Результаты и обсуждение
2.2.1. Разработка методов иммуноцитохимического исследования локализации ЦСБ в тканях
и клетках проростка кукурузы.
2.2.1.1. Исследование воздействия на ЦСБ реагентов, используемых для обработки растительного материала
2.2.1.2. Подбор условий для иммобилизации
растительного материала в полимерную среду.
2.2.1.3. Подбор условий для иммуноцитохимического
выявления ЦСБ на срезах растительной ткани
2.2.2. Подбор антител для дифференцированного
выявления ЦСБ в органеллах растительных клеток
2.2.3. Иммуноцитохимическое исследование локализации ЦСБ в цитоплазме и ядрах клеток
проростка кукурузы.
2.2.4. Иммуноцитохимическое исследование локализации ЦСБ в пластидах клеток
проростка кукурузы.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЦИТИРОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


ВВЕДЕНИЕ. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Передача гормонального сигнала в растениях. Передача цитокининового сигнала в растении. Физиологические функции цитокининов. Биосинтез цитокининов. Механизм трансдукции цитокининового сигнала. Цитоплазматические рецепторы цитокинина. ЦСБ. ВЫВОДЫ. Одна из самых существенных особенностей жизненных процессов заключается в способности организма самостоятельно регулировать и координировать свои метаболические реакции. У растений весьма эффективными биорегуляторами, оказывающими влияние на все этапы жизнедеятельности, включая рост и развитие, являются фитогормоны. В отличие от сигнальных веществ других многоклеточных организмов, растительные гормоны полифункциональны и способны воздействовать при определенных обстоятельствах на любые ткани организма, вызывая различные изменения физиологических процессов в зависимости от баланса фитогормонов и состояния клетокмишеней. Большинство исследователей считает, что объяснение необычных свойств фитогормонов, нужно искать на уровне рецепции гормональных сигналов. Исследования в этой области важны не только для фундаментальной науки, на их основе возможно создание растений со свойствами, удовлетворяющими современным требованиям к урожайности и устойчивости к стрессовым условиям. Фитогормонами являются природные органические соединения, которые в малых концентрациях могут проявлять регулирующее воздействие на процессы роста и развития, а также на многие другие физиологические программы растений. К растительным гормонам относят небольшие молекулы, с молекулярным весом до 1 кД, способные беспрепятственно проникать в клетку и транспортироваться активно или пассивно по растению, влияя на тканьмишень. Шестью основными гормонами растений являются ауксины, цитокинины, гиббереллины, брассиностероиды, этилен, и абсцизовая кислота. Цитокииины представляют собой гормоны растений, участвующие в регуляции таких важнейших процессов, как деление клеток, дифференцировка побегов, рост клеток листа, биогенез хлоропластов, задержка старения листьев, устьичпыс движения, ответ растений на стресс и многие другие Кулаева 0, . В связи с этим очевидна теоретическая и практическая значимость исследований механизма действия этого класса гормонов. В настоящее время открыты гены первичного ответа на цитокинин. В г. I. i С. Он относится к так называемой двухкомпонентной регуляторной системе, включающей в себя трансмембранный рецептор, который является сенсорной гистидинкиназой, она взаимодействует с цитоплазматическим белком переносчиком фосфатной группировки в ядро на цитокининзависимый трансфактор, включающий гены первичного ответа на цитокинин. Таким образом, мембранный рецептор передает цитокининовый сигнал через сеть внутриклеточных мессенджеров. Показано, что подобная система трансдукции работает и в случае других гормонов растений, например, этилена . . . Однако, в литературе есть данные о содержании цитокининов в цитоплазме, ядре и хлоропластах v . Ivv . v . . В связи с этим, можно предполагать существование альтернативных, внутриклеточных форм рецепторов для этих гормонов. Один из таких белков цитокининсвязывающий белок ЦСБ кД, был выделен из клеток листьев ячменя v . . . Он способен регулировать транскрипцию в системе i vi, содержащей цитокинин. В нашей лаборатории из этиолированных проростков кукурузы также был выделен цитокининсвязывающий белок со свойствами рецептора ЦСБ Бровко Ф. А. и др. К нему была получена панель моноклональных антител, с помощью которых было показано, что ЦСБ имеет общие иммунодетерминанты с ЦСБ, и способен заменять его в опытах по активации транскрипции в системе из листьев ячменя v . . . Внутриклеточный цитокининсвязывающий белок, связываясь с цитокинином, активируется и проникает в ядро или другие ДНКсодержащие органеллы, где принимает участие в регуляции транскрипции.