Изучение альдозоредуктазы из эритроцитов больных инсулинзависимым сахарным диабетом

• Автор: Шоно, Наталья Игоревна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 141 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СОКРАЩЕН 1ИЯ И ОБОЗ 1АЧЕ1ШЯ,РШГЯТЫЕ В ТЕКСТЕ

ДИССЕРТАЦИИ
ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. АЛЬДОЗОРЕДУКТАЗА ЧЕЛОВЕКА И ЖИВОТНЫХ

СВОЙСТВА И РОЛЬ В РАЗВИТИИ ДИАБЕТИЧЕСКИХ ОСЛОЖНЕ1 ГИИ обзор литературы

1. АР ключевой фермент сорбитолового пути утилизации

глюкозы.

2. Выделение и очистка АР человека и животных

3. Физикохимические свойства АР

3.1. Аминокислотный состав молекулы АР.

3.2. Роль аминокислотных остатков в функционировании АР
3.3. Субстратная специфичность АР
3.4. Кинетика ферментативной реакции.
3.5. Активация АР
3.6. Ингибирование АР
4. Роль АР в норме и при сахарном диабете
4.1. Роль АР в физиологических условиях
4.2. Роль АР при сахарном диабете
4.3. Применение ингибиторов АР в лечении осложнении диабета 1 ЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
1. Методы исследований
1.1. Выделение и очистка АР из эритроцитов доноров и больных ИЗСД
1.2. Оценка относительной молекулярной массы АР.
1.3. Определение активности АР и альдегидредуктазы II.
1.4. Кинетические исследования.
1.5. Модификация формы в тиолокисляющими реагентами
1.6. Модификация формы а тиолвосстанавливающими
реагентами
1.7. Модификация форм а и в АР под действием ДТНЬ
II. Характеристика больных ИЗСД.
III. Материалы
ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
I. Формы АР из эритроцитов человека
1. Выделение и очистка АР из эритроцитов человека.
2. Оценка молекулярной массы АР.
3. Определение кинетических параметров форм АР
II. Механизм образования активированной формы а в эритроцитах больных ИЗСД
1. Модификация формы в АР тиолокисляющими
реагентами
2.Модификация формы а АР тиолвосстанавливающими реагентами
III. Исследование БНгрупп АР из эритроцитов доноров и больных ИЗСД
1 .Определение количества БНгрупп денатурированных форм АР
2.Определение количества БНгрупп в нативных формах АР
3.Изучение влияния ДТНБ на каталитическую активность
форм АР.
IV. Наличие форм АР в зависимости от состояния уг леводного обмена и степени развития диабетических осложнений у
больных ИЗСД
У. Исследование АР у больных ИЗСД после операции шунтирования венозного кровооттока поджелудочной железы
1 .Формы АР у больных после операции шунтирования венозного кровооттока поджелудочной железы.
2. Характеристика больных после операции шунтирования венозного кровооттока поджелудочной железы в сравнении с неоперированными больными ИЗСД
3. Характеристика больных ИЗСД до и после операции шунтирования венозного кровооттока поджелудочной железы
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Продемонстрирована связь между присутствием в эритроцитах одной активированной или двух активированной и неактивированной форм АР, состоянием углеводного обмена и степенью выраженности осложнений у больных ИЗСД наличие одной активированной формы фермента обнаружено у больных с более выраженными проявлениями микроангиопатии, полинейропатии и нефропатии по сравнению с больными с двумя формами фермента. Впервые изучены свойства форм АР из эритроцитов больных после хирургического лечения сахарного диабета операции шунтирования венозного кровооттока от поджелудочной железы 6, определены кинетические параметры, характеризующие взаимодействие с глюкозой исследуемых форм фермента, и количество 1групп в их молекулах. Показано, что активированная форма АР у оперированных больных по своим свойствам сходна с неактивированной формой доноров, что может свидетельствовать о менее интенсивном функционировании сорбитолового пути утилизации глюкозы у оперированных больных после хирургического лечения сахарного диабета. Практическое значение работы. Выяснение причин усиления сорбитолового пути утилизации глюкозы в эритроцитах больных ИЗСД может способствовать более глубокому пониманию метаболических нарушений в инсулиннезависимых тканях при сахарном диабете. Раскрытие механизма функционирования и путей регуляции АР при ИЗСД открывает новые перспективы в разработке способов воздействия на фермент с целью его ингибирования и предотвращения развития диабетических осложнений. Выявление форм альдозоредуктазы в эритроцитах больных ИЗСД является одним из критериев тяжести заболевания и может быть использовано для разработки теста эффективности лечения сахарного диабета, который положен в основу методических рекомендаций. Апробация работы. Результаты исследований доложены на 2ом Всероссийском симпозиуме по хирургической эндокринологии Хирургия и диабет. Гормональноактивные опухоли поджелудочной железы Саратов, , на 2ом съезде биохимического общества РАН Москва, , на конференции молодых ученых России с международным участием Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины, посвященной 0легию ММА им. И.М. Сеченова Москва, г. Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 работ. Структура и объем работы. Диссертация изложена на 1 странице машинописного текста, иллюстрирована таблицами, рисунками и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов и их обсуждения, заключения и выводов. Библиография включает 5 ссылок на литературные источники, из них на русском языке. ГЛАВА I. Альдозоредуктаза АР альдитол К.ФЛ. Л. относится к группе зависимых оксидоредуктаз и катализирует реакцию восстановления альдоз до соответствующих многоатомных спиртов, используя в качестве второго субстрата восстановленную форму . АР ключевой фермент сорбитолового пути утилизации глюкозы. Сорбитоловый путь утилизации глюкозы включает в себя две реакции рис. Впервые существование сорбитолового пути обнаружено в году . . в семенных везикулах барана, где единственной гексозой, присутствующей в заметных концентрациях, является фруктоза, образованная из глюкозы через сорбитол 7. АР катализирует первую реакцию сорбитолового пути восстановление глюкозы при использовании . При этом происходит перенос водорода от 1I к альдегидной группе глюкозы. Второй реакцией является окисление сорбитола во фруктозу при участии , катализируемое вторым ферментом данного пути сорбитолдегидрогеназой К. Ф. 1. АР лимитирует скорость функционирования сорбитолового пути, поэтому является его ключевым ферментом . СН. Рис. Сорбитоловыи путь утилизации глюкозы. Выделение и очистка АР человека и животных. Локализация АР в тканях. АР обнаружена во всех инсулиннезависимых тканях человека и животных нервной ткани , , 2, 2, 4, 0, , эритроцитах , 35, 8, плаценте , , 6, 6, структурах глаза , , , , 1, 1, 4, почках 7, 1, клетках сосудов ,, 5, 4, 2, 5. АР локализуется в Шванновских клетках , , 7, 6, 3, 0, 2 и аксонах , 6, 2. В почках АР в основном содержится во внутренней АР и наружней части мозгового вещества фермента, и незначительное количество фермента обнаружено в корковом слое почки 3 7, 1.