Изменения различных классов протеаз и ингибиторов протеаз как возможных сывороточных маркеров фиброза у больных хроническим вирусом С (клинико-экспериментальное исследование)

• Автор: Юзько, Юлия Валерьевна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 104 с. : 33 ил.

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Современное представление о хроническом вирусном гепатите

1.1.1. Клеточные механизмы развития повреждения гепатоцитов и роль

компонентов внеклеточного матрикса

1.2. Биохимическая характеристика и маркеры хронического повреждения печени и развития цирроза у больных ХВГ С

1.2.1. Металлопротеазы и их ингибиторы, роль в повреждении печени

1.2.2. Характеристика сывороточных ингибиторов различных типов протеазЗ

1.2.2.1. Ингибитор сериновых протеаз агпротеиназный ингибитор

1.2.2.2. а2 макроглобулин универсальный ингибитор протеаз

1.2.2.3. Цистатин С эффективный ингибитор цистеиновых протеаз

ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Характеристика больных ХВГ С и циррозом печени
2.2. Экспериментальные модели
2.3. Препаративные процедуры
2.4. Методы исследования
2.4.1. Определение активности РЭгалактозидазы
2.4.2. Определение активности хитотриозидазы
2.4.3. Определение активности ММГ,
2.4.4. Определение активности катепсина В
2.4.5. Определение активности катепсина Ь
2.4.6. Определение активности катепсина Э
2.4.7. Определение содержания белка
2.4.8. Определение активности агпротеиназного ингибитора
2.4.9. Определение активности а2макроглобулина
2.4 Определение содержания ММП
2.4 Определение содержания ТИМП
2.4 Определение содержания цистатина С
2.5. Статистическая обработка результатов
ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1. Лизосомные ферменты, матриксные меаллопротеазы и ингибиторы
протеаз у больных хроническим вирусным гепатитом С
Активность рОгалактозидазы в сыворотке крови больных ХВГ С
Активность хитотриозидазы в сыворотке крови больных ХВГ С
Активность ММП2,7 в сыворотке крови больных ХВГ С
Активность агПИ и МГ в сыворотке крови больных ХВГ С
Концентрация цистатина С в сыворотке крови больных ХВГ С
Концентрация ММП2 в сыворотке крови больных ХВГ С
Концентрация ТИМП1 в сыворотке крови больных ХВГ С
3.2. Лизосомные ферменты, матриксные меаллопротеазы и ингибиторы
протеаз у пациентов с циррозом печени в исходе вирусного гепатита С
Активность рБгалактозидазы и хитотриозидазы в сыворотке крови
больных циррозом печени
Активность ММП2,7 в сыворотке крови больных циррозом печени
Активность арПИ и МГ в сыворотке крови больных циррозом печени
Концентрация ММП2 в сыворотке крови больных циррозом печени
Концентрация ТИМП1 и цистатина С в сыворотке крови больных циррозом печени
3.3. Характеристика нарушений АЛТ, лизосомных ферментов и ТИМП1 у
мышей с острым и хроническим токсическим гепатитами
3.3.1. Изменения активности АЛТ и лизосомных ферментов в сыворотке
крови мышей с острым ССЦгепатитом
Влияние предварительного введения ИФНа на активность АЛТ и лизосомных ферментов в сыворотке крови мышей с острым токсическим ССгепатитом
3.3.2. Характеристика нарушений лизосомных ферментов и ТИМП1 при
хроническом токсическом гепатите у мышей
Активность АЛТ и морфологическая картина срезов печени мышей с
хроническим ССЦгепатитом
Изменения активности РОгалактозидазы в сыворотке крови мышей с
хроническим ССЦгепатитом
Изменения концентрации ТИМП1 в сыворотке крови и ткани печени
мышей с хроническим ССЦгепатитом
Изменения удельной активности катепсинов В, Ь, и Б в гомогенате печени
мышей с хроническим ССЦгепатитом
Влияние ИФНа на активность АЛТ, лизосомных ферментов и содержание ТИМП1 в сыворотке крови и гомогенате печени мышей с хроническим ССЦ
гепатитом
ГЛАВА IV. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
ЛИТЕРАТУРА


Оценить влияние ИФНа на исследованные ферменты и ингибиторы при остром и хроническом токсическом гепатите у мышей. Впервые проведено сравнительное изучение сывороточных маркеров развития фиброза у больных хроническим вирусным гепатитом С и циррозом печени в исходе вирусного гепатита С, в результате которого как наиболее информативные выделены ММП2 и ТИМП1 выявлено значительное снижение сывороточной активности лизосомного фермента рИгалактозидазы на разных стадиях ХВГ С, а также увеличение концентрации ингибитора цистсиновых протеаз цистатина С. На основании изучения различных классов протеаз и их ингибиторов металлопротеаз, цистеиновых и сериновых протеаз установлено, что наибольшим изменениям подвержена ММП2, тесно связанная с формированием фиброза. Для больных циррозом печени в исходе вирусного гепатита С характерны нарушения регуляции ММП, сопровождающиеся повышением активности ММП2,7 и концентрации ММП2 и ТИМП1, связанные с нарушением функционирования компонентов внеклеточного матрикса синтез коллагена и увеличение внеклеточного матрикса в печени. Отмечено повышение активности агпротеиназного ингибитора и хитотриозидазы, отражающих процесс воспаления и формирование фиброза. Клинические исследования, проведенные у больных ХВГ С, подтверждаются данными, полученными в эксперименте. Аналогичные изменения отмечены в сыворотке крови пациентов с ХВГ С. С у больных и метаболитов СС у мышей на клетки печени. Эти изменения свидетельствуют об универсальности механизмов хронического повреждения печени при ХВГ С у больных и в эксперименте. Таким образом, модель хронического токсического гепатита у мышей позволяет изучать механизмы развития хронического повреждения печени и оценивать эффективность препаратов, используемых в лечении вирусных гепатитов у человека. Повышение активности ММП2,7, соотношения ММП2ТИМП1 и хитотриозидазы, наблюдающиеся в сыворотке крови больных хроническим вирусным гепатитом С, являются признаками развития фиброза печени и могут быть использованы как неинвазивные маркеры прогрессирования заболевания. Внедрение. Основные результаты настоящей работы используются в лекционном курсе для студентов лечебного факультета ГОУ ВПО НГМУ по пропедевтике внутренних болезней. Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены на V молодежной научной конференции СО РАМН Фундаментальные и прикладные проблемы современной медицины Новосибирск, V Сибирском физиологическом съезде Томск, X Российской конференции Гепатология сегодня Москва, I Съезде терапевтов Сибири и Дальнего Востока Новосибирск, XII Российской Гастроэнтерологической Неделе Москва, VI Восточносибирской гастроэнтерологической конференции с международным участием Красноярск, VI всероссийской конференции молодых ученых Проблемы фундаментальной и прикладной медицины в рамках
международного конгресса по приполярной медицине Новосибирск, i 7 i ii i, i, Vi, i, i, . Публикации по материалам диссертации опубликована научная работа, в том числе 5 статей, 4 публикации в зарубежной печати. Среди сывороточных ингибиторов протсаз различных классов сериновых, цистеиновых, металлопротеаз для ХВГ С характерно повышение концентрации цистатина С, при отсутствии изменений других ингибиторов ТИМП1, агпротеиназного ингибитора и а2макроглобулина. Развитие фиброза характеризуется повышенной активностью ММП2,7, нарушением соотношения ММП2ТИМП1 в сыворотке крови, повышением активности хитотриозидазы маркера стимуляции макрофагов, которые можно рассматривать в качестве неинвазивных сывороточных показателей развития фиброза. Развитие хронического токсического ССгепатита у мышей сопровождается повышением концентрации ТИМП1, снижением активности цистеиновой протеазы катепсина в ткани печени и снижением активности галактозидазы в сыворотке крови. Однократное введение ИФНа повышает активность цистеиновых катепсинов В и и аспартильной протеазы катепсина , участвующих в деградации компонентов внеклеточного матрикса. Острый токсический ССЦгепатит у мышей характеризуется повышением сывороточной активности хитотриозидазы.