Изменение цитоплазматических и микросомальных белков мозга и печени кур в онтогенезе

• Автор: Макурина, Ольга Николаевна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Куйбышев
• Количество страниц: 228 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ 5

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Строение цитоплазматических и мембранных

белков 9

1.2. Онтогенетическая изменчивость белков

мозга и печени.

2. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Объект исследования .

2.2. Выделение цитоплазматических белков и

фракции микросом.

2.3. Контроль чистоты мембранных фракций .
2.4. Экстракция микросомальных белков.
2.5. Количественное определение белка .
2.6. Фракционирование цитоплазматических
белков методом гельхроматографии
2.7. Электрофорез белков в полиакриламидном
геле
2.8. Изучение метаболизма цитоплазматических
и микросомальных белков .
2.9. Аминокислотный анализ белков .
2 Статистическая обработка результатов .
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Цитоплазматические белки мозга и печени
кур в онтогенезе
3.2. Периферические белки микросом мозга кур
в онтогенезе
3.3. Интегральные тритонрастворимые белки
микросом мозга кур в онтогенезе . 6
3.4. Интегральные ДЦСрастворимые белки
микросом мозга кур в онтогенезе . 6
3.5. Периферические белки микросом печени
кур в онтогенезе 4
3.6. Интегральные тритонрастворимые белки
микросом печени кур в онтогенезе 6
3.7. Интегральные ДЦСрастворимые белки
микросом печени кур в онтогенезе 5
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ 4
5. В Ы В 0 Д Ы 5
ЛИТЕРАТУРА


М I, I М i , 0,1 М ОIаНСо , то остается однородный белок с молекуляр ным весом 0 i , i , . Относительно периферических белков ембран имеются прямые указания на то, что их конформация изменяется под влиянием субстрата и при взаимодействии с ионами , Iii v, . v, , . ЛизТирп , ЛизСерп и полиглутаминовая кислота , имеющие в растворе конформацию статистического клубка, могут адсорбироваться на поверхности электронейтральных везикул, монослоя и бислоя из Ш . , , . Если на поверхности везикул ФХ полипептид ЛизФенп сохраняет конформацию статистического клубка, то при взаимо действии с ФС он переходит в А спираль . I5 . ЛизТир претерпевает при адсорбции конформацион ные изменения, образуя ФХ, ФС или их смеси . I . Уи а Основную массу более белков большинства мембран составляют интегральные белки. Солюбилизация их может осу ществлятьсятолько органическими растворителями или поверх ностноактивными веществами детергентами, и сопровождается разрушением мембран. При выделении они всегда ассоциированы с липидами, а при удалении липидов обычно нерастворимы в нейт ральных буферных растворах. Предполагают, что интактные белки связаны с липидами мембран за счет гидрофобных взаимодействий. Наличие взаимодействия интегральных белков и липидов подтверждается тем обстоятельством, что спектры протонного резонанса диспергированных ультразвуком эритроцитарных мембран, отличающиеся от спектров их липидной дисперсии, вместе с тем иден тичны спектрам их липопротеинов . . Интегральные белки мембран отличаются от водорастворимых белков цитоплазмы как по выполняемым функциям, так и по хими ческому строению. В функциональном отношении интегральные белки ответственны за взаимодействия между внутриклеточными структарами и их окружением, в то время как большая часть раство римых белков выполняет свои функции внутри цитоплазмы единич ной клетки. Рис. I Частично каждая такая молекула внедрена в мембрану, внутренняя часть которой составляет слой толщиной X, состоящий из жидких углеводородов. Ос тальная часть молекулы простирается в водную фазу с одной или обеих сторон мембраны. Изучение локализации и конформации интегральных белков одна из основных проблем современной мембранологии. Однако получение чистых препаратов этих белков, сохраняющих нативную структуру и пригодных для изучения физикохимическими метода ми, представляет собой намного более сложную задачу, чем во дорастворимых белков цитоплазмы. Тот факт, что удачная солюбилизация, многих интегральных белков без потери их биологической активности достигалась методом с использованием детергентов , указывает на то, что белки сохраняли конформацию, близкую к нативной. Следует отметить, что ионогенные детергенты напри мер, ДЦС имеют тенденцию к денатурации белков за счет изменения их структуры. Большинство детергентов, удачных для солюбилизации мембранных белков в их нативном состоянии, представляет собой неионогенные полиоксиэтиленовые детергенты . , 6 Божков и др. структурных белков мембран имеет спиральную конформацию. Предполагают , что способность молекулы мембранного белка приобретать спи ральную конформацию, является необходимым фактором реализации гидрофобных взаимодействий белка с липидами. Не исключено, что спираль белка может глубоко проникать в липидную область и даже пронизывать ее. В связи с этим следует указать на работу ii . , где удалось из внутренней мембраны митохондрий удалить 9Ъ липидов, сохранив при этом структуру мембраны. Жспектры миелина показали полосу поглощения при см , что указывает на наличие спирали белка. Спектр со держит также полосу см, которая вызывается спиралью и р конформацией. В спектре имелась также полоса см, которая связана с , , . ИКспектры эритроцигарных мембран , , , .