Закономерности взаимодействия тяжелых и легких цепей иммуноглобулинов

• Автор: Ибрагимов, Александр Рафаилович
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1985
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 156 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. СТРУКТУРА И ЗАКОНОМЕРНОСТИ

ЭКСПРЕССИИ ИММУНОГЛОБУЛИНОВЫХ ГЕНОВ

1.1. Строение молекулы иммуноглобулина

1.2. Источники разнообразия иммуноглобулинов . .

1.2.1. Генетические элементы, контролирующие образование иммуноглобулинов .

1.2.1.1. Vсегменты

1.2.1.2. сегменты.

1.2.1.3. осегменты

1.2.1.4. Сгены

1.2.2. Разнообразие, возникающее в результате объединения генетических элементов в единый V ген 1д
1.2.2.1. Правило
1.2.2.2. Сочетания генных сегментов
1.2.2.3. Вариации последовательности на участке объединения генных сегментов .
1.2.2.4. Неканонические варианты рекомбинации генных сегментов .
1.2.2.5. Соматические мутации Vгенов . .
1.2.3. Комбинаторика Н и ьцепей как возможный
источник разнообразия иммуноглобулинов .
1.2.3.1. Избирательность объединения Н и ьцепей 1ч
1.2.3.2. Избирательность формирования антигенной структуры иммуноглобулинов . .
1.2.3.3. Избирательность формирования АСЦ .
ГЛАВА П. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ .
2.1. Животные.
2.2. Иммунизация животных.
2.3. Получение иммуносорбентов .
2.4. Получение антител к V и Срайонам иммуноглобулинов мыши
2.5. Иодирование белков
2.6. Радиоиммунологические методы
2.7. Выделение иммуноглобулинов
2.8. Полипептидные цепи иммуноглобулинов .
2.9. Получение рекомбинантных иммуноглобулинов в растворе
2 Фракционирование нормальных ьцепей 1д мыши .
2 Условия культивирования клеток .
2 Слияние лимфоидных клеток
2 Отбор и клонирование антителопродуцирующих клеточных популяций .
ГЛАВА Ш. АССОЦИАЦИЯ ь ЦЕПЕЙ ШЖУНОГЛОБУЛИНОВ В РАСТВОРЕ С ИММОБИЛИЗОВАННЫМИ НЦЕПЯМ.
3.1. Прямая сорбция ь цепей иммуноглобулинов на сорбенте с фиксированной Нцепью
3.2. Конкурентное взаимодействие ьцепей с фиксированной Нцепыо
3.3. Выводы
Стр.
ГЛАВА У. ВОССТАНОВЛЕНИЕ АНТИГЕННОЙ СТРУКТУРЫ VДОМЕНОВ МИЕЛОМНОГО БЕЛКА МОРС РЕКОМБИНАНТНЫМИ ИШУНОГЛОБШНДМИ.
4.1. Антигенная структура Vдоменов д
4.2. ативность рекомбинантных иммуноглобулинов . .
4.3. Антигенная структура V доменов рекомбинантных иммуноглобулинов
4.4. Выводы.4
ГЛАВА У. ВОССТАНОВЛЕНИЕ ИДИОТИПИЧЕСКОЙ СТРУКТУРЫ И
АНТИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ГИБРИДОМНОГО БЕЛКА д В25 РЕКОМБИНАНТНЫМ ИММУНОГЛОБУЛИНАМИ
5.1. Антигенная структура нативного и рекомбинантного дВ2.
5.2. Антигенная структура V доменов рекомбинантных д.
5.3. Антигенсвязывающая активность рекомбинантных
5.4. Выводы.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Научная новизна данной работы заключается в количественной характеристике одного из источников разнообразия 1д . Практическая же ценность работы состоит в освоении перспективного метода биотехнологии гибридомной техники, и получении с помощью этого метода моноклональных антител к фибронектину человека. В настоящем разделе будут даны лишь те сведения о структуре Хд , которые необходимы для изложения материала о структурных генах 1д . Объединение 13 в единое семейство белков основано на их функциональном и структурном родстве. АТ. АТ. Общие структурные свойства, характерные для всех молекул АТ, состоят в следующем рис. В функциональном отношении каждую полипептидкую цепь молекулы АТ можно разделить на две части вариабельную V и постоянную С. В пределах V части выделяются три района, которые носят название гипервариабельных и обозначаются римскими цифрах I, II и Ш, считая от к конца. Vчасть ь цепей можно разбить на два сегмента усегмент и лсегмент V часть Нцепей можно разбить на три сегмента у, в и л сегменты. Эти сегменты были выделены при анализе характера аминокислотных замен, но затем оказалось, что каждый из этих сегментов кодируется отдельным участком ДНК. Полипептидные цепи молекулы ьд имеют доменную организацию. Каждый домен содержит около 0 аминокислотных остатков, одну внутрицепьевую дисульфидную связь все домены имеют определенную гомологию в первичной структуре и сходную пространственную организацию. Рис. Н тяжелые полипептиднке цели цифрами обозначены положения аминокислотных остатков и V вариабельные сегменты а о сегмент в осегмент постоянный домен и цепей Сд1, С2 и СЗ постоянные домены Нцепей ШР шарнирный участок зз дисульфидные связи в пределах V области заштрихованы места локализации гипервариабелькых участков, определяющих структуру ЛСД. Существует два типа ь цепей каппа X и лямбда А различия в аминокислотной последовательности между X и Хцепями составляют около . В отличие от ьцепей, Нцепи могут не отличаться по V части, но различия в строении их Счастей достигают . По характеру аминокислотной последовательности Счасти подразделяются на 5 классов, обозначаемых 1дм, 1дА, 1дс, хдо и 1дв . Соответствующие Нцепи обозначаются греческими буквами уи, , , к В пределах 1до класса молекул выделяются четыре подкласса. Если различия между классами составляют , то различия между подклассами хдо не превышают . Из рис. I видно, что Счасть Нцепи класса содержит три Сдомена, цепь содержит на один домен больше. Антигенсвязывающий центр молекулы АТ строится благодаря взаимодействию двух полипептидных цепей одной в цепи и одной Нцепи. Естественно, что основную роль в построении АСЦ играют гипервариабельные участки обеих цепей. Объединение Н и ьцепей в тетрамерную молекулу не контролируется генетически. II. Молекула д , крупного глобулярного белка, может выступать в роли антигена. Различают 3 типа антигенных детерминант молекулы д изотипы, аялотипы и идиотипы. К изотипам относятся маркеры, присутствующие на 1ч всех особей данного вида. Как правило, они локализованы на Сдоменах и соответствуют классам и подклассам Нцепей и типам ь цепей. Ряд авторов применяют это обозначение и для маркеров V подгрупп Н и ьцепей, представляющих наследуемые варианты, общие для данного вида. К аллотипам относятся антигенные детерминанты, присутствующие на д одних особей данного вида, но отсутствующие у других эти маркеры выявлены как для V , так и для Сдоменов 1д и кодируются аллельными генами. Идиотипические детерминанты локализованы исключительно в V доменах тд, причем либо непосредственно в АСЦ, либо в прилежащих участках, и многие из них имеют сложную конформационную природу, так что их экспрессия I зависит от взаимодействия Н и вцепей д . Определенные идиотипы связаны, как правило, с АТ определенной специфичности. Идиотии представляет собой комплекс индивидуальных антигенных детерминант идиотопов, поэтому в принципе возможны количественные различия в экспрессии идиотипов.