Влияние состава липополисахаридов на характеристики клеточной стенки бактерий

• Автор: Зубова, Светлана Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 95 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список условных сокращений.

Введение

I. Обзор литературы

1. Генетическая связь между фототрофными и другими грамотрицательными бактериями.

2. Биосинтез липополисахаридов

2.1. Структура и биосинтез липида А

2.1.1. Регуляторные пути для модификации липида А.

2.2. Структура и биосинтез олигосахаридов кора.

2.2.1. Хемотипы бактерий

2.2.2. Роль кора в стабильности внешней мембраны глубокий

хемотип
2.3. Структура и биосинтез Оантигена
2.3.1. Транспорт ЛПС из внутренней во внешнюю мембрану
2.3.2. Серотипы бактерий
3. Электроповерхностные свойства грамотрицатсльных бактерий.
4. Высвобождение липополисахаридов из клеточной стенки бактерий.
4.1. Участие белков плазмы крови в высвобождении ЛПС из
клеточной стенки бактерий.
II. Материалы и методы исследования.
Материалы
Объекты исследований
1. Культивирование клеток.
1.1. Культура клеток .
1.2. Культура клеток . i.
2. Метод агглютинации клеток по Линдбергу.
3. Регистрация спектров поглощения клеток .
4. Иммунная электронная микроскопия клеток .
5. Определение электрофоретической подвижности клеток ЭФГ1
6. Выделение липополисахаридов из биомассы бактерий и определение
их качественного состава.
6.1. Получение ЛПС из клеток .
6.2. Получение полисахаридного фрагмента из ЛПС .
методом гидролиза.
6.3. Получение ЛИС из клеток . i.
6.4. Определение чистоты препаратов ЛПС
6.5. Определение качественного состава ЛПС методом
электрофореза
7. Получение антител против ЛПС и ПС из . .
8. Иммунноферментный анализ определения ЛПС
9. Колориметрический метод определения ЛПС с карбоцианиновым
красителем.
. Определение содержания КДО в препаратах ЛПС по реакции с 2тиобарбитуровой кислотой.
. Инкубация клеток . и . i различных хемотипов
с белками плазмы крови
. Определение количества колониеобразующих единиц у клеток . i после
инкубации с белками плазмы крови.
III. Результаты и их обсуждение.
1. Определение хемотипа бактерий . В и .
1.1. Характеристика ЛПС из разных штаммов . .
1.1.1. Изучение возможностей применения
колориметрического метода для определения ЛПС
различной структуры
1.1.2. Сравнительный анализ содержания КДО в препаратах ЛПС
из разных штаммов . .
1.1.3. Сравнительный анализ состава ЛПС различных
штаммов . методом электрофореза
в полиакриламидном геле
2. Исследование электроповерхностных свойств клеток .
и . i различных хемотипов
3. Исследование влияния факторов роста на состав ЛПС клеток
.
4. Влияние хсмотипа бактерий на высвобождение ЛПС из клеточной стенки . и . i под действием различных белков
плазмы крови.
Список литературы


Однако все они характеризуются общей организацией клеточной оболочки, макромолекулярными компонентами которой являются пептидогликан, липопротеины, порины, фосфолипиды, а также ЛПС, занимающие две трети клеточной поверхности . Физикохимический состав и структура клеточной стенки бактерий являются определяющими во взаимодействии с разнообразными факторами внешней среды. Поверхностный заряд, создаваемый структурными компонентами клеточной стенки, влияет на взаимодействие бактериальных клеток с антибиотиками, детергентами и биологически активными молекулами , . ЛПС проявляют различные виды биологической активности только в свободном состоянии Мауеих, . На высвобождение ЛПС из бактерий могут влиять как свойства самой клетки ее жизнеспособность, структура и заряд клеточной стенки, так и внешние факторы, такие как условия роста бактерий и различные внешние агенты. Исследования по этим вопросам носят скорее отрывочный, чем систематический характер. Имеющиеся в литературе данные получены для различных бактерий и штаммов без прослеживания логической связи объектов исследования. Весьма актуальным является изучение зависимости электроповерхностных свойств бактериальных клеток от таких важных характеристик клеточной стенки, как хемотип, поверхностный заряд, плотность упаковки ЛПС в клеточной стенке. Это важно знать для понимания процессов, происходящих при взаимодействии бактерий с катионными белками и антибиотиками, а также при оценке возможной адгезивной и антигенной активности бактерий. Полученные данные могут иметь решающее значение при антибактериальной терапии. Целью настоящей работы явилось изучение влияния состава ЛПС на электроповерхностные характеристики некоторых представителей грамотрицательных бактерий в различных условиях окружающей среды и их способности взаимодействовать с катионными белками плазмы крови в зависимости от хемотипа. . В и . ЛПС клеточной стенки и хемотип клеток . . Е. i и . Впервые определены неописанные ранее хемотипы фототрофных бактерий . В и . . Впервые показано влияние состава ЛПС на электроповерхностные свойства фототрофных бактерий . В и . . Установлена зависимость взаимодействия белков крови с бактериями не только от их хемотипа, но и плотности упаковки ЛПС в клеточной стенке, которая определяется коровой частью ЛПС. Полученные результаты могут иметь решающее значение при антибактериальной терапии. Впервые показана возможность практического применения колориметрического метода с карбоцианиновым красителем для определения ЛПС различной структуры и установления хемотипа бактерий. Методические подходы определения структуры ЛГС и хемотипа грамотрицательных бактерий. Факторы внешней среды влияют на состав и высвобождение ЛПС из клеточной стенки клеток . . Хемотип бактерий . . i влияет на электроповерхностные свойства клеток. Хемотип бактерий играет ведущую роль в высвобождении эндотоксинов из клеточной стенки . и . Материалы диссертации были представлены на международной научной конференции Биотехнология на рубеже двух тысячелетий Саранск, г. VII Всероссийском научном Форуме имени академика В. И. Иоффе с международным участием Дни иммунологии в СанктПетербурге СанктПетербург, г. ММА им. И.М. Сеченова Инфекционные и паразитарные болезни в современном обществе. Клиниколабораторное обеспечение икфектологии Москва, г. Ш Конференции молодых ученых России с международным участием Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины Москва, г. I международной конференции Молекулярная медицина и биобезопасность Москва, г. III Российском конгрессе по патофизиологии Дизрегуляционная патология органов и систем Москва, г. Конференции Фундаментальные науки медицине Программа фундаментальных исследований Президиума РАН Москва, г. II международной научнопрактической конференция Медбиотек2 Перспективы развития биотехнологии в России Пущино, г. XIII Российском национальном конгрессе Человек и лекарство Москва, г. По материалам диссертации опубликовано печатных работ, в том числе 3 статьи в рецензируемых Российских журналах и одна статья принята в печать.