Влияние естественных метаболитов и мышечной деятельности на гликирование белков крыс с индуцированным диабетом

• Автор: Пантелеева, Ирина Геннадьевна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 117 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ .

1.1. Строение и синтез гликированных белков.

1.2. Рецепторы к гликировлнным белкам.

1.3. Метаболизм конечных продуктов глубокого гликирования.

1.4. Роль гликирования в развитии патофизиолог ических процессов в организме

1.5. Методы коррекции уровня гликирования.

1.6. Влияние мышечной деятельности на пикирование белков

2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ .

2.1. Постановка экспериментов на животных.

2.2. Очистка антител к конечным продуктам глубокого гликирования
2.2. . Высаливание сульфатом аммония.
2.2.2. Хроматография на колонке с ДЕАЕцеллюлозой.
2.2.3. Получение аффинного сорбента сефароза 4ВБСА.
2.2.4. Аффинная хроматография антител, специфичных к конечным
продуктам глубокого гликирования
2.2.5. Реакция встречной иммунодиффузии.
2.3. ГЛИКИРОВАТГИЕ ЧСА В СИСТЕМЕ УГЛЮ.
2.4. Получение цитозолей тканей.
2.5. Определение уровня продуктов раннего гликирования методом аффинной хроматографии
2.6. Измерение специфической флюоресценции, обусловленной конечными продуктами глубокого I пикирования
2.7. Определение концентрации белка.
2.8. Определение концентрации глюкозы в крови.
2.9. Определение концентрации общего холестерина в сыворотке крови
2 Определение концентрации триглицеридов в сыворотке
2 Определение концентрации гемоглобинав крови, креатинина, мочевины в сыворотке крови.
2 Статистическая обрабо тка данных
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Разработка метода иммуноферментного анализа определения конечных продуктов глубокого гликирования.
3.2. Влияние диабета и систематической мышечной деятельности на пикирование белков крыс
3.2.1. Влияние диабета и систематической мышечной деятельности на липидный и белковоазотистый метаболизм.
3.2.2. Влияние диабета и систематической мышечной деятельности на гликирование белков крови крыс
3.2.3. Влияние диабета и систематической мышечной деятельности на гликирование белков цитозолей тканей
3.3. Влияние потенциальных ингибиторов на гликирование сывороточного альбумина i vi.
3.4. Влияние введения потенциальных ингибиторов на пикирование белков КРОВИ КРЫС с индуцированным диабетом.
3.4.1. Влияние введения потенциальных ингибиторов гликирования на
липидный и белковоазотистый обмен.
3.4.2. Влияние введения естественных метаболитов на гликирование белков крови крыс
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ . .
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Среди различных соединений, способных подавлять процесс гликирования, внимание привлекают естественные метаболиты. Среди тех карнозин, креатин и витамины В1 и В6, изучение влияния которых на гликирование только началось. Использование физических нагрузок ФН умеренной интенсивности при сахарном диабеге положительно влияет на метаболические процессы организма и способствует повышению утилизации глюкозы для обеспечения мышечной деятельности Касаткина, . Можно предположить, что такие ФН могут ограничивать интенсивность гликирования, однако экспериментально это пока не подтверждено. IIIых мегаболитов. Цель исследования. Цель настоящей работы состояла в исследовании влияния мышечной деятельности и введения естественных метаболитов карнозина, креатина и витаминов В и ВЦ на гликирование белков крыс с индуцированным диабетом. Задачи исследования. Разработать метод иммуноферментного анализа конечных продуктов глубокого гликирования. Исследовать влияние диабета и систематической мышечной деятельности на гликирование белков крови крыс. Исследовать влияние диабета и систематической мышечной деятельности на гликирование белков цитозоля печени, почек, легкого и скелетных мышц крыс. Исследовать влияние естественных метаболитов карнозина, креатина и витаминов В и В6 на процесс гликирования сывороточного альбумина i vi. Исследовать влияние введения потенциальных ингибиторов креатина, карнозина, витаминов и В, на гликирование белков крови крыс с индуцированным диабетом. Научная новизна работы. В диссертации исследованы два возможных подхода к снижению интенсивности процессов гликирования белков в организме. Первый предполагает возможность ингибирования этого процесса путем повышения концентрации низкомолекулярных метаболитов, потенциально способных препятствовать гликированию. В качестве таких ингибиторов были исследованы карнозин, креатин, витамины i иВ6. Второй подход включает усиление утилизации глюкозы при ее использовании в качестве энергетического субстрата для энергообеспечения организма при выполнении мышечной деятельности. В качестве экспериментальных моделей, па которых были изучены эти процессы, были использованы эксперименты по гликированию сывороточного альбумина i vi и исследования на крысах с индуцированным диабетом. В проводимых исследованиях уровень КТТТТ определяли, используя впервые в России метод ИФА, разработанный нами на основе поликлональных антител, специфичных к конечным продуктам пикирования. Впервые в экспериментах на животных с индуцированным с помощью стрептозотоцина СТЗ диабетом было проведено сравнительное исследование уровня пикирования белков в крови и в цитозолях печени, почек, легкого и скелетных мышц по сравнению со здоровыми животными. Полученные данные свидетельствуют о значительном усилении процессов пикирования белков крови в условиях диабета. Установлено, что влияние диабета на пикирование белков цитозоля является тканеспецифическим. В работе впервые было исследовано влияние систематической мышечной деятельности на пикирование белков крови и цитозолей тканей и показано, что систематическая мышечная деятельность оказывает протекторное действие в отношении пикирования белков крови. В модельном эксперименте i vi было изучено влияние естественных метаболитов карнозина, креатина и витаминов В, и В6 на пикирование сывороточного альбумина по сравнению с действием известного ингибитора пикирования аминогуанидина АГ и установлена их способность подавлять образование К1ТГГ. Впервые в эксперименте на животных с индуцированным диабетом изучалось влияние введения карнозина, креатина и витаминов i и В6 на пикирование белков крови. Полученные данные свидетельствуют о различном характере воздействия исследуемых соединений на гликирование белков крови, углеводный обмен и метаболизм в целом. Практическая значимость. Предложенный метод ИФА для определения уровня КПГТ может быть рекомендован к использованию в лабораторных исследованиях процессов гликирования как т уйго, гак и в экспериментах на животных. В6 и В Альцгеймера.