Влияние белков-маркеров роста на функциональные параметры митохондрий

• Автор: Чиванов, Вадим Дмитриевич
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1985
• Место защиты: Киев
• Количество страниц: 162 c. : ил

СОДЕРЖАНИЕ

Список употребляемых сокращений. А

ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ Глава I. Биоэнергетические параметры митохондрий пролиферирующих и закончивших рост тканей.
1. Структурнофункциональные характеристики митохондрий тканей организмов, закончивших роот.

2. Влияние тиоловых соединений на энергетический обмен в митохондриях.

3. Структурнофункциональные характеристики митохондрий пролиферирующих тканей

3.1. Митохондрии организмов, пораженных злокачественными опухолями.

3.2. Митохондрии организмов, находящихся на ранних стадиях постнатального развития

Глава II. Структура и свойства белковмаркеров роста.

1. Иммуноглобулин б характерный для процессов роста. ЗА

2. Глобулин, характерный для процессов роста
3. Влияние БМР и других белков на энергетический
обмен в митохондриях
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ Глава III. Методическая часть.
1. Объект исследования АЗ
2. Методы работы
2.1. Ионообменная хроматографияАА
2.2. Электрофорез. ИммуноэлектрофорезАА
2.3. Выделение митохондрий.АА
2.А. Полярографическая регистрация дыхания митохондрий. Аб
2.5. Определение окислительного фосфорилирования.
2.6. Изучение проницаемости мембран митохондрий
для ионов.
2.7. Получение субмитохондриальных препаратов
2.8. Полярографическое определение УАН, сукцинат
и цитохромсоксидазной активностей.
2.9. Другие методы
Глава У. Влияние белковмаркеров роста на дыхание митохондрий
1. Зависимость действия белковмаркеров роста от источника выделения митохондрий и субстрата окисления.
2. функциональные параметры митохондрий, инкубируемых в присутствии БМР
Глава У. Выяснение механизма действия белковмаркеров роста на энергетический обмен в митохондриях.
1. Изучение в сравнительном аспекте влияния белковмаркеров роста и 2,4динитрофенола на окислительное фосфорилирование в митохондриях.
2. Роль состояния мембран в проявлении действия белковмаркеров роста на функциональные параметры митохондрий.
3. Влияние белковмаркеров роста на структурную целостность митохондрий
Глава У. Участие сульфгкдрильных групп митохондрий в реализации механизма действия белковмаркеров роста на
энергетический обмен
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Так, образование АТР активнее всего идет при окислении янтарной кислоты сукцината, Сукцинат не имеет конкурентов по созданию богатых энергией соединений и связанному с ним фосфорилированию, что обусловлено большей скоростью его окисления по сравнению с МАЯ зависимыми субстратами пируватм, кетоглутаратом, малатом и др. Работами Сбалсе определена локализация трех участков сопряжения в редоксцепи 5,6. Отношение числа молекул АТР, синтезированных в определенный промежуток времени к числу атомов поглощенного кислорода обозначается Р0 С АЯР 0 и характеризует эффективность окислительного фосфорилирования в данном препарате митохондрий. Значение Р0 для ЛАЯ связанных субстратов равняется трем. I ,,4 Следует учесть, что в эксперименте значение Р0 обычно несколько ниже теоретического и зависит как от условия выделения органелл, так и от физиологических особенностей митохондрий данной ткани ,2,7,6,8. Наиболее точные данные, характеризующие функциональное состояние митохондрий, могут быть получены полярографическим методом , позволяющим оценить степень энергизации органелл, эффективность окислительного фосфорилирования АЯ0, интактность мембранного аппарата, а также локализовать повреждения редоксцепи митохондрий при патологиях ,,,,5,6,7,8. Скорость потребления кислорода митохондриями, отражающая функциональное состояние органелл, зависит от наличия в среде инкубации субстратов окисления, акцепторов фосфата и кислорода. Исследуя влияние перечисленных факторов на интенсивность дыхания, ввел представление о пяти состояниях дыхательной цепи, различающихся по скорости дыхания митохондрий, природе факторов, лимитирующих дыхание, а также по состоянию окислениявосстановления переносчиков электронов в редоксцепи 4,5. Метаболическое состояние I регистрируется в отсутствие субстрата окисления и фосфорилирования. Последующее добавление субстрата фосфорилирования акцептора фосфата А Внесение последнего в среду инкубации резко стимулирует дыхание интактных митохондрий, что соответствует состоянию 3 или активному фосфорилирующему состоянию. В состоянии 3 интенсивность дыхания ограничивается скоростью поступления субстрата в органеллы и функциональной интактностью ферментов редоксцепи и НАТРазы. Рис. I. Полярографические кривые, используемые для графических расчетов функциональных параметров митохондрий обозначения см. ЛардиВеллман 9. Наконец, введение в среду инкубации разобщителей окислительного фосфорилирования переводит митохондрии в состояние Зр 5рис. I, а. Работами Кондрашовой и др. АЗР и после его исчерпания, поскольку между указанными состояниями существуют различия в накоплении АТР и уровне сукцината. АТР и сукцинат создают предпосылки для усиления восстановительных процессов и позволяют дифференцировать состояния 4п покой до внесения АОР и состояние 4о отдых после превращения всего АОР в АТР . Соотношение Vи Vявляется чувствительным показателем сдвига метаболического состояния митохондрий к низкоэнергетическому. V 0 или Цп ,. Полярографическим методом легко определить коэффициент эффективности окислительного фосфорилирования по количеству кислорода, поглощенного митохондриями за период времени, необходимый даяфосфорилирования строго определенного количества АЗР1 Метод достаточно корректен лишь для прочно сопряженных митохондрий . В противном случае необходимо использовать прямой метод определения фосфорилирующей активности, основанный на измерении убыли неорганического фосфата Р из среды инкубации . Степень сопряжения окисления с фосфорилированием в митохондриях характеризуется отношением з0 именуемом коэффициентом дыхательного контроля по ЧансуВильямсу КДКч5. Прочное сопряжение в интактных митохондриях создает условия, при которых скорость окисления субстратов регулируется самой клеткой, ее потребностью в энергии в данный момент времени, а дыхательный контроль, таким образом, представляет собй важнейший регуляторный механизм, ответственный за поддержание энергетического баланса клетки 9,4. УУО , поскольку неоднократно показано, что интактные свежевыделенные митохондрии, в достаточной мере снабженные кислородом и субстратом окисления, активно поглощают кислород только в присутствии АЗР и