Биохимическая характеристика естественных антител к простагландину F2 α

• Автор: Киселев, Игорь Петрович
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 100 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Эндогенные низкомолекулярные биорегуляторы группы простагландинов

1.1.1. Общая характеристика простагландинов.

1.1.2. Основные этапы биосинтеза и метаболизма простагландинов

1.1.3. Биологическая активность простагландинов.

1.2. Естественные антитела природа их антигенных мишеней, иммунохимические свойства, происхождение и функциональная реактивность.

1.2.1. Естественные антитела к макромолекулярным соединениям

1.2.2. Антиидиотипические естественные антитела.

1.2.3. Естественные антитела к низкомолекулярным соединениям

1.2.4. Иммунохимические свойства естественных антител.
1.2.5. Происхождение естественных антител, их связь с индуцированными антителами и аутоантителами при патологических состояниях
1.2.6. Физиологические функции естественных антител.ЗI
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Материалы исследований.
2.2. Методы исследований
2.3. Синтез конъюгированных антигенов простагландина Р2а с бычьим
сывороточным альбумином
2.4. Синтез сорбента для аффинного выделения из сыворотки крови
антител к простагландину р2а
2.5. Применение аффинной хроматографи для выделения антител
к простагландину 2 из сыворотки крови.
2.5.1. Выделение антител к простагландину 2 из индивидуальных сывороток крови здоровых доноров и нормальных кроликов
с помощью аффинной хромаго рафии
2.5.2. Аффинное выделение антител к простагландину 2 из пула
сывороток крови линейных мышей.
2.6. Ферментативный гидролиз пепсином аффиино выделенных
антител к простагландину 2.
2.7. Методика проведения иммуноферментного анализа.
2.7.1. Типовая схема твердофазного ИФА.
2.7.2. Проведение ингибиторного ИФА и определение с его помощью
аффинности и специфичности антител к простагландину 2а
2.7.3. Сэндвичвариант твердофазного ИФА.
2.8. Статистическая обработка результатов
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Получение конъюгированных антигенов простагландина
с бычьим сывороточным альбумином.
3.2. Получение сорбента для аффинной хроматографии.
3.3. Выделение антител к простагландину i из сыворотки крови
с помощью аффинной хроматографии.
3.4. Исследование иммунохимических свойств
естественных антител к простагландину га
3.4.1. Определение оптимальных условий проведения иммуноферментного
анализа аффинно выделенных антител к простагландину р2й
3.4.2. Определение количественного содержания и изотопического состава аффинно выделенных антител к простагландину
3.4.3. Локализация эпитопов антигена, взаимодействующих с аффинно выделенными иммуноглобулинами к простагландину 2.
3.4.4. Определение константы аффинности выделенных к простагландину 2 естественных антител в реакции связывания с гаптеном.
3.4.5. Изучение специфичности естественных антител,
аффинно очищенных к простагландину i.
3.4.6. Выявление связывающей способности субмолекулярных 2 и фрагментов антител к прос тагландину 2,
выделенных с помощью аффинной хроматографии
3.5. Изучение антител к простагландину 2 при изменении
его содержания в организме.
3.5.1. Индукция изменений в составе популяции антител
к простагландину 2 в модельной системе.
3.5.2. Влияние плотности эпитопов антигена на выявление антител
к простагландину 2и твердофазным ИФА
3.5.3. Исследование активации синтеза естественных антител к простагландину р2а при некоторых заболеваниях человека, характеризующихся повышенным содержанием этого биорегулятора в организме.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.
ВВЕДЕНИЕ


Эти иммуноглобулины продуцируются нормальными Вклстками в отсутствии антигенной стимуляции. Изучение гуморального иммунитета традиционно основывалось на модели индуцированного иммунизацией антителообразования, тогда как вопрос о функционировании иммуноглобулинов и секретирующих их Влимфоцитов в норме долгое время не привлекал особого внимания исследователей. Однако, к середине х годов был накоплен обширный фактический материал, свидетельствующий о присутствии в нормальных биологических организмах иммуноглобулинов к большому количеству аутологичных тканевых антигенов, клеток и клеточных структур, высокомолекулярных соединений и ряду низкомолекулярных веществ. Полученные данные свидетельствовали о важной физиологической роли естественных антител в обеспечении нормальной жизнедеятельности организма. Высокая биологическая активность эндогенных низкомолекулярных соединений группы простаглаидинов ПГ, являющихся универсальными медиаторами различных физиологических процессов, послужила основанием для проведения исследований по выявлению и изучению ЕАТ к этим соединениям. Можно ожидать, что связывание ЕАТ с такими биорегуляторами будет оказывать влияние на физиологические реакции организма. Учитывая актуальность рассматриваемой научной проблемы как для теоретических аспектов биохимии и иммунологии, так и для практической медицины, в настоящей работе была предпринята попытка выявления и изучения естественных антител к низкомолекулярному эндогенному биорегулятору Простагландину 2, который является медиатором различных физиологических процессов, обладающим высокой биологической активностью. Цель данной работы заключается в изучении биохимических свойств естественных антител к простагландину 2 на основе использования различных вариантов твердофазного иммупоферментного анализа. Научная новизна работы. Изучение свойств этих иммуноглобулинов позволило установить их принадлежность к истинным антителам, специфично связывающим простагландин 2 своим активным центром РаЬ2фрагментом, причем такое связывание характеризуется определенной константой аффинности от x4 М 1 до 6х6 М. Обнаружено увеличение содержания антител к простагландину 2 при инфаркте миокарда, а также при интегументной и системной формах красной волчанки. Показана целесообразность определения антител к простагландину 2 при указанных заболеваниях, обусловленная значительным увеличением выявления количества пациентов с нарушением гуморального иммунитета. Практическая ценность работы. Полученные в настоящей работе результаты по выявлению уровня антител к простагландину 2 используются с г. Нижегородском научноисследовательском кожновенерологическом институте в целях дополнительного диагностического тестирования и мониторинга иммунного статуса больных красной волчанкой. Определение содержания антиППантител применяется с г. Купавна при изучении влияния на организм человека препаратов, разрабатываемых для лечения заболеваний, связанных с нарушением обмена простагландина Б2а Анализ динамики содержания антител к простагландину Р2а применяется с г. Апробация работы. Международном конгрессе Современные методы диагностики и лечения аллергии, астмы и иммунодефицитов г. Тбилиси, год. Международном конгрессе Биокатализ Москва, год. В сыворотке крови здоровых людей и нормальных животных обнаружено наличие естественных антител к эндогенному низкомолекулярному биорегулятору простагландину Б2а с помощью метода твердофазного иммуноферментиого анализа. Исследованы биохимические свойства аффинно очищенных естественных антител к простагландину Бга, определено их количественное содержание в сыворотке крови, изучена специфичность, рассчитана константа аффинности, установлена их связывающая способность с антигеном на субмолекулярном уровне. Проведен сравнительный анализ содержания антител к простагландину Бг в сыворотке крови здоровых доноров и больных сердечнососудистыми и аутоиммунными заболеваниями. Показано, что увеличение уровня простагландина Б2 в организме вызывает активацию синтеза естественных антител к нему.