Белки хроматина бобовых. Антигенные свойства и гетерогенность по составу электрофоретических компонентов

• Автор: Жебентяева, Татьяна Николаевна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1983
• Место защиты: Ленинград
• Количество страниц: 152 c. : ил

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Состав и структура хроматина.

1.2. Негистоновые белки хроматина.

1.3. Основные белки хроматина гистоны.

1.4. Антигенные свойства белков в составе хроматина

1.5. Антигенная специфичность гистонов.

1.6. Заключение

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Характеристика мате риала.

2.2. Выделение и фракционирование хроматина
2.1.1. Выделение хроматина
2.2.2. Фракционирование хроматина ультрацентрифугированием
2.2.3. Выделение дезоксирибонуклеопротеида ДНП
2.2.4. Выделение суммарного гистона.
2.3. Фракционирование гистонов.
2.3.1. Фракционирование гистонов последовательным экстрагированием
2.3.2. Ионообменная хроматография гистонов на КМцеллюлозе
2.3.3. Гельфильтрация гистонов на биогеле Р
2.4. Иммунохимические методы.
2.4.1. Получение иммунных сывороток.
2.4.2. Двойная иммунодиффузия в геле
2.5. Электрофоретические методы
2.5.1. ДЦСэлектрофорез белков хроматина
2.5.2. Электрофорез белков хроматина в ПААГе в присутствии цетавлона.
2.5.3. Электрофорез гистонов в ПААГе
2.5.4. Двумерный электрофорез гистонов в ПААГе
2.5.5. Идентификация гистонов на электрофореграм
2.6. Заключение
Стр.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
3.1. Антигенные свойства хроматина бобовых
3.2. Антигенные свойства гистонов и негистоновых белков в составе хроматина бобовых.
3.3. Антигенные свойства и специфичность очищенных фракций гистонов бобовых
3.4. Сравнительный иммунохимический анализ гистонов бобовых и злаков
3.5. Гетерогенность гистонов бобовых и злаков по
данным электрофоретического анализа
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
4.1. Антигенные свойства и гетерогенность гистонов бобовых
4.2. Специфичность антигенных детерминант белков хроматина бобовых
ВЫВОДЫ.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОШЗБДАЦИЙ
ЛИТЕРАТУРА


Самнера Бостон К. Самнер Э. I.3. Одной из характерных черт гистонов является их эволюционная консервативность. СДнако, темпы эволюции отдельных фракций существенно различаются Петров Н. Б. и др. i . ., i н. Важно отметить также, что посттрансляционные модификации гистонов могут значительно увеличивать их вариабельность . . , i . . , . Таблица . З. Характеристика гистонов тимуса теленка Бостон К. Самнер Э. Гистон Отношение Отношение основные аминокислотыкислые аминокислоты Мол. НЗ И Н4 . . . . . . . Гистон 4. При электрофорезе гистон Н4 инвариантен у широкого крута объектов, включая растения и животных i . ., vi н. . . . i . ix . . , и беспозвоночных животных . . . . . . . Так, 4 фракция морского ежа и теленка отличаются одной аминокислотой . . . . Аминокислотные замены в гистоне Н4 консервативны и на конформацию молекулы в растворе, как показало изучение вторичной структуры, не ВЛИЯЮТ Ы. При анализе первичной структуры в работах указанных выше авторов отмечалось, что гистон Н4 гомогенен. РНК этой фракции, из которых в цитоплазме транслируется лишь один тип мРНК i . . . Гетерогенность 4 обусловлена, главным образом, пострансляционными модификациями молекулы. Теоретически возможно существование 0 молекулярных типов этой фракции . i . . , . При исследовании мест посттрансляционных модификаций оказалось, однако, что они происходят в определенных участках на н конце молекулы, который, как полагают, взаимодействует С ДНК i . Так, в гистоне Н4 разного происхождения ацетилируются остатки лизина в позициях 5, 8, И . . . . . . i Е. Р.Ы. ix . vi Б. Н. . . . . Фосфатные группы могут присоединяться к остаткам гистидина в и позициях, а также серина в М. ix . . , i . . . . . , i . i . . . . . ., i . ., . Таким образом, число молекулярных типов гистона Н4, возникающих в результате посттрансляционных модификаций, ограничено и, по всей вероятности, не обеспечивает специфическую резтуляцию генной активности в ядре. Гистон НЗ. Гистон НЗ, как и Н4, инвариантен при электрофорезе у позвоночных и беспозвоночных животных, а различия между животными и растениями выявляются лишь при проведении статистического анализа i . . Первичная структура гистона НЗ почти не изменилась в ходе эволюции позвоночных животных. . . . . . , v . Всего 3 аминокислотных остатков отличается при сравнении НЗ из тимуса теленка и проростков гороха . . . . . По данным некоторых авторов эти замены не отражаются на вторичной структуре молекулы М. Гистон НЗ у животных и растений гетерогенен. Одной из причин гетерогенности являются посттрансляционные модификации. Они происходят, как и в гистоне Н4, в определенных участках полипепТИДНОЙ цепи на конце молекулы . . , i . . , ii о. Ii . У млекопитающих гистон НЗ ацетилируется в И ПОЗИЦИЯХ i i . V. . , . . , i . . , , фосфорилированню подвергается серии в и позициях м. ix . . , . . . . . , i . У большинства изученных видов, в том числе и растений, метилируются остатки лизина в 9 и позициях , а в некоторых тканях позвоночных лизин в позиции . ., i . ., Xii 0. Ii . Гетерогенность гистона НЗ обусловлена также вариациями первичной структуры, что приводит к существованию нескольких типов молекул с единичными аминокислотными заменами. Она выявлена у ряда позвоночных и беспозвоночных животных ii 0. Ii . НЗ содержит в позиции аланин, серии .