Аутоантитела к белкам нервной ткани при болезни Вильсона-Коновалова

• Автор: Усанова, Мария Павловна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 126 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список условных сокращений

Введение.

Глава 1. Обзор литературы .

1.1. Аутоантитела к нейроантигенам

при неврологических заболеваниях.

1.1.1 .Естественные антитела и их роль.

1.1.2.Аутоантитела при неврологических заболеваниях

1.1.2.1. Миастения грэвис

1.1.2.2. Синдром ЛамбераИ гона

1.1.2.3. Синдром ГийенаЬарре.

1.1.2.4. Рассеянный склероз
1.1.2.5. Болезнь Альцгеймера.
9 .
1.1.2.6. Болезнь Паркинсона л
1.1.3. Методы специфической иммунокоррекции
1.2. Болезнь ВильсонаКоновалова.
1.2.1. Генетика
1.2.2. Молекулярная генетика.
1.2.3. Патогенез.
1.2.4. Диагностика и лечение.
1.3. Заключение
Глава 2. Материалы и методы
2.1. Получение тканевых экстрактов и фракций
солюбилизированных мембран.
2.2. Ионообменная хроматография
2.3. Аффинная хроматография
2.4. Обращеннофазовая гидрофобная хроматография
2.5. Гельфильтрация.
2.6. Электрофоретическое разделение белков.
2.6.1. Электрофоретическое разделение белков в присутствии БОБ.
2.7. Твердофазный иммуноферментый анализ
2.7.1. Стандартизация методов иммуноферментного анализа.
2.8. Иммуноблоттинг.
2.9. Определение аминокислотной последовательности белков
2 Иммунизация животных и получение антисывороток
2олучение РаЬ2фра 1ментов
специфических антиидиотипических антител
2 Характеристика клинического материала.
2 Статистическая обработка результатов
Глава 3. Идентификация и очистка белков НЬтр1 и НЬтр2
Глава 4. Изучение сывороточных аутоантител к НЬтр1, НЬтр2 и другим белкам нервной ткани при болезни ВильсонаКоновалова и
друшх неврологических заболеваниях
Глава 5. Изучение специфической иммунокоррекции пшерпродукции
аутоантитсл на экспериментальных моделях
Глава 6. Обсуждение результатов.
Список литературы


В ряде работ было показано, что обработка срезов нервной ткани сыворотками пациентов с болезнью ВильсонаКоновалова и последующее проведение непрямой реакции Купца приводит к интенсивному свечению срезов Ганнушкина и др. Патогенное воздействие сывороток пациентов с данным заболеванием на ткань мозга было продемонстрировано в исследованиях И В. Ганнушкиной, показавшей, что инкубация кулыур нервной ткани с сыворотками больных ГДЦ приводит к патоморфологическим изменениям Ганушкина, Сухорукова и др. К сожалению, конкретные антигены нервных клеток, являющиеся мишенями аутоантител при болезни ВильсонаКоновалова, идентифицированы не были. В настоящее время основные усилия исследователей сосредоточены на других вопросах патогенеза болезни ВильсонаКоновалова, в первую очередь на генетических аспектах болезни . . При этом проблема иммунообусловленных нейродеструктивных процессов при ГДЦ остается нерешенной. Цель и задачи исследования. Идентифицировать в ткани мозга человека белковые антигены, являющиеся мишеныо аутоантител при болезни ВильсонаКоновалова. Разработать схемы очистки выявленных белковых антигенов, определить аминокислотную последовательность их Мконцевых участков. Изучить динамику повышения титров аутоантител к полученным белкам при различных формах и стадиях болезни ВильсонаКоновалова. Изучить уровни аутоантител к полученным белкам при болезни ВильсонаКоновалова в комплексе с уровнями аутоантитсл к ряду известных белков нервной ткани. Отработать подходы к специфической ингибицми повышенной продукции аутоашител к полученным белкам. Научная новизна работы. В ткани мозга человека идентифицированы два белка, обозначенные как НЬтр1 и НЬтр2, повышение уровня аутоаитител к которым характерно для болезни ВильсонаКоновалова. Разработаны методы их очистки. Установлена последовательность аминокислот Оконца субъединицы НЬтр1, а также НЫпр2. Гомологичных последовательностей среди известных белков не выявлено, на основании чего было сделано предположение о том, что полученные белки являются неописанными ранее. Установлено, что повышение уровнен аутоантитсл к белку НЬтр1 является специфическим признаком болезни ВильсонаКоновалова. Показано существование корреляции между уровнями аутоантнтел к белкам НЬтр1 и НЬтр2 с одной стороны и тяжестью и формой заболевания с другой. Показано значительное повышение уровня аутоантител к белку НЬтр1 незадолго до проявления клинических признаков поражения ЦНС при болезни ВильсонаКоновалова. Отработаны подходы к специфической иммунокоррекции 1 ииерпродукции аутоаитител к НЬтр1. Практический значимость работы. Результаты, полученные в ходе работы, могут использоваться в лабораторной и клинической практике при разработке новых диагностических подходов для оценки состояния пациентов с болезнью ВильсонаКоновалова. Приготовлены стандарты высокоочишенных препаратов НЬтр1 и ПЬтр2. Разработаны иммуноферментные тестсистемы для определения антител к белкам НЬтр1 и НЬтр2. Показана значимость определения сывороточных аутоантител к полученным белкам для диагностики форм и течения болезни ВильсонаКоновалова. Показана диагностическая значимость определения аутоаитител к НЬтр1 у пациентов с отсутствием неврологической симптоматики при болезни ВильсонаКоновалова. Продемонстрирована возможность специфической иммунокоррекции гипрепродукции аутоантител к белку НЬтр1. Показано, что интраназальное применение НаЬ2фрагментов антиидиотипических антител оказывает более выраженное иммуносунрессивное действие на гилерпродукцию антител к НЬтр1, чем применение самого белка. Л пробачия диссертационного материала. Основные положения диссертационной работы представлены на 1 Всероссийской конференции Нейронммуноиатология Москва, г. ООО г. ИБМХ РАМН и ГКБ Комитета здравоохранения г. Москвы. Автор выражает глубокую признательность научному руководителю д. Морозову С. Г., научному консультанту к. Полещуку В В. ГКБЛ, коллективу МЭФ ЧернобыльТест директор д. А.Б. НИИ неврологии РАМИ зав. ИвановаСмоленская И. А., к. Калинину А. В. МГУ, коллективу Учебнонаучного центра ИБХ РАИ, в соавторстве с которыми выполнен ряд разделов данной работы.